1 免疫学-疫苗学,传染病和寄生虫病系,动物与健康基础与应用研究(FARAH),列日大学兽医学院,B-4000 列日,比利时 2 斑马鱼发育与疾病模型实验室,GIGA-疾病分子生物学,列日大学,B-4000 列日,比利时 3 MRC-格拉斯哥大学病毒研究中心,格拉斯哥 G61 1QH,英国 4 UMR-I 02 环境应激与水环境生物监测(SEBIO),UFR 精确与自然科学,兰斯香槟阿登大学,CEDEX 2,51687 兰斯,法国 5 香农理工大学生物科学研究所, N37 HD68 阿斯隆,韦斯特米斯郡,爱尔兰 * 通信地址:owen.donohoe@uliege.be (OD);a.vdplasschen@uliege.be (AV);电话:+32-4-366-43-79 (OD);+32-486-45-13-53 (AV) † 这些作者对本文的贡献相同。
致谢我要感谢吉姆·道林(Jim Dowling)博士是一位善良而热情的主管,尽管我的论文和指导了我的项目。他为我提供了一个养育环境,以学习和成长为科学家。我要感谢Dowling Lab始终保持支持,并允许我享受我作为研究生的时间。Dowling Lab,PGCRL的第15层和斑马鱼设施为我提供了这样的培养环境,以使我学习,在智力上挑战,成长为科学家并学会进行研究。我一直被知识渊博的专家所包围,他们总是愿意分享自己的知识和经验。我要衷心感谢我的委员会,克雷格·斯米伯特(Craig Smibert)博士,伊恩·斯科特(Ian Scott)博士和罗纳德·科恩(Ronald Cohn)博士提供了宝贵的支持和投入,以使我的项目在整个论文中保持顺利进行。最后,我要感谢我的父母为我一生和通过这篇论文提供了我所需要的所有无条件支持。他们不断的支持和鼓励使我能够进一步发展科学教育并成为一名科学家,我将永远感谢。
药理学实验表明,神经肽可以有效调整神经元活性并调节运动输出模式。但是,它们在塑造先天运动方面的功能通常仍然难以捉摸。例如,先前已证明生长抑素在脑室中注射时会诱导运动,但是当在体外沐浴在脊髓中时,可以抑制虚拟的运动。在这里,我们通过在斑马鱼中淘汰生长抑素1.1(SST1.1)来研究生长抑素在先天运动中的作用。我们在数百个突变体和对照兄弟姐妹幼虫中自动化并仔细分析了数十万次爆发的运动运动学。我们发现SST1.1的缺失不会影响声学 - 卵形逃生反应,而是导致异常探索。SST1.1突变幼虫在更高速度的距离上游动并进行更大的尾弯,表明生长抑素1.1抑制了自发的运动。我们的研究完全表明,生长抑素1.1天生有助于减慢自发的运动。
斑马鱼胰腺的特征,与胰岛功能和建模斑马鱼的糖尿病相关的特征已成为了解器官发育和组织再生的强大模型。它也已被广泛应用于糖尿病研究和化学生物学领域。像哺乳动物胰腺一样,斑马鱼胰腺主要由外分泌和内分泌细胞组成[1]。在外分泌胰腺中,导管细胞逐渐形成腔内结构,以促进由腺泡细胞分泌的消化酶的转运,从而向肠道分泌。内分泌细胞聚集在一起,并构造了名为胰岛的细腻组织结构。Within the islets, there are several endocrine cell types, including insulin-secreting β -cells, glucagon-secreting α -cells, somatostatin-secreting δ -cells, ghrelin-secreting ε -cells, and in zebra fi sh also glucose-dependent insulinotropic polypeptide (GIP)-secreting cells.此外,斑马鱼胰腺是一种高度血管化器官,具有大量的血管内部细胞,平滑肌细胞和周细胞[2,3]。胰岛脉管系统对于维持全身葡萄糖稳态至关重要,因为它使胰岛细胞能够感知血糖水平。因此,它参与调节胰岛细胞的旁分泌/自分泌作用,并在调节胰岛素和胰高血糖素分泌的平衡。
1 欧洲非线性光谱实验室,Via Nello Carrara 1, 50019 Sesto Fiorentino,意大利; turrini@lens.unifi.it (LT); roschi@lens.unifi.it (LR); devito@lens.unifi.it (GdV); francesco.pavone@unifi.it (FSP) 2 佛罗伦萨大学神经科学、心理学、药物研究和儿童健康系,Viale Gaetano Pieraccini 6, 50139 佛罗伦萨,意大利 3 佛罗伦萨大学复杂动力学研究中心,Via Giovanni Sansone 1, 50019 Sesto Fiorentino,意大利 4 佛罗伦萨大学物理和天文学系,Via Giovanni Sansone 1, 50019 Sesto Fiorentino,意大利 5 国家研究委员会国家光学研究所,Via Nello Carrara 1, 50019 Sesto Fiorentino,意大利 6 佛罗伦萨大学生物系,Via Madonna del Piano 6, 50019 Sesto Fiorentino,意大利 * 通讯地址:francesco.vanzi@unifi.it
CRISPR/Cas9 基因组编辑技术极大地促进了多种生物体内和体外基因的靶向失活。在斑马鱼中,只需将向导 RNA (gRNA) 和 Cas9 mRNA 注射到单细胞阶段胚胎中,即可快速生成敲除系。在这里,我们报告了一种简单且可扩展的基于 CRISPR 的载体系统,用于斑马鱼的组织特异性基因失活。作为原理证明,我们使用带有 gata1 启动子的载体来驱动 Cas9 表达,以沉默与血红素生物合成有关的 urod 基因,特别是在红细胞谱系中。Urod 靶向在斑马鱼胚胎中产生了红色荧光红细胞,重现了在 yquem 突变体中观察到的表型。虽然 F0 胚胎表现出嵌合基因破坏,但这种表型在稳定的 F1 鱼中似乎非常明显。该载体系统构成了空间控制基因敲除的独特工具,大大拓宽了斑马鱼功能丧失研究的范围。
简介心肌病 (CM) 是一组异质性心肌疾病,可分为肥厚性 CM (HCM)、扩张性 CM (DCM) 和限制性 CM (RCM) (1–4)。已鉴定出 CM 的遗传因素,且有 100 多个基因与不同类型的 CM 相关 (5, 6)。已建立动物模型并用于发现关键信号通路和治疗策略。已鉴定出至少 7 条具有治疗潜力的 CM 信号通路,包括丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 信号转导、mTOR 信号转导、β -肾上腺素能受体信号转导、磷酸二酯酶 5 (PDE5) 信号转导、组蛋白去乙酰化酶 (HDAC) 信号转导、Ca 2+ /钙调蛋白依赖性激酶 II 信号转导和钙调磷酸酶-活化 T 细胞核因子 (Cn-NFAT) 信号通路 (7–9)。例如,mTOR 是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在调节心肌细胞蛋白质稳态方面起着关键作用 (10–12);通过药理学或遗传学方法部分抑制 mTOR 可对几种类型的心肌病产生心脏保护作用,包括 lamp2 相关 HCM (13)、bag3 相关和层蛋白 A/C 相关 DCM (14, 15) 以及贫血和阿霉素诱发的心肌病 (DIC) (16)。相反,已发现 MAPK 几乎在每种应激和激动剂诱发的肥大刺激下都会激活,并以独特的方式调节心脏离心和向心生长之间的平衡 (17, 18)。 MAPK 的激活会导致离心性肥大并促进肌细胞延长,而抑制细胞外信号调节激酶 (ERK) 通路会减弱对压力超负荷的肥大反应 (19)。MYH7,也称为 β - 肌球蛋白重链,是第一个被确定的 CM 致病基因,后来被确定为约 18% 的 HCM 病例的病因 (20–22)。在人类中,MYH7 与 MYH6 串联位于 14 号染色体上,MYH7 是位于 MYH6 上游的主要成体亚型。在小鼠中,Myh7 和 Myh6 也串联位于 14 号染色体上;然而,上游的 Myh7 基因
(未通过同行评审认证)是作者/资助者。保留所有权利。未经许可就不允许重复使用。此预印本版本的版权持有人发布于2021年2月2日。 https://doi.org/10.1101/2021.02.01.429280 doi:biorxiv preprint
1个神经社会记忆的实验室,生理学研究所,分子生物学和神经性研究(ifibyne),Conicet,fceyn-uba,4个布宜诺斯艾利斯,阿根廷。 div>5 2生物多样性与实验和应用生物学研究所(IBBEA-Conicet),布宜诺斯艾利斯,阿根廷6 3 3 3社会行为神经内分泌学实验室,生理学,分子生物学和神经科学研究所(Ifibyne)(ifibyne),7 Conicet,Fceyn-buba,ficeyn-uba,buenestina,buenentina,buenentina,buenentina,buenentina,buenentina 89 *9 *
摘要:斑马鱼(Danio Rerio)已成为研究心血管和代谢性疾病的欣赏和多功能模型生物体,为基础研究和药物发现提供了独特的优势。斑马鱼和人类之间的遗传保护及其高繁殖力和透明的胚胎,可以有效地进行大规模的遗传和以药物为导向的筛查研究。斑马鱼具有简化的心血管系统,该系统与哺乳动物具有相似性,使其特别适合对心脏发育,功能和疾病的各个方面进行建模。斑马鱼胚胎的透明度可以实时可视化心血管动力学,为早期胚胎事件提供见解,并促进与心脏有关的异常研究。在代谢研究中,斑马鱼为肥胖,2型糖尿病,高脂血症和其他代谢障碍提供了成本效益的平台。它们的高生殖速率允许生成大量的统计分析,而高级遗传工具(例如CRISPR/CAS9)则可以使用精确的基因编辑来模拟与人类疾病相关的特定遗传突变。斑马鱼代谢模型在阐明了代谢性疾病的分子机制,研究环境因素的影响并识别潜在的治疗靶点方面发挥了作用。此外,斑马鱼胚胎对小分子的渗透性促进了药物发现和筛查,为鉴定具有治疗潜力的化合物提供了一种快速而经济的方法。总而言之,斑马鱼心血管和代谢疾病模型继续对我们对疾病发病机理的看法做出重大贡献,为转化研究和开发新的治疗干预提供了平台。斑马鱼的多功能性,可伸缩性和遗传可操作性将其定位为无价的资产,以揭示心血管和代谢性疾病的复杂性。本评论概述了斑马鱼模型的关键特征和研究心血管和代谢疾病的贡献。我们讨论了使用斑马鱼模型研究人类疾病的好处和缺点,以及迄今为止这项努力的进步所揭示的关键发现。