除了加深对细胞代谢的理解外,这些发现为潜在的治疗应用铺平了道路。通过特定药物或化合物调节自噬可能对治疗肥胖症和2型糖尿病等代谢疾病的治疗有影响,这与脂质和蛋白质产生和降解的失衡有关。此外,提高自噬功能具有通过保持细胞器质量并防止肌肉减少症和其他与年龄相关的疾病来减慢细胞衰老的潜力。
摘要。背景/目的:脂肪肉瘤是一种源自脂肪组织的软组织肉瘤。它在软组织肉瘤中比较常见。抗疟药氯喹 (CQ) 可抑制自噬并诱导癌细胞凋亡。雷帕霉素 (RAPA) 是 mTOR 的抑制剂。RAPA 和 CQ 的组合是自噬的强效抑制剂。之前,我们表明 RAPA 和 CQ 的组合对去分化脂肪肉瘤患者来源的原位异种移植 (PDOX) 小鼠模型有效。在本研究中,我们研究了 RAPA 和 CQ 的组合在体外靶向高分化脂肪肉瘤 (WDLS) 细胞系中的自噬的功效机制。材料和方法:使用人类 WDLS 细胞系 93T449。使用 WST-8 试验检测 RAPA 和 CQ 的细胞毒性。使用蛋白质印迹法检测自噬体组成部分微管相关蛋白轻链 3-II (LC3-II)。还对 LC3-II 进行了免疫染色以进行自噬体分析。使用 TUNEL 试验检测凋亡细胞,并在三个随机选择的显微镜视野中计数凋亡阳性细胞以进行统计验证。结果:RAPA 单独和 CQ 单独抑制细胞活力
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图 1 心脏靶向(Gal4 Τ inC Δ 4 )蛋白酶体 Pros β 5 基因的 KD 导致蛋白质组不稳定和线粒体数量减少。 (a) Pros β 5 siRNA 后心脏组织中 Pros β 5 基因的相对表达(与对照相比)。 (b, c) Pros β 5 RNAi(与对照相比)果蝇心脏组织中相对 (%) 26S 蛋白酶体活性 (b) 和 ROS 水平 (c)。 (d) Pros β 5 KD 后果蝇心脏组织中蛋白质组泛素化 (Ub) 和羰基化 (DNP) 的免疫印迹分析。 (e) CLSM 观察用 LysoTracker 染色的 Pros β 5 RNAi(与对照相比)果蝇心管(e1)、LysoTracker 定量(e2)和使用溶酶体标记物抗 Lamp1(e3)进行免疫印迹分析。(f) 所示基因型果蝇心脏组织中蛋白酶活性的相对(%)。(g) blw/ATP5A 免疫荧光染色后,CLSM 可视化所示果蝇品系心脏组织中的线粒体;细胞核用 DAPI 复染。(h) Pros β 5 KD 后,所示基因型分离心脏组织中所示线粒体基因的相对表达水平(与对照相比)。在 (a, h) 中,基因表达与相应对照作图;使用 RpL32/rp49 基因作为 RNA 输入参考。 (d)和(e3)中的 Gapdh 和 Actin 探测分别用作蛋白质输入参考。p 值采用非配对 t 检验计算。条形图,± SD(n ≥ 3);* p < 0.05;** p < 0.01
1个在Onco-Muno-Herasology(LIM-31)的发病机理和靶向疗法的医学研究实验室(LIM-31),内科系,血液学部,ST-o Paulo University faculdade de Medicina,SãoPaulo,SãoPaulo 01246-903,巴西; kelilima@usp.br(K.L.); marianenasc@hotmail.com(m.c.d.n.); edumrego@hotmail.com(E.M.R.)2生物医学科学研究所,萨尔·保罗大学,巴西sâo paulo 05508-000; liviamirands@usp.br(L.B.L.D.M.); bruolialmeida@usp.br(B.O.D.A.); drguilhermealcantara.usp@gmail.com(g.a.s.a.)3生物医学研究所的细胞和发育生物学系,萨尔·保罗大学,巴西s-o paulo 05508-000; anabega@usp.br(A.D.M.B.G.); glaucia.usp@gmail.com(G.M.M.-S。) *通信:jamachadoneto@usp.br;电话。: +55-11-3091-7467
引言:转移是癌症的一个特征,也是癌症相关死亡的主要原因(1)。脑转移是中枢神经系统恶性肿瘤最常见的类型。脑转移常常表现为神经系统损伤,预示着生活质量下降并限制生存结果。据估计,10%–30% 的癌症患者会在疾病的某个阶段发生脑转移(2)。然而,由于诊断技术的提高和通过全身治疗更好地控制颅外疾病,扩散至中枢神经系统的外周癌症的发病率可能正在增加(3, 4)。乳腺癌是脑转移的主要原因之一(5)。它是女性中最常见的癌症,全球每年有 230 万女性受到影响(6)。它也是女性癌症相关死亡的最常见原因,全球几乎每个地区的发病率都在增加(7)。脑转移的发生率取决于乳腺癌的分子亚型,人类表皮生长因子受体 2 阳性 (HER2 阳性) 和三阴性乳腺癌的脑转移率高达 50% (8, 9)。
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1 瑞士伯尔尼和米特豪森病毒学和免疫学研究所,2 瑞士伯尔尼大学兽医学院传染病和病理生物学系,3 瑞士伯尔尼大学生物医学科学研究生院,4 德国耶拿欧洲病毒生物信息学中心,5 德国波鸿鲁尔大学分子与医学病毒学系,6 瑞士伯尔尼大学兽医学院神经科学系,7 慕尼黑亥姆霍兹中心肺生物学和疾病研究所综合肺病学中心,德国肺研究中心 (DZL) 成员,8 德国慕尼黑路德维希马克西米利安大学 Max von Pettenkofer 研究所,9 德国慕尼黑感染研究中心,慕尼黑分部,10 伯尔尼大学传染病研究所, 瑞士