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和高血压诱导的心力衰竭
摘要：肌肉营养不良（MDS）是肌病的异质群，其特征是进行性肌肉无力导致心脏或呼吸衰竭导致死亡。MD是由参与肌肉纤维发育和组织的基因突变引起的。到目前为止，已经开发了几种具有MD相关基因突变的亚型模型。与啮齿动物一起，斑马鱼是用于重现MD的最流行的动物模型之一，因为与人类基因组具有高序列同源性及其遗传性可操作性。本综述描述了MD的最重要的斑马鱼突变体模型以及用于生成和表征所有这些有价值的转基因线的最先进的工具。通过将突变引入具有不同遗传技术的肌肉特异性基因，例如（i）N-乙基n-硝基库（ENU）治疗，（ii）注入了基于（III）TOL2 TOL2 TOR2 TORMES，（III）TALENEN，（IV）TALEN，（IV）TALEN，（IV）TALEN，（IV）TALEN，（IIV）。所有这些模型都被广泛用于研究肌肉发育和功能或了解MDS的致病机制。还开发了几种工具来通过检查（i）运动行为，（ii）肌肉结构，（iii）氧化应激以及（iv）线粒体功能和动力学来表征这些斑马鱼模型。此外，基于在肌肉特异性启动子或响应元素控制下荧光报告蛋白表达的活物生物传感器模型已被发现是在单个肌肉纤维水平上遵循分子动力学的强大工具。因此，MD的斑马鱼模型也可以成为寻找能够阻止或减慢疾病进展的新药或基因疗法的强大工具。
论文内容的摘要
[纸质评论摘要] 1。文章内容本文通过使用TOL2 transposon将导向RNA（GRNA）敲入基因组来建立了一种方便地创建条件敲除小鼠的方法。 2.纸质评论1）为研究目的而开创性和独创性，使用特定周期和组织特异性的条件敲除小鼠至关重要，以分析单个水平的基因功能。但是，传统的CRE/LOXP方法需要多种小鼠菌株的交配，这需要时间和精力。在此背景下，申请人结合了三个现有系统：转座系统，CRE/LOXP系统和CRISPR/CAS9系统，以建立一个系统，允许在短时间内更加方便地创建有条件的淘汰小鼠。这种观点值得认可。 2）社会意义从这项研究中获得的主要结果如下。 1。cag-creer小鼠和rosa-lsl-cas9敲入小鼠被体外受精，质粒和TOL2转座子mRNA，其在TOL2识别序列中夹在小鼠酪氨酸酶的GRNA之间的序列，将Tyr GRNA插入了Born Born Rece的6.3％-13.6％中。 2。当他对出生的小鼠施用他莫昔芬时，在某些情况下观察到头发颜色的变化有限。 3。在三只小鼠（TG1、2、3）中观察到缺失和插入3.1％，6.8％和7.5％的酪氨酸酶基因。 4。当F0雄性小鼠交配时，11.1％的F1小鼠显示GRNA盒传播。如上所述，申请人已经建立了一个系统，该系统允许在短时间内更方便，更简单地创建有条件的敲除小鼠。可以说这是一项有用的研究发现，可以加速个人水平的基因的功能分析。 3）在这项研究中，使用T7分析和深层测序分析了GRNA的基因组裂解，并使用PCR或Southern印迹分析了下一代小鼠中GRNA盒的传播。这种方法是在足够的分子生物学实验技术的支持下进行的，这表明申请人的知识和技术技能在研究方法上足够高，同时可以看出，这项研究是在非常谨慎的准备中进行的。
居里基金会项目确定...的机制
项目 确定斑马鱼受伤后控制心脏成功再生的机制 描述 心脏的再生能力在动物界中差异很大。包括人类在内的哺乳动物在心脏受伤（心脏病发作）后再生反应较差。因此，由于缺乏直接针对受伤原因的治疗，患者常常会出现并发症。另一方面，斑马鱼在受伤后表现出非凡的自然再生心脏的能力。因此，通过确定驱动积极再生反应的斑马鱼因素和机制，我们可以潜在地利用这些知识并将其应用于表现出较差再生反应的动物，以新疗法和新疗法的形式。在这个项目中，我们将结合基因操控和先进的实时成像技术来识别和控制心脏再生过程中重要的细胞潜在因素。因此，该项目将为单个细胞内以及细胞之间的复杂相互作用提供新的见解，以成功完成再生。技术 克隆、免疫荧光、RNA 原位杂交、基因操作（RNA、crispr、tol2、突变体、转基因）、斑马鱼处理、活体共聚焦成像 参考文献 doi: 10.1126/science.abo6718 doi: 10.1242/dev.199740 doi: 10.1016/j.ydbio.2020.12.004 联系方式 Phong NGUYEN 遗传学和发育生物学 UMR3215/U934 单位 电子邮箱：phong.nguyen@curie.fr 电话：+33 (0) 156246897 网站：htps://insutut-curie.org/equipe/nguyen
在自然短的时间内进行快速、精确的基因组工程
引言：研究脊椎动物的衰老和疾病等复杂生物表型受到规模和速度问题的限制。例如，小鼠天生的长寿命和低通量特性阻碍了迭代遗传学和脊椎动物生物学探索。非洲绿松石鳉鱼 Notho-branchius furzeri（以下简称鳉鱼）因其性成熟时间短（孵化后 3-4 周）和自然压缩的寿命（4-6 个月）而成为克服这一挑战和加速发现的有力模型（ Hu and Brunet，2018 ；Kim et al.，2016 ）。鳉鱼是实验室培育的脊椎动物模型系统中世代时间最短的（2 个月）( Hu and Brunet，2018 ；Kim et al.，2016 ；Pola čik et al.，2016 )，从而使快速脊椎动物遗传学成为可能。已经开发出一些用于推进鳉鱼遗传研究的工具，包括基因组测序（Reichwald 等人，2015 年；Valenzano 等人，2015 年）、Tol2 转基因（Allard 等人，2013 年；Hartmann 和 Englert，2012 年；Valenzano 等人，2011 年）、CRISPR/Cas9 介导的敲除（Harel 等人，2015 年）和 CRISPR/Cas13 介导的敲低（Kushawah 等人，2020 年）。这种遗传工具包使得人们能够发现衰老的机制（Astre 等人，2022a；Bradshaw 等人，2022；Chen 等人，2022；Harel 等人，2022；Louka 等人，2022；Matsui 等人，2019；Smith 等人，2017；Van
在子宫内电穿孔中，多d缩的基因组 -
位于小鼠大脑皮层中的原生质星形胶质细胞（PRA）紧密并置，在成人阶段形成了明显连续的三维基质。到目前为止，没有免疫染色策略可以将它们单一单一的策略和在成熟动物和皮质生成过程中的形态进行分割。皮质PRA起源于背胸膜中的祖细胞，可以轻松地使用整合载体的子宫电穿孔来靶向。这里提出了一项方案，该方案将这些细胞用可抑制基因组融合的颜色（魔术）标记策略标记，该策略依赖于PiggyBac/ tol2换位和CRE/ LOX重组以随机表达明显的荧光蛋白（蓝色，氰基，黄色和红色），以特定于特异性的亚细胞界面。这种多色命运映射策略使在胶片发生开始之前与颜色标记物的结合可以标记附近的皮质祖细胞，并跟踪其后代，包括星形胶质细胞，从胚胎到各个细胞水平的成人阶段。半parse标记通过调整电穿孔矢量的浓度和颜色对比度的浓度，该颜色可通过多种基因组整合的颜色标记（魔术标记或MM）提供，使星体胶质细胞个性化并将其领土和复杂的形态单一单一单一单一单独化。是一个全面的实验工作流程，包括电穿孔程序的详细信息，通过共聚焦显微镜进行多通道图像堆栈以及计算机辅助的三维分割，这将使实验者能够评估单个PRA的体积和形态。总而言之，魔术标记的电穿孔提供了一种方便的方法，可以单独标记许多星形胶质细胞并在不同的发育阶段访问其解剖特征。该技术对于分析各种小鼠模型中的皮质星形胶质细胞形态特性将是有用的，而无需诉诸于具有转基因报告基因的复杂杂交。