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1。Introduction .............................................................................................................................1
硫酸钠可以在DNA中脱氨酸“转化”胞嘧啶,但不会影响5-甲基胞霉素。Bisulfite对DNA的治疗是许多基于表观遗传学的研究的DNA甲基化分析的先决条件,这些研究涉及甲基化分析和甲基化状态的定量。然而,涉及甲硫酸硫酸含DNA的分析率通常由于DNA降解,不完整的转化率和/或低单位的DNA产量而导致可变性。我们已经系统地研究了硫酸氢盐治疗DNA的程序,特别注意该过程中涉及的化学物质并转化sion速率,以限制样品之间的变异性并改善常规方法。我们发现,可以改善常规的硫酸含量DNA转化化学化学液体,以使C到U转化效率的提高,而无需在高温和非生理学pH值下孵育反应混合物的DNA降解水平。对这一过程必不可少的是禁止在某些情况下发生的5-甲基胞嘧啶“过度转化”到尿嘧啶中。我们发现,可以简化硫酸盐转化过程,并通过将热变性与甲硫酸盐转化率耦合和使用柱内的脱硫偶联来清洁和纯化转换后的DNA,并通过将热量变性耦合到最低限度。这种新方法的平均得出的输入DNA平均恢复了> 99%C到U转换。这使其适用于FFPE和LCM衍生的样品,特别适合。该方法已被专门设计用于将(除了纯化的DNA)直接作为输入材料(除纯化的DNA)生物流体,细胞或组织。
II。 研究问题学术建议涉及个性化的研究计划,共享政策信息,跟踪学生的进步以及充当主要的支持联系[3]。 顾问经常在诸如高工作负载,知识不足,犹豫不决的学生以及跨不同系统中的分散信息等问题上挣扎,[4] [5]定义了对话代理或聊天机器人,作为对话系统,能够通过文本,语音或手势(包括手势)(包括手势语言)来理解和生成自然语言内容。 此定义强调了聊天机器人理解和响应自然语言的句子的能力。 [6]进一步强调,这些人工智能工具可以通过自动执行常规任务,合并信息,提供见解,以提高咨询效率和效率并提供学生支持来处理建议问题。II。研究问题学术建议涉及个性化的研究计划,共享政策信息,跟踪学生的进步以及充当主要的支持联系[3]。顾问经常在诸如高工作负载,知识不足,犹豫不决的学生以及跨不同系统中的分散信息等问题上挣扎,[4] [5]定义了对话代理或聊天机器人,作为对话系统,能够通过文本,语音或手势(包括手势)(包括手势语言)来理解和生成自然语言内容。此定义强调了聊天机器人理解和响应自然语言的句子的能力。[6]进一步强调,这些人工智能工具可以通过自动执行常规任务,合并信息,提供见解,以提高咨询效率和效率并提供学生支持来处理建议问题。
胰腺导管腺癌(PDAC)中的摘要尚未发现复发转移特异性突变,这表明表观遗传机制(例如DNA甲基化)是晚期疾病进展的主要贡献者。在这里,我们在小鼠和人类PDAC类器官模型上进行了第一个全基因组纤维纤维测序(WGB),以鉴定特异性和分子亚型特异性DNA甲基化特征。使用这种方法,我们识别了数千种差异化甲基化的(DMR),它们可以区分PDAC的阶段和分子亚型。阶段特定的DMR与与神经系统发育和细胞粘附相关的基因相关,并富含启动子和二价增强子。亚型特异性DMR显示出鳞状亚型中的GATA6前胚层转录网络的过度甲基化和祖细胞亚型中EMT转录网络的过度甲基化。这些结果表明,异常的DNA甲基化构成有助于PDAC的进展和亚型分化,从而产生了具有诊断和预后潜力的显着和重复的DNA甲基化模式。
众所周知,氮是水产养殖中的主要污染物,对鱼类可能有毒性作用。当吸收有毒浓度时,氮可以进入鱼类的血液,影响血液参数,免疫反应并引起氧化损伤和神经毒性。最近,进行了一项研究,以研究氨,肝,生长,组织损伤和免疫指数在甲醛甲醛(FBS)存在下的毒性作用。该研究涉及360 C. rubrofuscus,它们在24个水族箱中随机分布,FBS与将氨的比例与31mg/l:1mg/l。实验是在6种治疗中用15条鱼进行的,并进行了4次重复,直到观察到50%死亡率。研究了鱼类的生长,组织学,血液学,免疫力,肝酶和生化特征,并使用单向方差分析(单向ANOVA)和Duncan的测试对结果进行了分析。研究发现,在FBS存在的情况下,锦鲤鱼的血液,免疫和肝脏指标发生了变化。此外,将FBS添加到水族馆水中减少了鱼储罐中的氮化合物,从而进一步降低了鱼类水族箱中的氮化合物。
DNA甲基化是最丰富,最广泛研究的表观遗传修饰之一,在各种生物学过程中起着至关重要的作用,例如发育,癌症,衰老和复杂疾病。在癌症基因组图集(TCGA)等大型队列研究中,Illumina阵列已被广泛用作高通量筛查的经典平台。但是,这种类型的阵列覆盖了人类基因组中的CpG位点的3%。最新一代的DNA测序技术以PACBIO HIFI系统为例,具有产生长序列读数的独特能力,最高为25千碱基。太平洋生物科学(PACBIO)的最新进步致力于提高每碱基准确性和检测DNA修饰的能力。在这项研究中,我们使用DNA甲基化标准评估了PACBIO HIFI测序的性能。由人DNA在CpG部位酶甲基化的DNA标准和未甲基化的人DNA源自HCT116 DKO细胞系。1 ug。样品被测序为约8倍覆盖范围。DNA甲基化数据,并使用PB-CPG-Tools从BAM文件中提取甲基化值。然后,我们比较了从PACBIO HIFI测序获得的结果与由史诗阵列和整个基因组亚硫酸盐测序(WGB)产生的结果。我们发现WGB和PACBIO HIFI天然DNA甲基化调用表现出很高的一致性,表现优于史诗般的阵列,这两种史诗阵列都与甲基化标准和报道的CPG数量一致。使用甲基化的标准样品,HIFI数据报告约有85%的CpG位点的甲基化比大于90%,平均基因组宽93%。同样,WGBS数据显示了约85%的CpG位点的甲基化比大于90%,平均基因组宽95%。相比之下,Epic阵列仅报告40%的CpG位点的甲基化比大于90%,而整个基因组中平均为87%。这些结果表明,HIFI长读取测序可以准确检测到接近100%甲基化的区域的DNA甲基化信号。我们的研究提供了对检测DNA甲基化模式的PACBIO HIFI测序表现的见解及其作为史诗阵列的替代方案的潜力。这项研究的发现说明了如何将DNA甲基化标准用作评估DNA甲基化调用模型的基础真实参考。
图4。评估纳米旋转的性能。a-b比较了通过纳米重新启动估计的每个CpG基因座的甲基化水平与bisulfite测序和孔雀孔的6.3.8在GM24385数据上。PCC = Pearson相关系数。c-d比较了纳米恢复估计的CpG岛的平均甲基化水平与Bisulfite测序和GYPED 6.3.8在GM24385数据上的平均甲基化水平。
胞嘧啶甲基化是原核和真核生物的天然基础修饰,包括通过甲基转移酶酶将甲基添加到胞质嘧啶环的第五碳位置中(1)。在原核生物中,DNA甲基化提供了一种方法,可以通过限制性核酸内切酶保护宿主DNA免受消化的影响,这些核酸内切酶旨在消除外源DNA。DNA甲基化在基因表达的调节/控制中的较高真核生物中的功能(2)。哺乳动物中的大多数DNA甲基化发生在5'-CPG-3'二核苷酸中,尽管确实存在其他模式。发现哺乳动物基因组中所有5'-CpG-3'二核苷酸的所有5'-CpG-3'二核苷酸被发现是甲基化的,而剩下的20%的二十%的二十%二十分位于启动子或最初的基因外显子内。已经证明异常DNA甲基化是癌症中普遍存在的现象,可能是肿瘤发生期间发生的最早变化之一(3)。DNA甲基化也已显示在基因印记,胚胎发育,X染色体基因沉默和细胞周期调节中起着核心作用。能够有效,准确地检测和量化DNA甲基化的能力对于研究癌症,基因表达,遗传疾病以及生物学的许多其他重要方面至关重要。迄今为止,已经开发了许多方法来检测/量化DNA甲基化,包括:高性能毛细管电泳(4)和甲基化敏感的任意启动PCR(5)。但是,当今使用的最常见技术仍然依赖于亚硫酸盐转化率(6)。用硫酸硫酸氢盐处理DNA化学将非甲基化的胞嘧啶修饰为尿嘧啶,甲基化的胞嘧啶保持不变。转换后,可以使用所需的下游应用确定DNA的甲基化曲线。为了进行单个基因座分析,在亚硫酸盐转化率(即Bisulfite PCR)之后,通常会扩增感兴趣的区域,然后对pyrosequencing®进行测序或处理。甲基化检测的最新进展还允许使用包括基于阵列的方法在内的技术,减少表示甲基甲基甲基化(RRBS)和整个基因组Bisulfite测序(7)。
检测DNA甲基化的常见方法使用硫酸盐或酶将未甲基化的C转换为在测序数据中读取为T。这导致核苷酸多样性低的文库很难对齐。亚硫酸盐治疗损害DNA的恶劣条件,在基因组数据中留下了很大的差距。Illumina 5基本化学直接以简单的单步直接将5MC转换为t,该步骤非启示DNA并保留了库复杂性。