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通过标记辅助QHIR1和QHIR8在玉米中加速单倍诱导率和单倍体验证
双倍（DH）技术更常规地应用于玉米杂种繁殖中。但是，单倍诱导和识别的某些问题持续存在，需要解决以优化DH生产。我们的目标是使用taqman测定法实施QHIR1（MTL/ ZMPLA1/ NLD）和QHIR8（ZMDMP）的同时进行标记辅助选择（MAS），以在F 2代生成四个BHI306衍生的热带热带×温度诱导剂中。我们还旨在评估F 3代的单倍体诱导率（HIR）作为对MAS的表型反应。我们强调了每个诱导剂家族的HIR的显着增加。携带QHIR1和QHIR8的基因型比仅携带QHIR1的基因型表现出1-3倍的单倍体频率。此外，QHIR1标记还用于在种植后7天验证推定的单倍体幼苗。流式细胞仪分析是评估R1-NJ和QHIR1标记的准确性的黄金标准测试。QHIR1标记显示出很高的精度，并且可以在早期幼苗阶段通过R1-NJ标记在早期幼苗阶段进行多个单倍体识别。
热启动 TTx (DNA) 试剂盒 - 使用说明书 KOD
此外，TTx DNA 聚合酶具有 5'-3' 外切酶活性，因此可用于使用探针分析（如 TaqMan ® 分析）的实时 PCR。该酶含有中和抗体，因此允许进行热启动 PCR。特点 - 卓越的 DNA 扩增效率基于 TTx DNA 聚合酶优化了反应组成。TTx DNA 聚合酶比通用酶（如 Taq DNA 聚合酶和 Tth DNA 聚合酶）具有更高的延伸能力，TTx DNA 聚合酶即使在快速循环条件下也能实现高效的 PCR。 - 耐受 PCR 抑制剂该试剂盒可有效从粗样品（例如生物样本、食品、土壤提取物等）中进行扩增。从全血进行扩增时，无需纯化核酸，直接将其加入反应溶液中即可实现充分的扩增。 - dUTP 的利用 本试剂盒含有 dUTP 而不是 dTTP，用于 rTth/TTx (DNA) 的 2x 缓冲液。因此，通过添加尿嘧啶-N-糖基化酶 (UNG) 可以降低假阳性检测率。 *本试剂盒不提供 UNG。本试剂盒包含以下成分，可用于 250 次反应，总反应体积为 20 μL。所有试剂应储存在 -20°C 下。
利用 CRISPR-Cas9 同时进行 HDR 过表达和 NHEJ 抑制，在杨树中进行精确的外源插入和序列替换
CRISPR 介导的基因组编辑已成为生物性状遗传修饰的有力工具。然而，开发基于同源定向 DNA 修复 (HDR) 的高效、位点特异性基因敲入系统仍然是植物面临的重大挑战，尤其是在杨树等木本植物中。本文表明，同时抑制非同源末端连接 (NHEJ) 重组辅因子 XRCC4 和过度表达 HDR 增强因子 CtIP 和 MRE11 可以提高基因敲入的 HDR 效率。使用这种方法，BleoR 基因被整合到 MKK2 MAP 激酶基因的 3' 端以产生 BleoR-MKK2 融合蛋白。根据 TaqMan 实时 PCR 评估的完全编辑核苷酸，与没有 HDR 增强或 NHEJ 沉默相比，当使用 XRCC4 沉默结合 CtIP 和 MRE11 过度表达时，HDR 介导的敲入效率高达 48%。此外，HDR 增强子过表达和 NHEJ 抑制的组合还提高了基因组靶向效率，使 CRISPR 诱导的插入和缺失 (InDels) 减少了 7 倍，从而对杨树中基于 MKK2 的盐胁迫反应没有功能性影响。因此，这种方法不仅适用于杨树和植物或农作物，也适用于哺乳动物，以提高 CRISPR 介导的基因敲入效率。
利用 CRISPR-Cas9 同时进行 HDR 过表达和 NHEJ 抑制，在杨树中进行精确的外源插入和序列替换
CRISPR 介导的基因组编辑已成为生物性状遗传修饰的有力工具。然而，开发基于同源定向 DNA 修复 (HDR) 的高效、位点特异性基因敲入系统仍然是植物面临的重大挑战，尤其是在杨树等木本植物中。本文表明，同时抑制非同源末端连接 (NHEJ) 重组辅因子 XRCC4 和过度表达 HDR 增强因子 CtIP 和 MRE11 可以提高基因敲入的 HDR 效率。使用这种方法，BleoR 基因被整合到 MKK2 MAP 激酶基因的 3' 端以产生 BleoR-MKK2 融合蛋白。根据 TaqMan 实时 PCR 评估的完全编辑核苷酸，与没有 HDR 增强或 NHEJ 沉默相比，当使用 XRCC4 沉默结合 CtIP 和 MRE11 过度表达时，HDR 介导的敲入效率高达 48%。此外，HDR 增强子过表达和 NHEJ 抑制的组合还提高了基因组靶向效率，使 CRISPR 诱导的插入和缺失 (InDels) 减少了 7 倍，从而对杨树中基于 MKK2 的盐胁迫反应没有功能性影响。因此，这种方法不仅适用于杨树和植物或农作物，也适用于哺乳动物，以提高 CRISPR 介导的基因敲入效率。
开发基于Taqman-MGB探针的实时定量PCR，以快速检测Haneyi
摘要：马匹质质症（EP）是由Theileria Equi（T。Equi），Babesia Caballi（B。Caballi）和Theileria haneyi（T. Haneyi）引起的寄生疾病。这种疾病被世界动物健康组织（WOAH）认为是可报告的。实时定量PCR（QPCR）被认为是一种直接，快速和敏感的诊断方法，可检测病原体。但是，QPCR尚未用于Haneyi的各种流行病学研究中。在这项研究中，我们开发了一种新的QPCR方法来检测基于CHR1SCO（染色体1染色体单拷贝开放式阅读框（ORF））基因的Haneyi，该基因在T. equi或B. caballi中没有可检测到的直系同源物。用于开发QPCR分析的Taqman MGB探针。构建了含有CHR1SCO基因的质粒并用于建立标准曲线。 新型的QPCR技术证明了出色的特殊特异性，用于检测其他频繁的马传染病和敏感性，以检测稀释的标准质粒。 在分析96个临床样品中，通过与优化的嵌套PCR（NPCR）测定进行比较，进一步验证了该QPCR。 NPCR分析与已建立的QPCR分析之间的协议为85.42％。 新建立的方法可能有助于准确诊断马匹中的Haneyi感染。构建了含有CHR1SCO基因的质粒并用于建立标准曲线。新型的QPCR技术证明了出色的特殊特异性，用于检测其他频繁的马传染病和敏感性，以检测稀释的标准质粒。在分析96个临床样品中，通过与优化的嵌套PCR（NPCR）测定进行比较，进一步验证了该QPCR。NPCR分析与已建立的QPCR分析之间的协议为85.42％。新建立的方法可能有助于准确诊断马匹中的Haneyi感染。
Peterson等。补充材料S1。 DNA ... SARS-COV-2血清阳性和疫苗在马拉维的第一产前护理访问中的孕妇
补充材料S1。DNA提取和RT-PCR基因组DNA。然后在双链taqman QPCR中运行基因组DNA，该QPCR放大了T. cruzi rDNA基因2的24S alpha亚基的175bp序列。根据制造商的说明，使用FastStart Universal Probe Master（Roche）在CFX384触摸实时PCR循环仪（Bio-Rad）上进行定量实时PCR。所有反应的反应混合物包括10μl快速概要探针主，0.25μlHEX标记的探针，0.15μl家族标记的探针，1.8μlD75B引物，1.8μLD76BD76B DY76B Primer，3μL水，3μl水，和3μl植物瘤DNA。样品以阴性和阳性对照的重复运行。循环条件在95°C下的初始步骤为10分钟，在95°C下循环30s和60°C，持续1分钟。T。cruzi，量化周期（C Q）值为31.1和31.3；而阳性对照的C值为25和29.58（图s1）。这些值表明在测定中检测到目标序列的循环数量，总体而言，37岁以下的C Q值被认为是阳性的。
DNA聚合酶I
蛋白浓度（OD 280）由OD 280吸光度确定。物理纯度，然后进行银色染色检测。通过比较浓缩样品中污染物带的聚集质量与稀释样品中蛋白蛋白蛋白带的质量来评估纯度。单链核酸酶在含有放射性标记的单链DNA底物的50 µL反应中确定，在37°C下孵育4小时4小时。双链外切核酸酶在50 µL反应中确定，该反应含有放射性标记的双链DNA底物和10 µL的酶溶液在37°C下孵育4小时。双链核酸内切酶在50 µL反应中确定，该反应含有0.5 µg质粒DNA和10 µL的酶溶液在37°C下孵育4小时。e.coli 16S rDNA污染使用5 µL R含量的酶溶液的样品变性并在Taqman QPCR测定中筛选，以使用污染的大肠杆菌基因组DNA，使用寡核苷酸引物污染了与16S rRNA locus相对应的寡核苷酸引物。提供：25mm Tris-HCl，1mm DTT，0.1mm EDTA，50％甘油（25°C时pH 7.4）。提供：10倍蓝色缓冲区（B0110）：500mm NaCl，100mm Tris-HCl，100mm MGCL 2，10mm DTT（25 c）pH 7.9 pH 7.9）。用法说明：5´-overhang（1）
CYP3A5 RS776746和...
1。分子和细胞遗传学实验室（LGMC），科学与技术大学Oran Mohamed Boudiaf（USTO-MB），BP 1505，El M'Naouer，Algeria 31000 Oran。2。奥兰大学医学院药学系1艾哈格里亚奥兰31000艾伦·本·贝拉。3。细胞遗传学和分子生物学服务，Oran-University医院建立（EHUO）。4。奥兰生物科学（ESSBO）的上级学校，BP 1042，Saim Mohamed 31003，奥兰，阿尔及利亚。 5。 奥兰大学自然与生命科学学院生物技术系1艾哈迈德·本·贝拉（Ahmed Ben Bella），阿尔及利亚奥兰（Oran）31000。 摘要简介：药物遗传学标志物，例如ATP结合盒（ABCB1）和细胞色素P450（CYP）3A5 eN-eNZymes，通过基于个体或人群的遗传变异来影响药物有效和毒性，在个性化医学中起着至关重要的作用。 这项研究旨在研究西阿尔格尔人人口中CYP3A5（RS776746）和ABCB1（RS1045642）的遗传多态性，以及与各个种族的基因型和ALIC分布。 方法：该研究涉及472名来自西阿尔及利亚人口的无关健康受试者。 DNA基因分型是使用Taqman染色测定法进行的。 我们人口中的变异与1000个基因组项目中其他种族中的变体相比。 这些频率与北非人群中观察到的频率相似，而与某些白种人和非洲人群相比，观察到显着差异。奥兰生物科学（ESSBO）的上级学校，BP 1042，Saim Mohamed 31003，奥兰，阿尔及利亚。5。奥兰大学自然与生命科学学院生物技术系1艾哈迈德·本·贝拉（Ahmed Ben Bella），阿尔及利亚奥兰（Oran）31000。摘要简介：药物遗传学标志物，例如ATP结合盒（ABCB1）和细胞色素P450（CYP）3A5 eN-eNZymes，通过基于个体或人群的遗传变异来影响药物有效和毒性，在个性化医学中起着至关重要的作用。这项研究旨在研究西阿尔格尔人人口中CYP3A5（RS776746）和ABCB1（RS1045642）的遗传多态性，以及与各个种族的基因型和ALIC分布。方法：该研究涉及472名来自西阿尔及利亚人口的无关健康受试者。DNA基因分型是使用Taqman染色测定法进行的。我们人口中的变异与1000个基因组项目中其他种族中的变体相比。这些频率与北非人群中观察到的频率相似，而与某些白种人和非洲人群相比，观察到显着差异。基因型和等位基因频率，而HARTY-WEINBERG平衡（HWE）结果：CYP3A5 6986A的次要等位基因频率为0.21，而ABCB1 3435T的频率为0.21。结论：这些多态性的等位基因和基因型分布的差异强调了由CYP3A5代谢并由ABCB1运输的药物中的剂量剂量的需求，以优化治疗结果。关键字：CYP3A5; ABCB1;遗传多态性；药物遗传学；西阿尔及利亚。doi：https：//dx.doi.org/10.4314/ahs.v24i1.36引用为：Ammour A，Aberkane M，Boudjema A，Boughrara W，Boughrara W，Benchekor Sm。CYP3A5 RS776746和ABCB1 RS1045642多态性的频率分布以及与药物遗传学的关系中的多态性。Afri Health Sci，24（1）。307-312。 https://dx.doi.org/10.4314/ahs.v24i1.36
研究论文长期非编码RNA H19基因型与糖尿病性视网膜病的临床特征
糖尿病性视网膜病（DR）是以炎症反应为特征的糖尿病的微血管并发症。H19基因在调节炎症中起作用，并且与慢性全身炎症有关。本研究旨在研究H19基因中单核苷酸多态性（SNP）与DR的发展之间的潜在相关性。 H19 SNP的五个基因座-RS3024270（C/G），RS2839698（C/T），RS3741219（A/G），RS2107425（C/T）和RS217727（C/T）和RS217727（C/T）（C/T） - 使用TAQMAN ALLELILIM ALLELIC ALLELIC ALLELIC ALLELIC ALLELIC ALLELIC ALLELIC ALLELIC ALLELIC ALLELIC ALLELIC和272。结果表明，H19 SNP RS3741219 AG（P = 0.030）和AG+GG（P = 0.037）等位基因与45岁之前糖尿病发作的患者发育的DR的风险增加显着相关。此外，患有H19 SNP RS3741219 AG+GG基因型的糖尿病个体也显示出明显更高的血清肌酐（P = 0.034），较低的肾小球过滤率（GFR）（P = 0.013），总胆固醇/HDL/HDL/HDL/HDL比率（P = 0.031）和Trigligligly（p = 0.0）。在基于年龄的亚组分析中，糖尿病患者的GFR明显降低，患有糖尿病，H19 SNP RS3741219 AG+GG基因型（P = 0.012）。总而言之，H19 SNP RS3741219变体的存在与早发糖尿病患者的DR风险更高，并且在该人群中尤其明显。
o r i g i n a l r e s a a r c h fto基因多态性与中枢神经系统肿瘤易感性之间无关
背景：中枢神经系统（CNS）肿瘤是在全球童年时期出现的一种恶性肿瘤。脂肪质量和肥胖相关（FTO）酶，最初被鉴定为肥胖相关蛋白，也是癌症的易感基因。然而，FTO基因单核苷酸多态性（SNP）对中枢神经系统肿瘤风险的诱发作用尚不清楚。方法：本文中，我们基因分型了314例CNS肿瘤患者和380位来自三家医院的健康对照样本，以探索FTO基因SNP是否影响CNS肿瘤风险。Taqman SNP基因分型测定法用于基因分型。的比值比（ORS）和95％的CON FICENTASS（CIS）（CIS）应用于多项式逻辑回归，用于确定SNP的关联（RS1477196 G> A，RS9939609 T> A，RS7206790 C> G g> g，以及RS80477395395的风险cen in> g）in> g）in> g） 结果：我们无法在单位分析或组合分析中检测到FTO基因SNP和CNS肿瘤风险之间的显着关联。 与0-2风险基因型相比，具有3-4种风险基因型的携带者的Edepeny MOMA风险显着增加（调整后的OR = 1.94，95％CI = 1.11–3.37，p = 0.020）。 结论：我们的数据表明，FTO基因SNP不太可能对CNS肿瘤风险产生很大的影响，但可能影响较弱。 关键字：CNS肿瘤，风险，FTO，多态性，中文的比值比（ORS）和95％的CON FICENTASS（CIS）（CIS）应用于多项式逻辑回归，用于确定SNP的关联（RS1477196 G> A，RS9939609 T> A，RS7206790 C> G g> g，以及RS80477395395的风险cen in> g）in> g）in> g）结果：我们无法在单位分析或组合分析中检测到FTO基因SNP和CNS肿瘤风险之间的显着关联。与0-2风险基因型相比，具有3-4种风险基因型的携带者的Edepeny MOMA风险显着增加（调整后的OR = 1.94，95％CI = 1.11–3.37，p = 0.020）。结论：我们的数据表明，FTO基因SNP不太可能对CNS肿瘤风险产生很大的影响，但可能影响较弱。关键字：CNS肿瘤，风险，FTO，多态性，中文