肽映射样品制备:AAV8参考材料在2x10 13 Vg/ml的浓度下包含20μl的总体积。这导致消化的估计总蛋白浓度为0.12μg/μL,总蛋白质为2.4μg。将AAV样品在6 m尿素中变性,在80℃以1 mm DTT变性30分钟,然后用15 mm iodoacetamide烷基化在黑暗中的室温下在室温下30分钟。将还原和烷基化的样品冷却至室温,并用3次同等体积的缓冲液(50 mM Tris-HCl和1 mm CaCl 2 [pH 7.5])稀释,将尿素浓度降低至<2M。然后将样品降低到<2M。然后用0.4 µ µGGGRYPSIN或CHYMOTRYPESIN或CHYMOTRYPSIN或CHYMOTRYPRYRYPERSIN或CHYMOTRYPRYRYPRYRYPRYRYPRYRYSIL逐夜消化。通过将甲酸添加到最终浓度的10%中终止消化,并将样品直接注入LCMS-9050进行分析。
致谢 本报告由美国环保署水务办公室工程与分析部的 S. Bekah Burket 和 Adrian Hanley 编写,通用动力信息技术公司 (GDIT) 的 Mirna Alpizar 和 Harry McCarty 协助编写。美国环保署感谢多家组织和个人在开发和验证水样中可吸附有机氟检测方法草案方面提供的支持,包括美国环保署工作组成员、原始程序的开发人员、提供大量废水样本的组织,以及美国环保署的支持承包商人员,他们在研究期间监督日常运营并协助美国环保署编写本报告。至少包括以下内容:
Over the course of 1 week, I learn 12 analytical devices (Transmission Electron Microscopy, UV-Visible Spectroscopy, Water Testing (pH, Turbidity & Total Suspended Solid), Gas Chromatography Mass Spectroscopy, NMR, High Performance Liquid Chromatography, Thermal Gravimetry Analyzer/Differential Scanning Calorimetry, Scanning Electron Microscopy & Field Emission Scanning Electron Microscopy/EDX, Fourier在大学技术中心分析实验室中,转化红外光谱,X射线衍射仪,表面积和孔隙分析仪。我的主管是Hashila夫人,她指导我通过该设施的所有机器,并向所有技术人员进行了介绍。在这里我在中央分析实验室中概述了我在整个期间取得的三个主要结果:
1简介1 2背景2 2.1什么是外泌体?2 2.2 Exosome structure and interaction 4 2.3 Application of exosomes 6 2.4 Isolation of exosomes 7 2.5 Quality control measures 8 2.6 The focus of this report 8 3 Non-chromatography methods for exosome purification 9 3.1 Ultracentrifugation 9 3.1.1 Advantages and disadvantages of ultracentrifugation 10 3.2 Ultrafiltration 10 3.2.1 Advantages and disadvantages of ultrafiltration 11 3.3 The principle of immunoaffinity 11 3.3.1 Advantages and disadvantages of immunoaffinity 11 3.4 Precipitation 12 3.4.1 Advantages and disadvantages of precipitation 12 3.5 Scalability of UC, UF and precipitation 13 4 Exosome purification using agarose chromatography techniques 14 4.1 Purification of exosomes based on size 16 4.1.1 Size-exclusion chromatography (SEC) 16 4.1.1.1 sec在EV和外部组中研究16 4.1.1.2使用SEC 17 4.1.1.3隔离EV的交联的Sepharose树脂,用于外部和EV-溶解的预包装的SEC柱18 4.1.1.4
5。生物化学分析中的技术5.1)5.1生物化学分析简介5.2)5.2提取方法5.3)5.3)5.3色谱原理和技术5.4)5.4)5.4)5.3.1纸色谱5.5)5.3.2薄层色谱法(TLC)5.6 5.6)5.3.3高性能液体液体液体液态学(HPLC)5。3. 3. 3. 3. 3. 3.4 asemomant 5.3.4 asemoticaphy 5.3 3.4 asemoticaphy(gc)53. 4 gcomatempraphy(gc)。色谱法(SEC)5.9)5.3.6离子交换色谱5.10)5.3.7亲和色谱5.11)5.4分光光度法5.12)5.4.1啤酒定律
有机化合物的最大值2通过比色法估计葡萄糖3通过比色法估算磺基酰胺4同时估计布洛芬和扑热息痛通过紫外光谱法5通过紫外线测定量质量测定的甲酰胺8的测定量为素氨基素的8个测定的素氨基氨基甲基素的含量8的测定7钠通过火焰光度法9通过火焰光度法测定钾的测定10通过肾浊度测定测定氯化物和硫酸盐通过肾浊度测定11通过纸色谱法分离氨基酸12通过薄层色谱分离糖分13薄层色谱法13通过色谱法对植物色素分离14柱色素14示范实验在HPLC 15示范实验上示威实验,示威实验
液相色谱技术 完成本模块后,学生应能够使用不同类型的高效液相色谱 (HPLC) 仪器进行化学分析,例如反相色谱、离子色谱 (IC) 和液相色谱-质谱 (LCMS)。他们还将能够排除液相色谱仪器的故障并进行基本的日常维护。
液相色谱技术 完成本模块后,学生应能够使用不同类型的高效液相色谱 (HPLC) 仪器进行化学分析,例如反相色谱、离子色谱 (IC) 和液相色谱-质谱 (LCMS)。他们还将能够排除液相色谱仪器的故障并进行基本的日常维护。
纸色谱法可用于研究进化关系。植物的叶子被磨碎并与溶剂混合。然后过滤地面叶和溶剂的混合物。使用牙签,将二滴滤液(通过过滤器的材料)放在色谱纸条上的一个位置。使用其他三种植物的叶子重复此过程。为每种植物物种准备了一条单独的色谱纸。将四条色谱纸中的每条纸放在不同的烧杯中,该烧杯包含相同的时间,该蛋白含量相同。实验室设置之一如下所示。
This course aims at introducing the basic concepts and techniques in carrying out chemical analysis by using various modern spectroscopic and chromatographic instruments.Students will learn how to use modern instruments to determine the amounts of substances present in a mixture down to part per million levels (ppm), and identify the structure of a compound.Techniques such as UV-visible spectroscopy, infrared spectroscopy, mass spectrometry, nuclear magnetic resonance spectroscopy, gas chromatography and high performance liquid chromatography will be covered.This course will also discuss some common standard practices of collecting and preparing samples for laboratory testing, the accreditation system in testing laboratories.This course is conducted in the format of lecture.本课程旨在介绍化学分析中所用到的现代光谱和色谱仪器的基本概念和技术。学生将学习使用该 等仪器来分析浓度水平低至百万分之一的物质,并确定化合物的结构。课程内容包括紫外 − 可见光 谱法、红外线光谱法、质谱分析法、核磁共振、气相色谱法及高效能液相色谱法的操作技巧,以 及化验工作中的收集及制备样本的常用标准技巧和香港化验室所实行的认可系统。课程以讲课形 式进行。 Medium of Instruction: