摘要 从细菌到人类,许多生物体都存在砷解毒系统。在之前的研究中,我们在嗜热菌 Thermus thermophilus HB27 ( Tt SmtB ) 中发现了一个砷反应转录调节因子。在这里,我们更详细地描述了嗜热菌的砷抗性系统。我们采用基于 Tt SmtB 的下拉分析,对用砷酸盐和亚砷酸盐处理的培养物的蛋白质提取物进行研究,以获得 S -腺苷酸-L-蛋氨酸 (SAM) 依赖的亚砷酸盐甲基转移酶 ( Tt ArsM )。进行了体内和体外分析,以阐明砷抗性网络的这一新组成部分及其特殊的催化机制。在大肠杆菌中异源表达 TtarsM 可在中温温度下实现亚砷酸盐解毒。尽管 Tt ArsM 不含有典型的亚砷酸盐结合位点,但纯化的蛋白质确实会催化 SAM 依赖性的亚砷酸盐甲基化,形成单甲基亚砷酸盐 (MMA) 和二甲基亚砷酸盐 (DMA)。此外,体外分析证实了 Tt ArsM 和 Tt SmtB 之间的独特相互作用。接下来,开发了一种高效的基于 ThermoCas9 的基因组编辑工具,以删除嗜热菌基因组上的 Tt ArsM 编码基因,并确认其参与亚砷酸盐解毒系统。最后,用编码稳定化黄色荧光蛋白 (sYFP) 的基因取代嗜热菌 D TtarsM 基因组中的 TtarsX ef flux 泵基因,以创建灵敏的基于基因组的生物报告系统,用于检测砷离子。
【产品简介】 本产品是从高度耐热菌 Thermus aquaticus 中克隆其 DNA 聚合酶基因,原核表达后经柱层析纯化获得的超纯、高效、耐热 DNA 聚合 酶, SDS-PAGE 显示为一条 94kD 的蛋白条带。该酶除具有 5 ' -3 ' DNA 聚合活性外,还具有少量的 5 ' -3 ' DNA 外切活性,但不 具有 3 ' -5 ' DNA 外切活性(校读活性),适用于常规 PCR 扩增。 M5 HiPer plus Taq DNA Polymerase 扩增得到的 PCR 产物含有 3'-A 碱基,可直接用于 TA 克隆 ( 聚合美 TOPO-TA 克隆载体货号: MF019 或 MF020) 。
TAQ DNA聚合酶是一种衍生自含水型菌群的重组DNA聚合物的DNA。其分子量为94 kDa。TAQ DNA聚合酶可以将靶DNA扩大到5KB(简单模具)。扩展速度为0.9〜1.2kb/min(70〜75 o C)。它具有5'至3'的活性,没有3'活性到5'外切酶,而没有导致含有3'-da末端的PCR产物。
最初的PCR要求包括100至35000个碱基对的目标DNA,与靶DNA互补并与靶DNA区域结合,二价阳离子(MG 2+),缓冲溶液,脱氧核糖核苷酸,例如DATP,DATP,DCTP,DCTP,DGTP和DTTP,dttp和Prospective Bases。DNA聚合酶是从深海中发现的细菌中分离出的必需酶。因此,该酶通常被称为TAQ聚合酶。该酶的优点是它是热稳定的。也就是说,它可以承受高达95 O的温度上升。查看图8.2,了解执行聚合酶链反应的步骤。用于执行PCR的仪器被称为热环生(图8.3)。建议学习者在给定的链接
描述TAQ DNA聚合酶是一种从热毛虫中分离出来的热稳定酶。酶在5´-> 3´方向上催化互补DNA链的合成,还具有5´-> 3´外丝酶活性。在扩增DNA片段时,TAQ聚合酶在3'结束腺苷悬垂的情况下增加。这可以用于克隆PCR生成的DNA片段。酶的优势是其高加工性[1000个碱基对(BPS)的扩增需要<1分钟]。 酶的缺点是它缺乏3´-> 5´EXONCOLLEASE校对活动,这说明了误差率很高(大约有1个错误至10 5-10 6基本BPS)。 该酶的主要用法是在诊断分析中用于扩增高达5000 bps的DNA片段。酶的优势是其高加工性[1000个碱基对(BPS)的扩增需要<1分钟]。酶的缺点是它缺乏3´-> 5´EXONCOLLEASE校对活动,这说明了误差率很高(大约有1个错误至10 5-10 6基本BPS)。该酶的主要用法是在诊断分析中用于扩增高达5000 bps的DNA片段。
themus aquaticus,重组,大肠杆菌描述:TAQ IN是用于常规PCR反应的建议的DNA聚合酶。它被优化为高特异性,并确保最少的非特异性产品形成。建议基于牙菌斑和自动移液的PCR进行缓冲系统。复制性DNA活性发生在72°C。在镁存在下,在5'-3'的方向上将核苷酸聚合催化。它也取决于聚合的方向5'-3'的核酸酶活性,但不存在3'-5'核酸外切酶活性。
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