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摘要基于靶向选择的基因组编辑方法已实现许多基础发现,并且通常以高精度使用。然而,我们发现,在芽殖酵母中用常见的选择盒替换 DBP1 会导致相邻基因 MRP51 的表达和功能降低,尽管所有 MRP51 编码和调控序列都保持完整。盒式诱导的 MRP51 抑制导致了在删除 DBP1 的细胞中检测到的所有突变表型。这种行为类似于“邻近基因效应”(NGE),这是一种机制未知的现象,即在一个基因座插入盒式会降低邻近基因的表达。在这里,我们利用 DBP1 盒式替换导致的强烈脱靶突变表型来提供对 NGE 的机制洞察。我们发现启动子(包括表达盒中的启动子)固有的双向性会驱动发散转录本,该转录本通过转录干扰和翻译抑制来抑制 MRP51,而这种抑制是通过产生长未解码转录本异构体 (LUTI) 介导的。驱动这种脱靶效应的发散转录本产生对于酵母表达盒来说是普遍存在的,并且随插入而普遍发生。尽管如此,脱靶效应通常可以通过局部序列特征自然阻止,例如终止盒插入位点和邻近基因之间的发散转录本的序列特征。因此,可以通过将转录终止子序列插入盒中(位于启动子两侧)来消除盒诱导的脱靶效应。由于这种脱靶效应的驱动特征被广泛保留,我们的研究表明,在使用集成表达盒的其他真核系统(包括人类细胞)中的实验设计和解释时应考虑到这一点。
“X 射线台”是指在射线照相和/或台面荧光透视期间,患者支撑结构(台面)介于患者和图像接收器之间的患者支撑装置。这包括但不限于任何配有射线可透面板的担架和任何配有盒式托盘(或滤光片)、盒式隧道、荧光透视图像接收器或台面下方点片装置的桌子。
考虑到纳米孔测序的~5%测序错误(主要是插入和缺失)和供体片段的部分截断整合,我们在分配数据时基于预期的完美插入大小将间隔扩大±20%。然后,我们用正向骨架插入(Bf)、反向骨架插入(Br)、正向F8盒式插入(F8f)和反向F8盒式插入(F8r)的grepseqs分析了9个数据集特定长度范围内的数据。最后,我们计算出F8盒式插入和骨架整合的比例,分别为40.24%和44.47%。有趣的是,完全供体整合占总插入事件的14.16%,而其余的插入涉及两个相同的片段和三个片段的整合(图5B)。
摘要。Ruzyati M,Sisharmini A,Apriana A,Santoso TJ,Purwanto E,Samanhudi,Yunus A.2022。CRISPR/CAS9_GRNA-OSCKX2模块盒的构建及其引入米CV。Mentik Wangi由农杆菌Tumefaciens介导。生物多样性23:2679-2689。Mentik Wangi是一种来自热带Japonica群体的芳香稻米品种,其姿势高且生产率低。高大的植物姿势使Mentik Wangi大米容易容易住宿,从而导致产量损失。因此,仍然需要提高Mentik Wangi的植物高度和生产力。SD-1(OSGA20OX-2)和CKX2基因负责半矮人特征和高生产率。这项研究旨在构建一个带有OSCKX2基因的GRNA的CRISPR/CAS9盒式模块,并将这种结构引入由Tumefaciens vector lba4404介导的Mentik Wangi水稻。也在先前对Mentik Wangi大米的研究中构建的CRISPR/CAS9_GRNA-GA20OX-CASTETE质粒的引入。结果表明,CRISPR/CAS9_GRNA-CKX2盒式模块已成功地使用Golden Gate Cloning方法构建。将CRISPR/CAS9_GRNA-CKX2和CRISPR/CAS9_GRNA-GA20OX-2盒式模块引入Mentik Wangi Rice,导致了30种通过Hygromycin选择的推定转化线。PCR分析表明,从30条变换线中,15条线对抗霉素抗性基因呈阳性。必须进行进一步的分析,以确定OSCKX2和GA20OX-2靶基因中诱变的发生。
(A) 顶部:将目标 Gal4(深蓝色,顶部构建体)与编码 Cas9 的版本 2 (V2) 供体菌株杂交,该菌株由 X 上的 vasa 启动子控制(未显示),而 CyO 上的供体构建体则包含 T2A。LexA 由 floxed 3xP3-RFP、黄色+ 盒标记,两侧是 Gal4 同源臂和 U6 驱动的向导 RNA(CyOHACKy.V2,y +、RFP +)。从上往下第三行:得到的 HACKed 染色体,其中 Gal4 ORF 已被破坏并由 T2A.LexA 替换,由视觉标记黄色+和 RFP+标记。底部:与 hs- Cre 杂交后,黄色 +、RFP + 盒被移除。
Redwire 高级空间实验处理器 (ADSEP) 是一种全自动、多用途单舱式储物柜处理设施,用于进行各种生命和物理科学研究以及小批量生产。ADSEP 设施包含三个独立的热区,每个热区可容纳一个“微型实验室”盒式磁带,以及一台控制所有三个盒式磁带处理的内部计算机。每个盒式磁带外壳设计为为每个实验提供最多 2 级遏制,从而允许进行 HRL-2 级实验。该设施与盒式磁带的内容无关。因此,可以同时在不同的盒式磁带中进行完全独立的研究。盒式磁带是“热插拔”的,使工作人员能够成功地连续运行不同的实验。
geelongisuzu.com.au › media › frr... PDF 1999 年 1 月 15 日 — 1999 年 1 月 15 日 Isringhausen ISRI 6500/517 空气悬架 ... Eurovox AM/FM 收音机盒带数字时钟,仪表板安装。分区>...可靠性就是一切
isuzu.com.au › media › upjbvyyf PDF 1999 年 1 月 15 日 — 1999 年 1 月 15 日 Isringhausen ISRI 6500/517 空气悬架 ... Eurovox AM/FM 收音机盒带数字时钟,安装在仪表板上...可靠性就是一切