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AAV CAPSID的可变区域I中的单个氨基酸变体赋予肝脏脱落
。cc-by-nc-nd 4.0国际许可证（未经同行评审证明）获得的是作者/资助者，他授予Biorxiv授予Biorxiv的许可，以永久显示预印本。这是该版本的版权持有人，该版本发布于2025年3月5日。 https://doi.org/10.1101/2025.03.04.641478 doi：Biorxiv Preprint
OVX033，一种基于核素的疫苗候选疫苗，在仓鼠挑战模型中对SARS-COV-2变体提供广谱保护
SARS-COV-2中和抗体被认为是保护的相关（2）。然而，已知这种保护会随着关注的变体的出现（VOC）的出现而降低（3），并在远离宿主的适应性反应的关键中和表位中有多个突变。随着时间的流逝，体液反应也会显着减弱，尤其是在65岁以上的免疫功能低下的人或个人中。这突出了需要更长持久和更广泛的保护性疫苗的需求。在能够引起交叉反应反应的冠状病毒蛋白中，结构性核素蛋白（N）蛋白具有很大的兴趣，这是病毒复制过程中最丰富的蛋白质之一，并考虑了其在sarbecovires跨肉毒杆菌跨肉毒杆菌的高度同源性（4-6）。N蛋白是COVID-19期间SARS-COV-2特异性T细胞反应的突出靶标，并且T细胞免疫在控制SARS-COV-2感染中的作用现已广泛认识（7）。SARS-COV-1 N-特异性记忆T细胞在2002 - 2003年在2003年SARS爆发期间感染的人与SARS-COV-2（8）的N蛋白进行了反应，因为两个N蛋白具有90％同源性（4）。SARS-COV-2 N特异性CD8 + T细胞已与防御严重疾病，控制病毒复制的控制以及对多种变体（Alpha，beta，Gamma和Delta）保持至少6个月的抗病毒效率（9）。n特异性抗体反应也通过引发NK介导的和抗体依赖性细胞毒性（ADCC）对感染细胞的NK介导的和抗体依赖性细胞毒性（10），也与肺中的病毒清除率相关（10）。因此，针对N的免疫反应对于开发广谱疫苗至关重要。OVX033是一种重组疫苗候选者，包括SARS-COV-2病毒（Wuhan原始菌株）的全长核素抗原。n抗原被遗传融合到OVX313序列（寡素®），Osivax的自组装结构域，可提高抗原免疫原性（11）。与旨在产生抗体反应中和循环SARS-COV-2病毒的抗体反应的疫苗相反，OVX033 N的基于OVX033 N的疫苗旨在杀死受感染的细胞，从而限制感染和疾病症状。作为N在SARBECOVIRES中良好保守，OVX033疫苗被认为可以类似地保护各种SARBECOVIRUS菌株。在本文中，我们介绍了提供的交叉保护的第一个结果
无细胞试验表明 HIV-1 衣壳可保护逆转录产物免受 cGAS 免疫感应的影响
逆转录病毒可被先天免疫传感器环鸟苷酸环磷酸腺苷合酶 (cGAS) 检测到，该合酶可识别逆转录 DNA 并激活抗病毒反应。然而，HIV-1 保护其基因组免受 cGAS 识别的程度仍不清楚。为了详细研究这一过程的机制，我们在无细胞系统中重建了 HIV-1 的逆转录、基因组释放和先天免疫感应。我们发现，即使在完成逆转录后，野生型 HIV-1 衣壳也能保护病毒基因组免受 cGAS 的侵害。病毒 DNA 可能因热应激、衣壳突变或肌醇六磷酸 (IP6) 浓度降低而“脱保护”，这些因素会使衣壳不稳定。令人惊讶的是，衣壳抑制剂 lenacapavir 也会破坏病毒核心并显著增强 cGAS 活性，无论是在体外还是在细胞感染中。我们的研究结果提供了生化证据，表明 HIV-1 衣壳晶格隐藏了 cGAS 的基因组，而病毒核心的化学或物理破坏可以暴露 HIV-1 DNA 并激活先天免疫信号。
G4-DNA和G4-RNA在类开关重组中的作用以及B淋巴细胞中的其他法规
摘要：HIV-1 Nucleocapsid蛋白7（NC）是有效的抗逆转录病毒治疗的潜在靶标，这是由于其在病毒复制中的核心作用，主要与核酸（NA）伴侣活性有关，并且对耐药性的敏感性较低。通过筛选化合物库，我们识别了一种已知的碳水化合物结合剂CN14_17氨基吡咯酸化合物CN14_17，该化合物抑制了低微摩尔范围内的NC伴侣蛋白活性。与大多数可用的NC抑制剂不同，CN14_17完全阻止了NC诱导的互补NA序列的退火。使用荧光测定和等温滴定量热法，我们发现CN14_17与NC竞争与NAS结合，优先针对单链序列。分子动力学模拟证实了与CTAR结合的结合优选发生在浓度浓度的鸟嘌呤单链序列中。最后，CN14_17在低微摩尔范围内表现出抗逆转录病毒活性，尽管具有中等的治疗指数。总体而言，CN14_17可能是新的NC抑制剂类别的祖先。关键字：HIV-1，核素蛋白，NCP7，抑制剂，荧光，抗病毒
具有CNS靶向工程的Capsids的全身性AAV基因治疗可实现灵长类动物大脑的显着gcase活性，以支持潜在的
Capsida正在开发一种基因补充疗法候选者（CAP-003），该疗法被作为单一静脉注射（IV）输注对PD-GBA患者。CAP-003由一个工程的AAV CAPSID组成，旨在在CNS上广泛提供功能性的人GBA1基因，同时对肝脏和DRG进行靶向，这些基因已被证明与以前的基因治疗计划中的安全问题有关。使用功能丧失的小鼠模型，我们提供了概念药理学证明，表明使用替代capsid的治疗货物的给药会导致GCASE活性的剂量依赖性增加，而GCASE活性与糖脂积累的剂量依赖性降低相吻合。在非人类灵长类动物中使用临床候选者，我们表明，在低至中剂量下的CAP-003给药会导致整个CNS的稳健表达，同时GCASE蛋白水平和活性的增加，这表明与生物含量相似的测量相关性很强。鉴于患者人群的脑gcase活性降低了约30％，预计观察到的增加将使活性水平归一化，降低糖脂，并可能降低或停止PD-GBA的进展。
aAV2.7M8封装包的异质矢量基因组高于AAV2
重组腺相关病毒（RAAV）载体目前是通过基因疗法治疗眼科疾病的唯一经过验证的车辆。目前正在采用针对眼部疾病的广泛基因治疗计划。将近20年的研究已经增强了靶向视网膜组织并改善转基因对特定细胞类型的效率。工程化的AAV CAPSID，AAV2.7M8目前是玻璃体内（IVT）注射后转导视网膜的最佳衣壳之一。然而，在视网膜在临床试验中施用AAV2.7M8载体后，已经报道了包括眼内炎症在内的不良反应。此外，我们一直观察到AAV2.7M8表现出低包装滴度，而与矢量构造设计无关。在本报告中，我们发现AAV2.7M8包装矢量基因组具有比AAV2更高的程度。我们还发现，基因组加载的AAV2.7M8刺激了IVT给药后小鼠视网膜中小胶质细胞的纤维化，而对基因组负载的AAV2和空的AAV2.7M8 capsids的反应产生了很多较轻的响应。这个发现表明，IVT施用AAV2.7M8载体可能会刺激视网膜免疫反应，部分原因是它偏爱包装和提供非单位长度基因组。
系统性多性状 AAV 衣壳工程实现高效基因传递
扩大基因治疗应用需要可制造的载体，这些载体可以有效地传导人类和临床前模型中的靶细胞。传统的腺相关病毒 (AAV) 衣壳文库选择方法无法在广阔的序列空间中搜索一小部分具有临床转化所必需的多种性状的载体。在这里，我们介绍了 Fit4-Function，这是一种可通用的机器学习 (ML) 方法，用于系统地设计多性状 AAV 衣壳。通过利用均匀采样可制造序列空间的衣壳文库，可以生成可重复的筛选数据来训练准确的序列到功能模型。结合六种模型，我们设计了一个多性状（肝脏靶向、可制造）衣壳文库，并根据所有六个预定标准验证了 88% 的文库变体。此外，仅使用小鼠体内和人类体外 Fit4Function 数据进行训练的模型准确预测了 AAV 衣壳变体在恒河猴中的生物分布。顶级候选物表现出与 AAV9 相当的生产产量、高效的小鼠肝脏转导、高达 1000 倍的人类肝细胞转导以及在恒河猴肝脏转导筛选中相对于 AAV9 的富集度增加。Fit4Function 策略最终使得预测肽修饰 AAV 衣壳的跨物种性状成为可能，并且是组装预测 AAV 衣壳在数十种性状中表现的 ML 图谱的关键一步。
专有的HEK293 AAV生产系统可以达到超过50％的全帽，而收获时大于1E15VG/L，可实现可伸缩色谱
专有的HEK293 AAV生产系统可以达到超过50％的全帽，而收获时大于1E15VG/L，可实现高收率和纯度
AAV空capsids的强制退化研究 - 祖AAV空capsids的强制退化研究 - 祖
尺寸排除最高性能液相色谱（SEC-HPLC）：对于冻融（AAV-FT），高温（AAV-45°C）和氧化（AAV-OX）压力样品，后代AAV样品是缓冲液的2x PBS，0.001％poloxamer 188。用0.1％过氧化氢进一步将氧化（AAV-OX）应力样品进一步加标。对于高pH（AAV-PH9）强调样品，将后代AAV样品换成50mm Tris-HCl pH 9，0.001％P188。
