方法:使用CDC批准的BG-Sentinel版本2陷阱(Biogents AG,德国雷根斯堡)和来自印度博帕尔地区不同地点的电池经营的吸尘器收集蚊子。他们是根据属,性别,位置和收集日期进行分类的。从均质的蚊子池中提取RNA并进行反转录。互补的DNA(cDNA)使用独立于序列的单次放大(SISPA)扩增。此外,使用Illumina Novaseq 6000平台(Illumina,Inc.,CA,San Diego,CA)对聚合酶链反应(PCR)产物进行了测序。使用Trimmomatic进行读取的生物信息学分析(Bolger AM,Lohse M,Usadel B(2014)。 trimmomatic:用于光明序列数据(生物信息学,BTU170)的灵活修剪器,用于修剪低质量的原始读取。 后来,Kraken2和Bracken(马里兰州巴尔的摩的Johns Hopkins University)用于识别病毒序列。使用Trimmomatic进行读取的生物信息学分析(Bolger AM,Lohse M,Usadel B(2014)。trimmomatic:用于光明序列数据(生物信息学,BTU170)的灵活修剪器,用于修剪低质量的原始读取。后来,Kraken2和Bracken(马里兰州巴尔的摩的Johns Hopkins University)用于识别病毒序列。
HI-C测序和数据分析测序是在Illumina Novaseq平台上进行的。HI-C读数是使用三型读物处理的,并与HIC-PRO对齐HG38人类基因组参考。使用Juicebox进行可视化和接触归一化,并使用Juicer Tools GPU打ic来调用相互作用。根据打ic的相互作用调用手动策划映射到eCDNA的映射。使用纯染色体模式检测到染色体体相互作用。4
方法,将来自摩洛哥栽培树的单叶用于本研究。DNA提取。根据制造商的说明,使用Illumina Truseq套件构建了配对的测序库。该库是在配对端,2×150bp格式的Illumina Hi-Seq平台上进行排序的。用三件v0.33(Bolger,Lohse和Usadel 2014)修剪了所得FASTQ文件的适配器/引物序列和低质量区域。修剪序列由黑桃v2.5组装(Bankevich等人2012)随后使用Zanfona V1.0(Kieras 2021)进行完成步骤,以基于相关物种中保守的区域加入附加的重叠群。
使用一个野外收集的标本进行测序。DNA提取。根据制造商的说明,使用Illumina Truseq套件构建了配对的测序库。该库是在配对端,2×150 bp格式的Illumina Hi-Seq平台上进行测序的。用三型V0.33(Bolger,Lohse和Usadel 2014)修剪了所得FASTQ文件的适配器/引物序列和低质量区域。修剪序列由黑桃v2.5组装(Bankevich,Nurk,Antipov等2012)随后使用Zanfona V1.0(Kieras 2021)进行完成步骤,以基于相关物种中保守的区域加入附加的重叠群。
囊性纤维化(CF)患者的肺肺部容易受到铜绿假单胞菌的感染(1)。cf肺通常由形成生物膜的非粘液铜绿假单胞菌菌株定植,并且在粘液菌株过量产生藻酸盐的出现后发生慢性感染(2)。他们的生物膜对抗生素和IMUNE介质具有高度抗性,并导致肺部下降(2,3)。铜绿假单胞菌菌株是从慢性感染的成年CF患者的痰液样本中分离出来的,并在法国南特的中心医院大学中心。由于这些痰样品仅用于分离细菌,但不用于人类细胞或人类DNA,因此法国法律(2016-1537,2016年11月16日)不要求由机构伦理委员会审查和批准该研究或参与者提供书面或言语知情的同意。细菌,并使用基质辅助激光解吸离子 - 流量质量光谱法(MALDI-TOF MS [VITEK; VITEK; BIOMERIERIEUX; BIOMERIERIEUX,MARCY-LECELANCE,france)鉴定为铜绿假单胞菌。使用了每个患者的单个分离株。主要基于它们的生物膜结构和粘液表型,分离株MUC-N1,MUC-N2,MUC-P4和MUC-P5被选择构成用于测试抗体FILM化合物的应变板(M. Simon,E.Pernet,E.Pernet,E.Pernet,E.Jouault,A.Jouault,E.Portier,E.M.Boukigb,S.Boukig,S。Pinaud,C。 POC-Duclairoir,M。G。J. Feuilloley,O。Lesouhaitier,J。Caillon,S。Chevalier,A。Bazire和A. Dufour,提交出版),促使我们对其基因组进行了测序。在37°C下在液体LB培养基中生长在LB琼脂板中挑选的单个菌落接种的液体LB培养基中生长,并使用基因组基因组DNA纯化试剂盒(Fisher Fisher Scientifip,France,France)使用基因组基因组DNA纯化的基因组DNA,并使用手机的推荐并评估了双重态度(There the)。量子液计(Thermo Fisher Scientifim,美国)和1%琼脂糖凝胶电泳。 使用Illumina Nextera XT DNA库准备套件制备了测序库,按照制造商的协议。 在Miseq仪器(LMSM基因组平台,Rouen Normandy University,Evreux,France,France,France)上进行了测序,并使用Miseq Reagent Kit Kit Kit v.3(2 250 BP)进行了双指数配对末端读数。 默认参数用于所有软件,除非另有说明。 使用Trimmomatic V.0.36(4)对读数进行修剪,并使用Multiqc 检查其质量在LB琼脂板中挑选的单个菌落接种的液体LB培养基中生长,并使用基因组基因组DNA纯化试剂盒(Fisher Fisher Scientifip,France,France)使用基因组基因组DNA纯化的基因组DNA,并使用手机的推荐并评估了双重态度(There the)。量子液计(Thermo Fisher Scientifim,美国)和1%琼脂糖凝胶电泳。使用Illumina Nextera XT DNA库准备套件制备了测序库,按照制造商的协议。在Miseq仪器(LMSM基因组平台,Rouen Normandy University,Evreux,France,France,France)上进行了测序,并使用Miseq Reagent Kit Kit Kit v.3(2 250 BP)进行了双指数配对末端读数。默认参数用于所有软件,除非另有说明。使用Trimmomatic V.0.36(4)对读数进行修剪,并使用Multiqc
Thermincola Mag的组装使用了多个先前报道的数据集(6)。Illumina配对端(NCBI登录:SRR24043423)和Mate-pair(NCBI登录:SRR24043417)读数是从2013年从称为NRBC亚养殖Cartcons19获得的。配对末端的读数进行了测序,并使用Nextera Mate Pair库制剂制备套件对配偶对读数进行了测序。使用Trimmomaticv。0.32(7)处理所有原始读数,然后使用Abyssv。1.3.7(8),以创建与All-Paths-LGv。4.7.0(9)中生成的脚手架合并的Unitigs,使用gap填充Perl Script(10)基于Tang S1中的script in Dang et et eT eT eT eT eT eT eT eT script。(11)。由于该元基因组组装中的不确定核苷酸数量大量(JARXNP010000000),因此采取了进一步的步骤。在2018年,使用HISEQ PE群集Kit v4 cbot(Illumina)对NRBC亚培养(FES-DIASIS)进行了测序,没有其他质量控制措施(NCBI登录:SRR24043422)使用IDBAv。1.1.1.1(12)(12)和BINNENNNEND和VINNEND。在157个重叠群(NCBI登录:Javsmv000000000.1)中分配给Thermincola的垃圾箱如前所述(6)。将这157个重叠群纳入上述深渊/全paths-lg间隙填充工作流程中,生成了一个26 contig组件,该组件是通过使用BBMAPv。38.94(14)来策划映射来解决歧义的26 contig组件。读取映射可视化是使用Geneiousv。8.1.8进行的,并使用NCBI的原始基因组注释进行了基因组注释Finally, long reads from a 2020 NRBC subculture called 10L-NRBC, sequenced according to the manufac turer's instructions using PacBio RSII with the SMRTbell Express Template Prep Kit 2.0 ( SRR24043419 ) without shearing or size selection (Pacific Biosciences), were used to join adjacent contigs using the de novo assembly tool in Geneious v. 8.1.8(15),导致20碳组装。
在自然界中越来越多的抗生素抗性菌株选择,寻找替代性抗菌策略的搜索变得越来越重要。肠球菌CUS粪cv167是本公告中突出的菌株,已经证明了对各种病原体的体外活性,包括金黄色葡萄球菌,表皮球菌,apisterpococcus agalactiae,链球菌,链球菌Uberis uberis uberis,coliica coli coli coli coli coli,使用斑点测定法(1)的抑制活性结果如图1。该细菌是从2022年2月在巴西米纳斯Gerais的Coronel Xavier Chaves的牛奶罐中存储在散装牛奶箱中的原始牛奶样品中分离出来的。用于细菌分离,将1 ml等分试样的牛奶样品串联在磷酸盐缓冲溶液(pH 6.2; Merck,德国)中串联稀释(10°至10°),并将100 µL铺在M17琼脂(美国Sigma-Aldrich,USA)上。在35°C下孵育48小时后,将分离的细菌菌落条纹划分到新鲜的M17琼脂上以进行纯化。分离株指定的CV167被识别为无氧化氢酶活性的革兰氏阳性球菌。然后使用苯酚 - 氯仿法提取细菌的DNA(2)。使用Nanodrop 1000 UV/VIS(Thermo Scientific,Massachusetts,EUA)评估了DNA数量和质量,并使用Illumina DNA Prep套件制备了测序文库。使用Illumina NextSeq 2000平台上的300 bp配对末端测序对DNA进行了测序,从而产生了1,169倍的序列深度。修剪过程导致仅删除1.37%的读数。确认fastQC 0.12.1(3)最初用于评估测序数据的质量,该质量总共产生了11,863,824读。这些读取使用三型0.39(4)进行修剪,并具有以下参数:尾随:10;领导:10;滑动窗口:4:20;最小长度为50 bp。使用黑桃3.15.4(5)进行简短读数的从头组装,将覆盖范围参数设置为“自动”,而K-Mers则将21、33、55、77、99和127。较短的重叠群从最终组装中排除了500 bp。使用Quast 5.2.0(6)评估组装质量。总共产生了61个重叠群,合并长度为2,736,418 bp,鸟嘌呤 - 环氨酸(GC)含量为37.93%,N50的N50为156,530。基因组完整性,揭示了杆菌类的完整性99.3%。