图3。左上角:ADCC生物测定原则的插图。右上:在ADCC生物测定效应子Jurkat细胞系中FcγRIIIIA-F158过表达的流式细胞仪分析(F变体; BPS Bioscience#60540)。左下:在表达HER2 SKBR-3乳腺癌细胞的情况下,ADCC对抗HER2抗体药物曲妥珠单抗反应。右下:在SKBR-3和FcγRIIIIA-F158/NFAT荧光素酶报告基因jurkat细胞(EC50 = 28.1 ng/ml)的共同培养中,ADCC对增加剂量的曲妥珠单抗的反应。用biorender.com创建的插图。
图1。比例计量CRISPR-CAS12A系统。基于双通道FRET的CRISPR-CAS12A记者系统的示意图。电流(顶部)报告基因系统依赖于荧光团 - 猝灭记者,该记者包括黑暗(非辐射)淬火以防止发射和单个通道读数来检测裂解的报告基因。提出的读取系统而不是使用可见光的淬火。虽然报告荧光团保持与猝灭剂的结合,但报告基因系统形成一个fret对,并在可见的淬灭的发射波长中发出光。在CAS12A裂解时,报告荧光团发射通道中的信号增加,而淬火发射通道中的信号降低。因此,被分析的信号是报告荧光团发射通道与减少淬灭发射通道的比率。
dPCR 微生物 DNA 检测试剂盒旨在使用数字 PCR 检测细菌、真菌、寄生虫、病毒、抗生素抗性或毒力因子基因的存在。该检测可以在 QIAcuity ® 上大约两小时内完成,且无需太多手动操作。该检测针对超过 700 种细菌、真菌、寄生虫、病毒、抗生素抗性或毒力因子基因。检测产品由一个含有引物对和水解探针的试管组成,并可针对染料(荧光团)进行配置。可选染料包括 FAM、HEX、ROX、TAMRA 和 Cy5,可在单个试剂盒中混合搭配最多 5 个目标/检测
检测设置 在第二个案例研究中,我们开发了一种 CBA,使用重组 HEK-Blue™ 报告细胞来检测针对药物的 NAbs,这是一种与细胞因子结合的融合抗体。HEK-Blue™ 报告细胞系统由 HEK293 细胞组成,这些细胞经过基因改造,可表达细胞因子特异性受体和主要信号蛋白,从而获得完全活跃的信号通路(图 2. A)。细胞因子激活受体会触发下游信号传导和分泌性胚胎碱性磷酸酶 (SEAP) 报告基因的表达。细胞上清液中分泌的 SEAP 量可以用 SEAP 检测培养基(比色酶测定)测量,并且与细胞因子活性成正比,与抗细胞因子 NAbs 的浓度成反比
四个RNA靶标,SARS-COV-2 E-GENE(E-GENE),呼吸道合胞病毒(RSV),流感 - A(INF-A)和流感-B(INF-B),并用人类唾液扩增,在多重1- QPCR反应中与透明的透明型均衡型抑制剂策略(均匀的均匀抑制作用)中的人类唾液相结合(干燥(40°C 80分钟)。在20μl反应中使用了四个具有三个技术复制的模板稀释液(4000、400、40和4份)。每个反应中添加了与2.5%人类唾液相对应的通用转运培养基中1/10稀释的唾液1/10。循环条件为:47°C 10分钟,95°C 2分钟,然后是95°C的50个循环10 s,而60°C的50°C持续30 s。
简单的工作流程以快速结果Taqman SNP基因分型测定构成了最简单的SNP基因分型技术。我们以您选择的格式输送您的现成SNP基因分型测定法:单管,96或384孔板(自定义电镀服务)或Applied Biosystems™Taqman™OpenArray™板(图3)。其余的很容易。只需将测定与Applied Biosystems™Taqman™基因分型Master Mix或Taqman™通用PCR Master Mix和您纯化的DNA样品结合使用。无需优化探针,底漆,盐浓度或温度,因为所有测定法都使用通用试剂浓度和热循环条件。使用热循环器或实时PCR仪器生成端点后,不需要转移,洗涤或其他试剂,并且板保持密封;只需阅读板并分析基因型即可。这有助于减少污染,样本混合和样本损失的机会。化学的简单性使您可以轻松地自动化反应以进行大规模平行的基因分型研究,很容易增加测定的数量,样品数量或两者兼而有之。此外,分析软件允许您自动使用基因型,从而最大程度地减少手动工作。
Westgard QC提供方法验证数据分析工具套件和在线配对数据计算器。4该计算器可以与方法比较的数据一起使用,以计算有关回归线,S Y/X)和相关系数的线性回归统计量(斜率,Y截距和标准偏差(R,Pearson产品矩相关系数); t检验统计(两种方法或偏置测量值之间的平均差异; SD差异,两种方法之间差异的标准偏差)。也可以用于提供“比较图”,该图显示了Y轴的测试方法结果与X轴上的比较方法结果,以及一个“差异图”,该图显示了测试对y轴的比较结果之间的差异与X轴上的比较方法。