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GSK3抑制剂增强了Gemtuzumab Ozogamicin （发行日期）2022-03（资源类型）期刊文章（版本）接受手稿（权利）这是以下文章的同行评审版本 肿瘤内微生物组对人胰腺导管腺癌的肿瘤免疫和预后的影响 精致的EBMT诊断和严重性标准2023的正弦梗阻综合征/静脉疾病 浸透圧补助型逆浸透法の実用化を志向した高コンパ...
图1 Gemtuzumab Ozogamicin（GO）的细胞毒性作用通过GSK3α /β抑制剂在急性髓样白血病（AML）细胞系中增强。对于所有实验，在孵育48小时后确定特异性凋亡。所得数据表示为三个独立实验的平均值±标准偏差（SD）。（a）U937和Marimo细胞用所示浓度CHIR99021（CHIR）处理。凋亡是通过用膜联蛋白V和碘化丙啶（PI）染色来确定的，然后进行流式细胞仪。（b）U937和Marimo细胞用指定的CHIR浓度处理，然后通过蛋白质印迹分析β-蛋白酶的积累。（c）用2.5μg/ml，0.5μg/ml（对于THP-1）或单独使用的0.25μg/ml（对于NB4）或与CHIR结合处理。*，**和***分别表示P <0.05，P <0.01和P <0.001。（d）细胞用GO，CHIR或GO + CHIR处理。全细胞裂解物的聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）。β-肌动蛋白用作负载对照。（E）Marimo，KO52和U937细胞用GO处理AZD2858（A2848）或GO + A2858。使用学生的t检验确定了GO和GO + A2858之间观察到的差异的统计显着性。*和***分别表示p <0.05和p <0.001。（f）Marimo，KO52和U937细胞用GO处理AZD1080（A1080）或GO + A1080处理。使用Student t -test确定了GO和GO + A1080之间观察到的差异的统计学意义。*，**和***分别表示p <0.05，p <0.01和p <0.001。
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cho，cho-1，cho-k1（上皮，内皮，转染的融合蛋白） L929（成纤维细胞，转染）NIH/3T3，3T3（成纤维细胞）HFOB 1 .19，Mg63（成骨细胞细胞系）MM41（骨骼肌细胞，骨骼肌母细胞，转染，转染）RAW 264 .7（巨噬细胞）（巨噬细胞；骨晶体差异777） （淋巴细胞）U266（淋巴细胞）U937（单核细胞）乳腺癌细胞（已建立的细胞系）HEPG2（HEPATOCYTE）RTG-2（RAINBOW TROUT GONAD细胞）LNCAP LNCAP（前列腺癌细胞系）H1299（转染 - 非毛孔Lung carcly carcl lung carccinoma）（转染）CAC2C CARCACNOMA CAC2C CAC2C CAC2C CAC2C CAC299 MDA-MB-231 MDA-MB 435 PC-3，PC-12 SH-SY5Y SK-MEL-28
2024 年 CBER 科学研讨会海报摘要
评估 RNA 提取和 Illumina NGS 文库制备方法以从不同样本基质中检测病毒 RNA Sayma Afroj 1、Aaron Scholl 1、Binsheng Gong 2、Bingjie Li 1、Joshua Xu 2 和 Sandip De 1 * 1 美国食品药品管理局治疗产品办公室细胞治疗和人体组织办公室细胞治疗部 2 司肿瘤疫苗和生物技术处，10903 New Hampshire Avenue，Silver Spring，MD，20993；2 美国食品药品管理局国家毒理学研究中心生物信息学和生物统计学部 3900 NCTR Rd Jefferson，AR 72079。目标：当前的病原体和外来因子检测试验面临局限性，例如对某些病原体的特异性和灵敏度降低，这对 HCT/Ps 的安全使用提出了挑战。该项目旨在评估各种 RNA 提取和 NGS 文库制备方法，以实现对病原体和外来因子的快速、广泛、灵敏和特异性检测。方法：我们使用三种研究设计来评估 RNA 提取方法：将寨卡病毒 (ZIKV) 注入幼稚细胞、使用持续感染 ZIKV 的细胞系以及将持续感染的 ZIKV 细胞注入白膜样本。使用五种方法提取 RNA，并使用 qRT-PCR 对 ZIKV 进行定量分析。为了评估 RNA 文库制备方法，我们将病毒组 HEV RR.1 和 BEI-NR-59622（包含 PCV1、Reo、FeLV、RSV、EBV）注入 U937 细胞，提取总 RNA，并使用各种商业试剂盒和组合构建文库。这些文库在 Illumina NovaSeq 6000 平台上进行测序。正在分析 NGS 数据以确定病毒基因组图谱、基因组覆盖率和映射读取的百分比。结果与结论：总体而言，硅胶柱纯化的 TRIzol 提取被证明是提取病毒 RNA 的最佳方法。正如预期的那样，我们观察到不同的 NGS 文库制备方法之间存在显著差异。rRNA 耗竭有效减少了 NGS 文库中的人类 rRNA。正在进行进一步的数据分析，以研究各种文库制备方法对参考病毒 RNA 产生的 NGS 读数总数的影响。简明语言摘要：有效的病毒核酸提取和文库制备方法对于使用 NGS 技术从细胞和组织中检测不定病毒以及确保细胞和组织治疗的安全性至关重要。我们的研究评估了几种 RNA 提取方法，并观察到测试方法中病毒 RNA 提取效率的差异。总体而言，硅胶柱纯化的 TRIzol 是跨测试样本基质检测病毒最灵敏的方法。正如预期的那样，我们观察到不同的 NGS 文库制备方法之间存在显著差异。正在进行进一步的数据分析，以研究各种文库制备方法对参考病毒 RNA 产生的 NGS 读数总数的影响。
通过一种新型抑制剂的急性髓样白血病
野生型FLT3（FLT3-WT）激酶在未成熟的造血细胞，胎盘，性腺和大脑中表达。1，它在骨髓中造血干细胞的分化和存活中起着重要作用。2在正常的造血环境中，FLT3主要在CD34阳性细胞中表达，并积分参与早期造血，重建多谱系髓样前体，3和树突状细胞成熟。4,5在急性髓样白血病（AML）中，FLT3激酶（FLT3-ITD）的固定结构域（FLT3-ITD）中的内部串联重复，在不同患者的氨基酸序列中显示出最普遍的FLT3 KINAPES突变和大约30-40％的患者的突变。在临床试验中已经研究了许多FLT3激酶抑制剂，例如Gilteritinib，6个crenolanib，7 Quizartinib 8和Midostaurin，9等。然而，当前大多数FLT3激酶抑制剂无法区分结构上类似的CKIT激酶和FLT3-WT激酶，这可能导致骨髓抑制毒性。10在这里，我们报告了一种新型的FLT3-ITD突变体选择性抑制剂CHMFL-FLT3-362（缩写为化合物362）的疾病，该抑制剂在FLT3-WT和CKIT激酶上都具有高选择性。它还针对FLT3- ITD + AML的临床前模型显示出令人印象深刻的体外和体内效率。我们首先使用Z'-Lyte（Invitrogen）生化测定法使用纯化的FLT3 WT/ITD突变蛋白研究了化合物362对FLT3-ITD和FLT3-WT的活性。结合模式的动力学研究表明，化合物362是ATP竞争性抑制剂（图1C）。数据显示，Com-pound 362（有关化学结构的图1A）在FLT3-ITD和FLT3-WT之间的选择性超过30倍（图1B）。然后，我们用一组工程的BAF3细胞测试了化合物362的抗增生效应，这些效果用不同的FLT3 WT/ITD突变体转化（图1D和在线补充表S1）。有趣的是，化合物表现出对所有ITD突变体的有效抑制活性，其长度不同，范围为6至33个氨基酸，并且对FLT3-WT的选择性达到7至30倍。然而，它对包括FLT3-ITD-G697R/D835（DEL/I/V）/Y824（R/H）的FLT3-ITD的耐药突变体的效力要小得多，以及一级功能性突变，包括包括FLT3-ITD-G697R/D835（R/I/V），包括包括FLT3-ITD/D835-ITD-G697R/D835（del/i/v）/Y824（R/h）。所有这些数据都表明化合物362是FLT3- ITD突变体选择性抑制剂。正如预期的那样，这种选择性在白血病细胞系中被选择性抑制对FLT3-ITD依赖性AML细胞（MV4-11，MOLM-13和MOLM-14）与FLT3 WT WT-WT-wt-wt-表达细胞（U937，cmk，oci-AML-2-2，以及HL-2，以及HL-60）的选择性抑制（MV4-11，MOLM-13和MOLM-14）（MOLM-13和MOLM-14）（MOLM-13和MOLM-14）（MOLM-13和MOLM-14）。为了进一步显示com-pount 362的全元组选择性，我们以1 m的浓度对Dovistx的Kinomescan TM技术进行了检查。结果表明，化合物362具有良好的选择性曲线（S得分35 = 0.02）。除了FLT3外，化合物362还显示出与CKIT，CSF1R，FLT1，VEGFR2，PDGFR2，PDGFRα和PDGFRβ激酶的强大结合（图1E和在线补充表S2）。由于激活的TM是一种基于结合的测定法，并且可能不会真正反映激酶的抑制活性，然后我们与Z'-Lyte