背景 这份基本药物清单由 WSAVA 治疗指南小组 (TGG) 成员在经过广泛的内部和外部同行评审后提出。内部同行评审由 TGG 成员及其小组委员会提供,而外部同行评审则由董事会认证的个人和其他 WSAVA 工作/指南小组进行。该文件的初稿在多伦多举行的 WSAVA 年会 (2019) 上提出,随后进行了为期三个月的审核,在此期间,WSAVA 会员分支机构被要求提供意见、建议和总体反馈。然后,TGG 仔细考虑了这些意见。最终清单是经过几轮修订并基于专家共识的产物。这份基本药物清单应允许兽医对狗和猫最常见和最重要的疾病提供适当的预防护理和治疗,同时保持适当的动物福利标准。该清单的目的是改善和促进监管监督,以确保适当的药物供应、药物质量、使用和药物警戒,同时减轻日益增长的药品黑市/假冒市场。基本药物清单并非旨在定义诊所/医院内应始终提供哪些药物;而是指兽医在预防和治疗特定疾病和病症时应能够随时获得这些药物。此外,委员会明白,没有“一刀切”的药物,可能存在清单未涵盖的某些国家用于地方病/流行病的特定药物。例如,基本抗菌药物被定义为推荐作为治疗至少一种常见疾病的一线药物的药物。
对于 HRM 检测,采用补充表 S1 中报告的优化内含子引物。PCR 在 20 μ L 中进行,其中包含 100 ng DNA、0.5 单位 HotStart Taq 聚合酶以及 1x 缓冲液(Qiagen,德国希尔登)、1.5 mM MgCl 2、800 μ M dNTP、300 nM 每种引物和 1x EvaGreen(Idaho Technologies,犹他州盐湖城)作为插入染料。循环和 HRM 分析在 Rotor-Gene ™ 6000 实时分析仪上进行,采用以下热方案:95°C 持续 15 分钟(一个循环);95°C 持续 30 秒,55°C 持续 30 秒,72°C 持续 30 秒(50 个循环);72°C 持续 10 分钟(一个循环);熔化温度从 85°C 升至 95°C,每秒上升 0.1°C。使用相关的 Rotor-Gene ™ 6000 系列软件 (v1.7.87) 分析数据。标准化条在前导范围的 88°C 和 88.5°C 之间,在尾随范围的 92.5°C 和 93°C 之间,置信阈值为 90%:如果 HRM 图超出了指定参考基因型的置信范围,则软件会将样本识别为变异。图 S1A 显示了健康受试者和 3 名 MPN 患者的 DNA 样本的 HRM 图谱,这些样本先前已通过微电子微芯片分析进行了基因分型(未显示数据)。患者 PV02_113 为 MPL (W515K) 纯合子(TGG>AAG 转换),其 HRM 曲线相对于野生型序列向左移向较低温度,这与纯合变体导致熔解温度 (Tm) 降低的预期一致。患者 PV04_494 为 MPL (W515A) 纯合子(TGG>GCG 转换)等位基因
比较 EnGen Spy Cas9 NLS、EnGen Spy Cas9 HF1 和其他市售高保真 Cas9 变体的引导 RNA 序列与靶 DNA 序列之间的错配容忍度。允许编码与荧光标记的 dsDNA 底物单、双或三错配的几种引导 RNA 之一与五种 Cas9 变体中的每一种形成核糖核蛋白 (RNP) 复合物。包括完全匹配的引导 RNA 作为对照。将 RNP 与底物以 2:1 的比例在 37°C 下孵育 5 分钟。通过毛细管电泳测量每个 RNP 复合物的底物裂解百分比。结果绘制为热图,白色表示无裂解,蓝色强度增加表示裂解百分比增加。每行均标明引导 RNA 序列,错配以绿色表示。 DNA 原型间隔序列为 5´ – AGAACTGGCAGAGGAGGTAG – 3´,原型间隔相邻基序 (PAM) 为 5´– TGG – 3´。EnGen Spy Cas9 HF1 显示出最高的靶向切割与平均脱靶切割比率,从而表明对错配的敏感性增加。
比较 EnGen Spy Cas9 NLS、EnGen Spy Cas9 HF1 和其他市售高保真 Cas9 变体的引导 RNA 序列与靶 DNA 序列之间的错配容忍度。允许编码与荧光标记的 dsDNA 底物单、双或三错配的几种引导 RNA 之一与五种 Cas9 变体中的每一种形成核糖核蛋白 (RNP) 复合物。包括完全匹配的引导 RNA 作为对照。将 RNP 与底物以 2:1 的比例在 37°C 下孵育 5 分钟。通过毛细管电泳测量每个 RNP 复合物的底物裂解百分比。结果绘制为热图,白色表示无裂解,蓝色强度增加表示裂解百分比增加。每行均标明引导 RNA 序列,错配以绿色表示。 DNA 原型间隔序列为 5´ – AGAACTGGCAGAGGAGGTAG – 3´,原型间隔相邻基序 (PAM) 为 5´– TGG – 3´。EnGen Spy Cas9 HF1 显示出最高的靶向切割与平均脱靶切割比率,从而表明对错配的敏感性增加。
比较Engen间谍Cas9 NLS,Engen Spy Cas9 HF1的指南RNA序列和目标DNA序列之间的不匹配的耐受性,以及其他商业可用的高保真cas9变体。与荧光标记的DsDNA底物编码单个,双或三倍不匹配的几个指南RNA之一,可以与五个Cas9变体中的每一个形成核糖核蛋白(RNP)复合物。将完全匹配的导向RNA作为对照包括。将RNP与底物在37°C下以2:1的比率孵育5分钟。通过毛细管电泳测量每个RNP复合物的底物裂解百分比。的结果是作为热图的图形图形,白色代表没有裂解和蓝色强度的增加,表明裂解百分比增加。指南RNA序列在每一行中指示,并以绿色表示不匹配。DNA原始序列序列为5´ - agaactggcagagaggagggtag - 3´,而原始的邻接基序(PAM)为5´– TGG - 3´。Engen间谍Cas9 HF1通过显示出靶向裂解与平均脱靶裂解的最大比例,表现出对不匹配的敏感性提高。
c-flqfr r rrgf“ tfuefhd \ rflalfrftst” tftqt {{n e ft tb。 div>{tt 4r {.. t.ll. div>,, t:,gi_t“ ir [。 div>pl \ tton I是T,\ nl。] T. div>: HBSAG-400/-Hbsag Rapid Test-450/-Hbeag-6001 Anti-Hbe-6001 Anti-HBS-700/-Anti-HBC (total) -600/-Anti-H Bcigm-700/-Anti-HCV-700/-Anti-Hcv Rapid Test750/-Anti-HV LGM-7001 Anti-Hev IGM-7001 Toli. div> (。1,t,{} -1。抗CMV I,EM-700/-ANTI-HSVI IgG-7001抗HSV2 IGG-700/-ARTI-HSVI IGM-700/-ARTI-HSVI IGM-700/-ANTI-HSV2仅IgG(5个测试)-3000^ Torch LGC + LGM(10个测试)-6000/-llty L)。 \\ 患病的。 div> :arti-htv(l+2)-600/-anti-fllv(1+2)快速测试-6001 o-r'h lit \ 1,\ tk [] LGM (2 TESTS) -1200/- DENGUE AB+ NS1 AG+ Chikungunya LGM (3 TESTS) -1800/- Chlamydia Antibody-7 20/- Measles, Munrps, Rubella (MMR) Altibody Test (3 TESTS) -2600/- Anti Epstein Barr Virus (EBV) IGM-950/- Anti Varicella (Chickenpox) IgG-950/ - 抗Munrps IgG-950/ - 抗麻疹IgM-9501-抗麻疹IgG-950/ -: HBSAG-400/-Hbsag Rapid Test-450/-Hbeag-6001 Anti-Hbe-6001 Anti-HBS-700/-Anti-HBC (total) -600/-Anti-H Bcigm-700/-Anti-HCV-700/-Anti-Hcv Rapid Test750/-Anti-HV LGM-7001 Anti-Hev IGM-7001 Toli. div>(。1,t,{} -1。抗CMV I,EM-700/-ANTI-HSVI IgG-7001抗HSV2 IGG-700/-ARTI-HSVI IGM-700/-ARTI-HSVI IGM-700/-ANTI-HSV2仅IgG(5个测试)-3000^ Torch LGC + LGM(10个测试)-6000/-llty L)。 \\ 患病的。 div>:arti-htv(l+2)-600/-anti-fllv(1+2)快速测试-6001 o-r'h lit \ 1,\ tk [] LGM (2 TESTS) -1200/- DENGUE AB+ NS1 AG+ Chikungunya LGM (3 TESTS) -1800/- Chlamydia Antibody-7 20/- Measles, Munrps, Rubella (MMR) Altibody Test (3 TESTS) -2600/- Anti Epstein Barr Virus (EBV) IGM-950/- Anti Varicella (Chickenpox) IgG-950/ - 抗Munrps IgG-950/ - 抗麻疹IgM-9501-抗麻疹IgG-950/ -
2024 年 4 月至 6 月。1. 背景我们是一个由专家和创新者组成的全球团队,致力于解决世界上一些最紧迫的健康挑战。我们与全球的领导者和变革者合作,将健康战略付诸实践。我们提供想法、建议和技术知识,使我们的合作伙伴能够建立持久变革的道路。凭借 30 年的全球健康经验,我们与合作伙伴合作探索现有证据、结合专业知识、扩大想法并共同创造加速变革的解决方案。这包括合作制定政策、管理举措、建立强大的联盟和激发社会运动。我们的影响遍及整个社区,重点关注妇女、女孩和那些被边缘化的人。作为 MSI 生殖选择的一部分,我们所有的利润都将用于支持 MSI 自己的使命,即让孩子自主选择,而不是随机选择。我们相信,在这样一个世界里,每个人都可以获得他们需要的高质量医疗服务,而没有经济负担。女孩一代 (TGG):支持非洲主导的终止女性生殖器切割运动计划,是一个由 Options Consultancy Services 领导的联盟,成员包括 Amref Health Africa、ActionAid、Orchid Project、非洲废除女性生殖器切割协调中心和朴茨茅斯大学。它与人口理事会数据中心(该计划的数据和测量部门)密切合作。该计划设想了一个女孩和妇女可以行使权力和权利、拥有更多选择和行动权并免受包括女性生殖器切割在内的暴力侵害的世界。
在这项研究中,我们生成并比较了三个针对马铃薯(卵巢结核)制成的胞苷碱基编辑器(CBE),该量子量其最多赋予了原生质体池中所有等位基因的43%C-T转换。早些时候,基因编辑的马铃薯植物是通过聚乙烯二烯介导的CRISPR/CAS9转化原生质体的转化而成功产生的。在一项研究中,通过用内源性马铃薯ST U6启动子替换U6-1启动子的标准拟南芥,从而获得了3 - 4倍的编辑效率。在这里,我们使用了这种优化的构建体(SP Cas9/ st u6-1 :: grna1,Target GRNA序列GGTC 4 C 5 TTGGAGC 12 AAAAAC 17 TGG)用于生成CBES量身定制的马铃薯,并测试了用于C-T碱基编辑的CBES在Granule-Bounchase-bound starch synthase 1 Gene中的C-T碱基编辑。首先,将链球菌CAS9转化为(D10A)Nickase(NCAS9)。接下来,来自人hapobec3a(A3a),大鼠(EVO_RAPOBEC1)(RA1)或Sea Lamprey(EVO_ PM CDA1)(CDA1)的三种胞质脱氨酶之一(cda1)与NCAS9和A尿素 - DNA Glycosylase融合了C-Encas9(CDA1)与每种模块化的链接。CBE的总体高度有效,A3A具有最佳的总体基础编辑活动,平均为34.5%,34.5%和27%的C-T转换为C4,C5和C12,而CDA1的平均基础编辑活动的平均基础编辑活性为34.5%,34%,34.5%,14.25%C4和C4,C4和C4,C4和C4,C4和C4,C4。ra1在C4和C5时表现出平均基础编辑活性为18.75%,19%的基础编辑活动,是唯一在C12时显示C-TO-T转换的基本编辑器。
莱茵衣藻中的乙酰辅酶a羧化酶(CrACCase)是一种编码三酰甘油(TAG)和脂质(油体)合成的基因。CrACCase基因研究很少,尚未进行过计算机或体内遗传改造。在本研究中,我们为基因组编辑,特别是CrACCase提供了生物信息学精确信息。本研究旨在构建sgRNA并预测CrACCase假定突变蛋白的功能区域。根据分子鉴定结果,可以对最佳的CrACCase(GeneBank XM_001703135)进行计算机遗传改造。本研究中最佳的潜在 sgRNA 构建体为 GCGTCTGCTCAATCACACGGCGG、TTGAGGTCGGAACTCCAGCGG 和 AGGCAATACCCTCAATTGGGTGG,效率值分别为 79.27%、68.25% 和 65.17%。获得的最佳寡核苷酸 sgRNA 具有一个带有 NGG 的原间隔区相邻基序 (PAM) 位点,尤其是 CGG 和 TGG 的形式。工程化的 CrACCase 基因突变的位置位于莱茵衣藻基因组的 XM_001703135.1:1089 区域,尤其是在负链中。预测 CrACCase 蛋白具有 ACC 的羧基转移酶亚基、假定 PCC 的羧基转移酶亚基、酵母乙酰辅酶 A 羧化酶的人源化羧基转移酶结构域和乙酰辅酶 A 羧化酶的结构。 CrACCase 基因中的移码突变的变化影响了残基 D:C 92、95、111 和 114 处配体-蛋白结合位点功能区的结构变化,这些位点是锌离子结合位点。这种结构变化导致 CrACCase 蛋白的功能发生变化。这种生物信息学信息对于将来对 CrACCase 进行体内基因组编辑非常重要,这样就可以获得具有最高 TAG 产量或最高生物柴油(油体)产量的突变体。分子生物学家和生物技术专家可以将对莱茵衣藻中 CrACCase 基因的操纵应用于脂质百分比最高的其他微藻生物,以增加未来的生物能源产量。