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将细胞(4.5×10 6 )接种于15 cm培养皿中,用不同浓度的氢溴酸沃替西汀(0、0.5、1、2和4 µM)处理24小时。然后收集细胞并用RIPA缓冲液裂解。使用BCA试剂盒(BCA蛋白质测定试剂盒,碧云天生物科技,上海,中国)检测蛋白质浓度。将蛋白质样品与蛋白质上样缓冲液在100°C下加热5分钟,然后通过SDS-PAGE分离并转移到PVDF膜上。用5%脱脂牛奶封闭膜1.5小时,在4°C下与一抗孵育过夜。接下来,将膜与相应的二抗孵育1.5小时。使用化学发光试剂(ECL,美伦生物)检测蛋白质结合。Pull-down分析