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使用CAS9或DCAS9靶向常染色体ceratis capitata变压器基因，以使XX个体成为男性化的XX个体，而无需诱导突变
背景：地中海果蝇的女性Capitata（Medfly）是主要的农业害虫，因为它们将鸡蛋放入数百种植物的水果作物中。在Medfly中，女性确定是基于CCTRANSFORMER（CCTRA）的激活。CCTRA的母体贡献是需要在XX胚胎中激活CCTRA，并通过女性特异性的替代剪接来开始和表观上保持CCTRA阳性反馈回路，从而导致女性发育。在XY胚胎中，确定雄性基因（MOY）的雄性阻断了这种激活，CCTRA会产生编码截短的CCTRA同工型和男性分化的男性特异性转录本。结果：为了诱导第一个编码外显子中的移码突变，以破坏女性特异性和较短的男性特异性CCTRA开放式阅读框（ORF），我们在胚胎中注射了Cas9核糖核蛋白（Cas9和单个指导RNA，SGRNA，SGRNA，SGRNA，SGRNA）。由于这种方法大多导致单相关突变，因此在携带双重突变的G 1 XX个体中，男性化才预计，在G 0注射个体的交叉之后。令人惊讶的是，这些注射仅XX胚胎导致了G 0成人，不仅包括XX女性，还包括50％的肥沃XX雄性。G 0 XX雄性表达男性特异性CCTRA转录本，表明完全男性化。有趣的是，在六个G 0 XX男性中，有四个显示了CCTRA野生型序列。这一发现表明，Cas9-SgrNA注射的男性化与其诱变活性无关。与这种观察结果一致，通过死亡的Cas9（酶促无活性，DCAS9）将CCTRA的胚胎靶向XX胚胎，也有利于胚胎和成人中CCTRA的男性特异性剪接。
Elis章
1990 - 1993 “Development for a germ-line transformation system for the Medfly, Ceratitis capitata ” (DG XII - STD) 1993 - 1995 “Linkage analysis and population genetics of Ceratitis capitata ” entro il “Network of Insect Genome Analysis (NIGA)”, European Communities Program “Human Capital & Mobility” (DG XII) 1995 - 2000 “ Genetic and molecular天然人群的特征和ceratisis炎的遗传性菌株的表征”（国际原子能局，奥地利维也纳，奥地利维也纳）1994-1994-1997“环境安全，整合的系统，用于控制地中海果蝇capitata”，欧洲社区（欧洲社区），使用核技术（DG VI） （国际原子能局，奥地利维也纳）1996-1998“对媒介的识别和发展气候驱动的风险评估模型的发展”（EU Program Inco，DG XII）1996-1998“南部非洲的弧菌病毒疾病，南部非洲的螺旋病毒疾病 - 风险评估的识别和欧洲范围的识别（欧洲范围）〜2009 - 2010年，“伦巴第伊斯（Ades boptus）（亚洲老虎蚊子）的入侵动力学的研究”（意大利的Fondazione Banca del Monte di Lombardia）17630年，AR MALACRIDA；联合国的粮农组织/国际原子能机构计划； Wolbachia和SGH病毒对Glossina生殖行为的影响；分析Wolbachia和SGH对功能基因组学水平上采集繁殖的影响。角色：PINIHR21 AI109263-02，Aksoy/Attardo（MPIS）；扩展采集生殖生物学的工具箱；角色：分包合同的PIWHO/TDR A80132，OUMA（PI）；综合采采蝇生态学和遗传学可改善帽子控制。分析野生采摘种群中的Remaing。角色：共同研究员2009-2014“蚊子遗传控制的研究能力”（Infravec）EU-FP7能力，研究基础设施NIHR21AL109263-01，02/02/01/01/14-12/14-12/01/17;扩展采集生殖生物学的工具箱；角色：Co -PI2010年-1014 Medfly，Ceratisis Capitate基因组测序联盟（USDA-意大利帕维亚大学 - 意大利 - 贝勒学院，美国德克萨斯州休斯敦）17630，联合国粮农组织/ IAEA计划； 02/01/13-02/01/18; Wolbachia和SGH病毒对Glossina生殖行为的影响；角色：pi
Charalambos Savakis，医学博士PhD
minos是果蝇海德（Drosophila Hydei）的TC 1型型2型转座元件，在克里特郡IMBB的Savakis实验室中发现。我小组的工作表明，MINOS可以在各种无脊椎动物，人培养细胞以及小鼠体细胞和生殖线细胞中转置。minos-主要的农业害虫塞拉蒂炎，ceratitis ceratiso ceratitis介导的生殖系转化，是转座子介导的果蝇和米诺斯以外的昆虫中转座介导的转基因的首次演示，用于转化蚊子蚊子和橄榄蝇菌（DACUS）。Minos基于果蝇中基于果蝇中的插入诱变现在被确定为该模型生物体中基因组功能分析的重要工具。
加州食品和农业部 - CA.gov
地中海果蝇紧急计划公告修正案 2024 年 8 月 28 日至 2024 年 12 月 18 日，加州食品及农业部 (CDFA) 确认，在阿拉米达县的弗里蒙特、纽瓦克和联合城共捕获了 71 只成年地中海果蝇 (Medflies) Ceratitis capitata (Wiedemann)。此外，三处土地上的果树已被确认受到地中海果蝇幼虫的侵扰。根据这些检测、害虫生物学、来自 CDFA 地中海果蝇科学咨询小组 (MedSAP) 的信息、州一级昆虫学家以及 CDFA 的“地中海果蝇 Ceratitis capitata (Wiedemann) 行动计划”，CDFA 得出结论，该地区存在地中海果蝇的侵扰。这种害虫对加州的自然环境、农业和经济构成了重大、明显和迫在眉睫的威胁。除非采取紧急措施，否则阿拉米达县和圣克拉拉县未来很有可能突然发现这种害虫。根据综合害虫管理原则，加州食品和农业部评估了可能的根除方法，并确定没有可用于从该地区消灭地中海果蝇的文化方法。此紧急计划公告有效期至 2025 年 8 月 15 日，这是根据地中海果蝇治疗方案的要求，在地中海果蝇的三个生命周期内实施治疗计划所需的时间。加州食品和农业部将采用生物和化学控制作为主要手段，并在有证据表明某处土地上存在繁殖种群时，通过移除寄主果实进行物理控制。发现上述地中海果蝇需要立即采取行动，以应对对加州自然环境、农业和经济的迫在眉睫的威胁。更具体地说，除了各种经济作物外，地中海果蝇还威胁着当地野生动物、私人和公共财产以及食品供应的损失和损害。由于在 2024 年 8 月 28 日至 2024 年 12 月 18 日期间发现的地中海果蝇的生命周期尚未结束，因此未来在阿拉米达县和圣克拉拉县突然发现地中海果蝇的可能性很高。因此，部长援引《公共资源法典》第 21080(b)(4) 条采取紧急行动，以防止上述损失和加州资源受损。地中海果蝇侵扰的治疗计划将按以下方式实施：
加利福尼亚食品和农业部-CA.GOV
在2024年8月28日至2024年12月12日，加利福尼亚州粮食和农业部（CDFA）之间，《地中海果实的宣告宣告紧急计划的修正案》证实，有70种成人地中海果蝇（Medflies），Ceratisitis Ceratitis capitata Capitata（Wiedemann）（Wiedemann）（Wiedemann）（Wiedemann）是弗雷曼（Countar）的Neward and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and。此外，已经证实三种特性上的果树被幼体药物感染。基于这些检测，有害生物学，来自CDFA地中海果蝇科学咨询小组（MEDSAP），主要国家昆虫学家的信息以及CDFA的“地中海果蝇Ceratisis capitata（Wiedemann）的行动计划”，CDFA的结论是，CDFA的结论是，该地区的疾病是该地区的疾病。这种害虫对加利福尼亚的自然环境，农业和经济构成了重大，清晰和迫在眉睫的威胁。除非采取紧急行动，否则在阿拉米达和圣塔克拉拉县突然发现未来的发现很高。根据综合的害虫管理原则，CDFA评估了可能的根除方法，并确定没有可以消除该领域的Medflies的文化方法。这项紧急计划的宣告有效期至2025年8月15日，这是Medfly治疗方案要求执行MedFly三个生命周期的治疗计划所需的时间。CDFA将采用生物学和化学控制作为主要工具，并在有证据表明物业上存在繁殖种群时，还将通过宿主水果去除物理控制。对上述药物的检测需要立即采取行动，以应对对加利福尼亚自然环境，农业和经济的迫在眉睫的威胁。更具体地说，除了多种商业作物外，Medfly还威胁着对本地野生动植物，私人和公共财产以及食品供应的损失和损害。，由于2024年8月28日至2024年12月12日之间发现的Medflies的生命周期尚未发生，因此在阿拉米达和圣克拉拉县突然发现未来的检测可能很高。因此，秘书正在援引公共资源法第21080（b）（4）条，以立即采取紧急行动，以防止上述损失和对加利福尼亚资源的损失。Medfly侵扰的治疗计划将如下实施：