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接近驱动的DNA纳米传感器
摘要：遗传疾病在维持与这些疾病的人们保持良好的生活质量方面存在着巨大的障碍。通常，患者认为治疗症状不足，这可能会对体内产生有害影响。通过基因工程，科学家利用了定期短的alindromic重复（CRISPR） - 相关蛋白（称为Cas9）来处理问题的根源。CAS9蛋白通常与指导RNA或核糖核蛋白复合物（RNP）代码，以确保靶向遗传工具的靶向递送以及限制o效应的影响。本文概述了通过封装纳米颗粒将Cas9封装和交付给人体所需位置的当前进展。使用CAS9系统允许进行基因编辑时必须考虑几个因素。材料选择对于保护交付矢量的有效载荷至关重要。当前的文献表明，脂质和聚合物的纳米颗粒作为CAS9的递送容器表现出最大的潜力。脂质纳米颗粒在诊所中的基于聚合物的纳米颗粒大大超过了聚合物可能引入的好处。在开发可翻译系统时，尚未考虑与CAS9交付有关的因素在此观点中突出显示。CAS9的适当功能取决于维持适当的内部环境；但是，文献中存在有关这些最佳条件的差距。CAS9蛋白，代码分子和输送车辆的电荷之间的相互作用可能会影响发生基因编辑的效果。虽然目前尚不确定纳米颗粒及其对CAS9的效果的内部电荷，但由于其足够的尺寸，可修改的外部电荷，并且能够进行调整，目前纳米颗粒目前是Cas9蛋白的理想输送方法。总体而言，迄今为止，发现基于阳离子的脂质/聚合物纳米颗粒系统的前景最多。通过了解其他系统的成功，可以开发可翻译的，基于聚合物的交付车。
SygRNA® 合成 gRNA 和 Cas9 蛋白
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通过Cas9增强位点特异性DNA集成...
CRISPR / CAS系统广泛用于基因组编辑。然而，强大的和有针对性的DNA段插入仍然是一个挑战。在这里，我们提出了一个融合核酸酶（CAS9-N57），以通过融合的DNA结合结构域增强位点DNA的整合，以使DNA片段将DNA段带到Cas9 / Sgrna络合物。插入是单向和特定的，并且长度长达12 kb的DNA片段已成功整合。作为对系统的测试，CAS9-N57在人类T细胞中插入CD19特异性嵌合抗基因受体（CD19卡）盒（CD19-CAR）盒中的AAVS1基因座，并通过同时发生的肌肉凝聚和肌肉凝聚在小鼠中，并诱导肌内胆管癌的位置，并促进了inscogen2的inscogen gecogenion inscogenion inscogenion inscogenion ogenition，破坏TRP53和PTEN。更重要的是，基于ASCPF1（ASCAS12A）和CJCAS9的Nuclease-N57融合蛋白表现出相似的活性。这些发现表明，CRISPR-核酸酶-N57蛋白融合是靶向DNA插入的强大工具，并且对基因治疗应用非常有用。
Cas9 核酸酶 GFP NLS 蛋白
产品描述 成簇的规则间隔短回文重复序列 (CRISPR)/Cas9 系统是基因组编辑中最新的 RNA 引导核酸内切酶工具，可实现非常具体的基因组破坏和替换。Cas9 核酸酶 NLS 与 GFP 的融合可实现转染的视觉确认以及随后的 Cas9 从细胞中清除的验证。Cas9 核酸酶-GFP 也可用于 FACS 应用和筛选。Cas9 核酸酶-GFP NLS 在蛋白质的 C 端包含 SV40 T 抗原核定位序列 (NLS)。
基于 CRISPR/Cas9 的基因组编辑可加快......
棕榈科植物包括 200 个属，2500 多个品种，在农业食品生产和工业应用领域仅次于禾本科 (Poaceae) 和豆科 (Fabaceae)。椰子 (Cocos nucifera L.)、槟榔 (Areca catechu L.)、油棕 (Elaeis guineensis Jacq.) 和枣椰子 (Phoenix dactylifera L.) 是棕榈科中具有重要经济价值的多年生植物。椰子通常被称为“生命之树”，因其在食品、营养、医药和各种工业用途中的广泛应用而闻名 (Ramesh et al., 2021)。椰子产品包括从椰仁或种皮中提取的食用油、嫩椰子水、椰仁、椰干、椰子壳、椰子饼、木质产品、椰壳髓以及各种增值过程产生的物品。未开放的佛焰苞被挖掘以提取花序汁液（neera），可进一步加工成棕榈糖、糖、醋和各种副产品（Hebbar 等人，2022 年）。槟榔（Areca catechu L.）是热带亚洲和东非部分地区的一种作物。在印度，它是一种重要的经济作物，也有重要的医学价值，主要种植在该国的几个邦。尽管如此，其商业产品分布在整个印度，该国在种植面积和产量方面无疑处于领先地位，占世界产量的 54%。槟榔棕榈的果实或坚果，俗称槟榔或 supari，在印度人民中作为咀嚼产品使用已有悠久历史，可以追溯到吠陀时期。因此，槟榔与印度的历史和社会遗产深深交织在一起。在全球范围内，仅亚洲就有多达 6 亿人食用槟榔。另一方面，椰枣生长在埃及、伊朗、沙特阿拉伯和阿联酋等干旱地区（Aljohi 等人，2016 年）。除了果实外，椰枣种子也是食用油的新来源，进一步拓展了其工业应用（Ali 等人，2015 年）。油棕是一种具有经济重要性的棕榈树种，供应着全球约 35% 的植物油。油棕的遗传改良可能在全球营养安全中发挥关键作用。
大豆中不含 DNA 且不依赖基因型的 CRISPR/Cas9 系统
简介 CRISPR/Cas9 系统彻底改变了植物基因工程领域 1-3 。为了促进植物中先进而精确的定点诱变，CRISPR/Cas9 系统的表达模块经常作为外来 DNA 整合到宿主基因组中。这种整合通常通过粒子轰击或农杆菌介导的转化等方法实现 4-5 。然而，基因组编辑过程通常会在特定的目标植物物种和菌株中遇到挑战。这些挑战主要源于转化过程中植物再生关键步骤可用基因型的限制。值得注意的是，农杆菌介导的拟南芥花浸法 6 或小麦粒子轰击 7 等方法已成功直接生产出基因组编辑植物，
Screen It™ CRISPR Cas9 切割检测试剂盒
目录 简介……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………3 组件……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………4 所需其他材料…………..……………………………………………………………………………………………………………………………………………………4 存储…………………………………..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………4 靶向特异性引物设计….…………..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………4 靶向特异性寡核苷酸设计…….…………..………………………………………………………………………………………………………………………………………………………5 方案 A 部分 – 细胞裂解…….…………..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………6 B 部分 – PCR……….…………..………………………………………………………………………………………………………………………………………………6 C 部分 – sgRNA 合成………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………7 D 部分 – 体外 Cas9 裂解 ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….9 E 部分 – 裂解产物分析………………………………………………………………………………………………………………………………………………..…..………10
评论文章：CRISPR/CAS9基因组编辑...
基因疗法已成为各种疾病（包括血液疾病，眼部疾病，癌症和神经系统疾病）的有希望的治疗策略。基因编辑技术的出现促进了研究人员专门靶向和修改真核细胞基因组的能力，使其成为基因治疗的宝贵工具。这可以通过体内或离体方法进行。基因编辑工具，例如锌指核酸酶，转录激活剂样效应子核酸酶和与CRISPR-Cas相关的核酸酶，可以用于基因治疗目的。在这些工具中，基于CRISPR-CAS的基因编辑之所以脱颖而出，是因为它通过设计简短的指南RNA来引入可遗传基因组变化的能力。本评论旨在提供CRISPR-CAS技术的概述，并总结有关CRISPR/CAS9 ge-Nome编辑技术在治疗最普遍的神经退行性疾病中的最新研究，其中包括阿尔茨海默氏病，帕金森氏病，亨廷顿病，亨廷顿氏病，杏仁脂性下层状硬质量和尖顶Ataxia ataxia，关键词：基因编辑，神经退行性疾病，CRISPR/CAS9，阿尔茨海默氏病，帕金森氏病，亨廷顿氏病，肌萎缩性侧面硬化症，脊椎胡子共济失调
SITE-Seq：一种测量 Cas9 切割的全基因组方法
进行多个反应时，我们通常将它们组合起来，然后装入 15 μL 进行分析。**I. 末端修复和适配器 2 连接。**1. 从 -20°C 中取出 NEBNext Ultra 末端修复/ dA 尾部模块试剂，在冰上解冻。2. 按如下方式组装末端修复反应：碎片 DNA \（来自步骤 H）\（27.7µL）末端修复缓冲液 \（10x）\（3.3µL）末端修复酶混合物 \（1.5µL）水 \（0.5µL）总计 \（33µL）3. 将反应在 20°C 下孵育 30 分钟，然后在 65°C 下孵育 30 分钟。 4. 在末端修复过程中，按照下列步骤形成接头 2： 接头 2 N7 Forward \(100µM) \(1µL) 接头 2 N6 Forward \(100µM) \(1µL) 接头 2 N5 Forward \(100µM) \(1µL) 接头 2 Rev \(100µM) \(3µL) 2x Annealing Buffer \(6µL) Total \(1µL) 5. 将接头 2 混合物在 95°C 下孵育 5 分钟，然后让反应
评论文章：CRISPR/CAS9 基因组编辑...
基因治疗已成为治疗各种疾病（包括血液疾病、眼部疾病、癌症和神经系统疾病）的一种有前途的治疗策略。基因编辑技术的出现促进了研究人员专门针对和修改真核细胞基因组的能力，使其成为基因治疗的宝贵工具。这可以通过体内或体外方法进行。基因编辑工具（例如锌指核酸酶、转录激活因子样效应核酸酶和 CRISPR-Cas 相关核酸酶）可用于基因治疗目的。在这些工具中，基于 CRISPR-Cas 的基因编辑脱颖而出，因为它能够通过设计短向导 RNA 引入可遗传的基因组变化。本综述旨在概述 CRISPR-Cas 技术，并总结 CRISPR/Cas9 基因组编辑技术在治疗最常见的神经退行性疾病（包括阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病、肌萎缩侧索硬化症和脊髓小脑共济失调）方面的最新研究。关键词：基因编辑、神经退行性疾病、CRISPR/Cas9、阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病、肌萎缩侧索硬化症、脊髓小脑共济失调