包含超级PCR缓冲液和添加剂,可快速循环并直接将反应载入琼脂糖凝胶上。还包含TAQ DNA聚合酶和聚合酶与校对能力以及DNTP混合的混合物。抗体介导的聚合酶和校对活性的热启动特征需要3分钟,93°C的孵育步骤。
14。基因组DNA纯化试剂盒•试剂盒应适用于哺乳动物培养基细胞,细菌,酵母和组织样品进行基因组DNA净化。•套件必须适合纯化GDNA,终点PCR,QPCR和NGS的库准备应用。•套件与旋转结肠技术一起使用。•套件含量应为50个反应。•组织裂解缓冲液(12mL),GDNA结合缓冲液(24ml),GDNA洗涤缓冲液(1 8ml),GDNA 80ml(14ml),自旋柱(50件),自旋收集管(50片),proteinase K(0.55ml)和RNase A(0.55ml)和RNase A A和RNase A (0.17毫升)应具有满足感。15。热启动TAQ DNA聚合酶•酶200单位(5000单位/ml)和0.04ml的0.04ml。•基于适体的抑制作用。•最多5 kb的目标应适用于LAN的放大。•酶热启动功能。•5'皮瓣必须具有IndonuctLease活性。•除了酶外,还应应为1 .5ml 10x标准TAQ反应缓冲液。
使用HSOP 461和HSOP 466(Spectratating GuideLine),使用T细胞的磁珠细胞分选 T细胞受体谱分型。 使用商业试剂盒(QIAGEN)的RNA提取以及遵循制造商的说明和内部标准操作程序HSOP499。 Reverse transcription for cDNA synthesis using commercial kit (Invitrogen) and in-house standard operating procedures HSOP 780 RT-PCR using HSOP 467 Fragment analysis HSOP 468 AutoMACS Pro (MiltenyiBiotec), GorScript TM First-Strand Synthesis System for RT-PCR (Promega), QiagenHot Star Taq DNA Polymerase, G Storm 4 PCR machine and Proflex机器,3500XL遗传分析仪(FSOP 491)。T细胞受体谱分型。使用商业试剂盒(QIAGEN)的RNA提取以及遵循制造商的说明和内部标准操作程序HSOP499。Reverse transcription for cDNA synthesis using commercial kit (Invitrogen) and in-house standard operating procedures HSOP 780 RT-PCR using HSOP 467 Fragment analysis HSOP 468 AutoMACS Pro (MiltenyiBiotec), GorScript TM First-Strand Synthesis System for RT-PCR (Promega), QiagenHot Star Taq DNA Polymerase, G Storm 4 PCR machine and Proflex机器,3500XL遗传分析仪(FSOP 491)。
themus aquaticus,重组,大肠杆菌描述:TAQ IN是用于常规PCR反应的建议的DNA聚合酶。它被优化为高特异性,并确保最少的非特异性产品形成。建议基于牙菌斑和自动移液的PCR进行缓冲系统。复制性DNA活性发生在72°C。在镁存在下,在5'-3'的方向上将核苷酸聚合催化。它也取决于聚合的方向5'-3'的核酸酶活性,但不存在3'-5'核酸外切酶活性。
过程:插入酶速度分子的核苷酸的数量:在时间单位中插入酶分子的核苷酸的数量。在最佳条件下,taq每10个6个基地都会出错,在正常情况下,每1000- 10 5个基地1。•由于Fe 2+的存在,金属离子,芳香族化合物或染料而抑制过多的DNA或RNA,血红蛋白。•cosolventi降低变性温度并节省酶。更多地使用了DMSO,甘油,甲酰胺(CG富含CG)。甘油的10% + 5%甲酰胺允许您降低退火
ScienCell 绝对大鼠线粒体 DNA 拷贝数定量 qPCR 检测试剂盒 (ARMQ) 旨在直接比较样本的平均 mtDNA 拷贝数。大鼠 mtDNA 引物组可识别并扩增大鼠 mtDNA 上最保守的区域之一,并且不会扩增核基因组 DNA 上的任何脱靶序列。单拷贝参考 (SCR) 引物组可识别并扩增大鼠 17 号染色体上 100 bp 长的区域,并作为数据标准化的参考。已知 mtDNA 拷贝数的参考基因组 DNA 样本可作为计算目标样本 mtDNA 拷贝数的参考。精心设计的引物确保:(i) 高效,实现可靠的定量;(ii) 无非特异性扩增。每个引物组都已通过 qPCR 验证,包括熔解曲线分析和凝胶电泳,以确保扩增特异性,并通过模板连续稀释来验证扩增效率。 2X GoldNStart TaqGreen qPCR Master Mix(目录号:MB6018a-1)是一种基于 SYBR ® Green 染料的 qPCR Master Mix,具有“热启动”特性。它在单个试管中包含 SYBR ® Green、dNTP、Taq DNA 聚合酶和惰性金色上样指示剂。通过 ScienCell 独特的化学修饰 Taq DNA 聚合酶实现的“热启动”特性可最大程度地抑制引物二聚体的形成。先进的缓冲液配方具有出色的特异性和效率,线性动态范围宽。惰性金色上样指示剂可更好地可视化和跟踪 qPCR 板或试管中的样品上样情况。
ScienCell 绝对大鼠线粒体 DNA 拷贝数定量 qPCR 检测试剂盒 (ARMQ) 旨在直接比较样本的平均 mtDNA 拷贝数。大鼠 mtDNA 引物组可识别并扩增大鼠 mtDNA 上最保守的区域之一,并且不会扩增核基因组 DNA 上的任何脱靶序列。单拷贝参考 (SCR) 引物组可识别并扩增大鼠 17 号染色体上 100 bp 长的区域,并作为数据标准化的参考。已知 mtDNA 拷贝数的参考基因组 DNA 样本可作为计算目标样本 mtDNA 拷贝数的参考。精心设计的引物确保:(i) 高效,实现可靠的定量;(ii) 无非特异性扩增。每个引物组都已通过 qPCR 验证,包括熔解曲线分析和凝胶电泳,以确保扩增特异性,并通过模板连续稀释来验证扩增效率。 2X GoldNStart TaqGreen qPCR Master Mix(目录号:MB6018a-1)是一种基于 SYBR ® Green 染料的 qPCR Master Mix,具有“热启动”特性。它在单个试管中包含 SYBR ® Green、dNTP、Taq DNA 聚合酶和惰性金色上样指示剂。通过 ScienCell 独特的化学修饰 Taq DNA 聚合酶实现的“热启动”特性可最大程度地抑制引物二聚体的形成。先进的缓冲液配方具有出色的特异性和效率,线性动态范围宽。惰性金色上样指示剂可更好地可视化和跟踪 qPCR 板或试管中的样品上样情况。
Sciencell的绝对大鼠线粒体DNA拷贝数定量QPCR测定试剂盒(ARMQ)旨在直接比较样品的平均mtDNA拷贝数。大鼠mtDNA底漆集识别并放大了大鼠mtDNA上最保守的区域之一,并且不会放大核基因组DNA上的任何脱靶序列。单复制参考(SCR)引物集识别并放大了大鼠染色体17的100 bp长区域,并用作数据归一化的参考。具有已知mtDNA拷贝数的参考基因组DNA样品是计算目标样品的mtDNA拷贝数的参考。精心设计的底漆可确保:(i)值得信赖的量化效率高; (ii)没有非特异性扩增。通过QPCR验证了每个底漆集,并通过熔融曲线分析和凝胶电泳进行了扩增特异性,并通过模板系列稀释来验证。2倍Goldnstart Taqgreen QPCR Master Mix(CAT#MB6018A-1)是SYBR®基于绿色染料的QPCR主混合物,具有“热启动”属性。它包含单个管中的SYBR®绿色,DNTP,TAQ DNA聚合酶和惰性金色载荷指示器。通过Sciencell独特的化学化学TAQ DNA聚合酶实现的“热启动”特性提供了对引物二聚体形成的最大抑制作用。高级缓冲仪公式提供了较高的特异性和效率,并具有较宽的线性动态范围。惰性金色加载指示器允许在QPCR板或试管中更好地可视化和跟踪样品加载。
我们旨在使用肥胖的Zucker糖尿病脂肪(ZDF)大鼠作为2型糖尿病模型来研究布洛芬对2型糖尿病(T2D)的治疗潜力。ZDF大鼠是高血糖,血脂异常和表达的临界标记,与瘦门控制相反,因此反映了肥胖与促进T2D的慢性炎症之间的关系。慢性治疗(2-(4-异丁基苯基)丙酸)用于研究对病理T2D条件的影响。布洛芬降低了A1c,但仅在早期时间点(I.G.,15和30分钟)后诱导高胰岛素释放,导致AUC值的降低并转化为高HOMA-IR。此外,布洛芬显着降低了胆固醇,游离脂肪酸和HDL-C。通过抑制细胞因子/趋化因子信号传导(i.g,cox-2,icam-1和tnf-a),这可能是基于其抗炎性效应,如全血液和taq man和/inti in-flimotial cy的全血和附子性脂肪组织中所测量的(i.g,cox-2,icam-1和tnf-a)。血液中的ELISA分析。 总而言之,我们的ZDF动物研究表明,布洛芬对糖尿病并发症(例如炎症和血脂异常)的积极作用,但也表现出引起胰岛素抵抗的风险。通过抑制细胞因子/趋化因子信号传导(i.g,cox-2,icam-1和tnf-a),这可能是基于其抗炎性效应,如全血液和taq man和/inti in-flimotial cy的全血和附子性脂肪组织中所测量的(i.g,cox-2,icam-1和tnf-a)。血液中的ELISA分析。总而言之,我们的ZDF动物研究表明,布洛芬对糖尿病并发症(例如炎症和血脂异常)的积极作用,但也表现出引起胰岛素抵抗的风险。