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引文：Rathore, S.、Hassert, J.、Clark-Hachtel, CM、Stahl, A.、Tomoyasu, Y.、Bushbeck, EK RNA 干扰在水生甲虫中作为一种强大的工具
RNA 干扰 (RNAi) 仍然是一种强大的技术，可通过 mRNA 降解来有针对性地减少基因表达。该技术适用于多种生物，在物种丰富的鞘翅目 (甲虫) 中非常有效。在这里，我们总结了在新生物中开发该技术的必要步骤，并说明了它在水生潜水甲虫 Thermonectus marmoratus 的不同发育阶段中的应用。可以通过针对已知基因组的近亲或从头组装转录组来经济高效地获得目标基因序列。候选基因克隆利用特定的克隆载体 (pCR4-TOPO 质粒)，该载体允许使用单个通用引物为任何基因合成双链 RNA (dsRNA)。合成的 dsRNA 可以注射到胚胎中用于早期发育过程，也可以注射到幼虫中用于后期发育过程。然后，我们说明如何使用琼脂糖固定将 RNAi 注射到水生幼虫中。为了演示该技术，我们提供了几个 RNAi 实验示例，生成具有预测表型的特定敲低。具体来说，晒黑基因 laccase2 的 RNAi 会导致幼虫和成虫的角质层变浅，而眼色素沉着基因 white 的 RNAi 会导致眼管变浅/缺乏色素沉着。此外，关键晶状体蛋白的敲低会导致幼虫出现视力缺陷和捕猎能力下降。综合起来，这些结果体现了 RNAi 作为一种工具的强大功能，可用于研究仅具有转录组数据库的生物体的形态模式和行为特征。