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干细胞研究-Chen Lab-休斯顿大学
分子超分辨率显微镜（Chen等，2015），Geneti Cally用SNAP-TAG（一种突变的人O 6-烷基鸟嘌呤-DNA-烷基转移酶）标记了SOD1，可以用各种合成探测器将其共价标记（Keppler et al。通过两轮CRISPR-CAS9介导的同源性建议，获得了遗传修饰的H1 HESC纯合子克隆（H1_SOD1-SNAP）。在三氨基 - 酸 - 酸 - 链接中，将SNAP基因插入了SOD1编码区的C末端（图1 a）。H1 HESC与单个诱导RNA（SGRNA）-CAS9 PLAS MIDS和含有质粒的重组供体共转染。挑选了在分裂克隆中出现的并进行筛选以进行快照插入。首先获得了由一个快照敲入等位基因组成的杂合子克隆，并进行了第二轮CRISPR-CAS9诱导的SNAP敲击。然后，我们成功地产生了通过基因分型PCR，Sanger测序和Southern blot分析确认的纯合子快照敲入克隆（图1 B，补充。 图 1和补充。 图 2）。 通过使用抗SNAP和抗SOD1抗体进行免疫印迹证实了SOD1-SNAP融合蛋白在敲门细胞裂解物中的表达（图1 B，补充。图1和补充。图2）。通过使用抗SNAP和抗SOD1抗体进行免疫印迹证实了SOD1-SNAP融合蛋白在敲门细胞裂解物中的表达（图1 F和补充。图4）。大多数SOD1-SNAP蛋白在敲击细胞裂解物中保持完整，仅几乎无法检测到的未标记的SOD1信号水平，这可能源自裂解（图1 f）。与H1亲本细胞中的内源SOD1水平相比，总体SOD1-SNAP蛋白水平降低了，这表明TAG
事工F。Zibran
1。从来源到情感：一种安全可靠的软件系统的整体方法，在2024年5月的第三届国际高级工程，技术和应用国际会议上演讲。2。从代码到编码器：迈向安全可靠的软件系统，在2024年4月，法国巴黎的第七届软件和系统工程国际会议上的主题演讲。3。软件分析：从来源到情感。2022年10月在美国爱达荷大学邀请演讲。4。对更好的软件系统的代码分析和情感分析。在美国圣云州立大学的邀请演讲，2020年。5。经验软件工程：从源代码分析到情感分析。邀请在CSCI-3080（计算机专业的道德）班级邀请演讲，美国新奥尔良大学，2019年。6。软件系统：朋友还是敌人？邀请在2017年春季荣誉研讨会（A＆S 2999），美国新奥尔良大学，2017年2月。7。克隆管理：进行重构的检测和调度。2014年11月在美国新奥尔良大学邀请演讲。8。从管理角度来检测和分析代码克隆。2014年4月在美国巴克内尔大学邀请演讲。9。代码克隆的分析和管理。2012年10月在英国伦敦大学学院邀请演讲。10。克隆管理。11。2011年6月21日，在加拿大安大略省金斯敦的CSER（软件工程研究协会）2011年春季会议的Mini Clone研讨会上邀请演讲。设计模式，在加拿大萨斯喀彻温大学计算机科学系的中级软件工程本科课程中的两次邀请讲座。
计算机-L-3让我们学习油漆3D（iii）2024.pdf
1。标题栏显示程序的名称和图纸的名称。2。画布是您可以创建或绘制形状的区域。3。邮票工具也称为克隆工具创建形状的副本。4。形状中的颜色可以通过单击编辑颜色选项来改变。
摘要书 - ER Congressi
高通量 DNA 测序研究有助于揭示髓系肿瘤的基因组图景并识别相关的前体状态，包括潜力不明的克隆性造血 (CHIP)、意义不明确的克隆性血细胞减少症 (CCUS) 和意义不明确的克隆性单核细胞增多症 (CMUS)（表 1）。1-3 基于人群的研究首次提供了 10-20% 的 60 岁或以上人群患有 CHIP 的证据。1 研究发现，患有 CHIP 的个体患血液系统癌症以及治疗相关性髓系肿瘤的风险显著增加。携带突变的人也更容易患心血管发病率和死亡率以及炎症或自身免疫性疾病。4 从生物学和临床的角度来看，检查克隆性造血对于原因不明的外周血异常和疑似血液系统肿瘤的患者都可能有用。事实上，体细胞突变的数量、突变克隆的大小和驱动突变对识别或排除髓系肿瘤有很高的预测价值。2 尽管如此，临床背景对于正确解释可检测到的造血克隆仍然至关重要。为了描述携带体细胞突变但无法确诊髓系肿瘤的患者，引入了 CCUS 这一术语。2,3 值得注意的是，特定的突变模式，即 SF3B1 突变和双等位基因 TP53 病变，最近被认为是与形态学共同标准无关的疾病定义。5 突变分析也被证明在外周血单核细胞增多症的诊断检查中具有价值，6 并且引入了 CMUS 类别来识别不符合髓系肿瘤标准的病例。 5 最近的研究涵盖了整个克隆性造血谱，并制定了风险评分，以区分发展为髓系肿瘤风险较高的个体，并能够预测患上不同类型恶性肿瘤的可能性。7,8 持续的克隆性造血可能使急性髓系白血病 (AML) 患者的微小残留病的确定变得复杂。虽然 AML 相关突变的存在已被证明是复发的指标，但其他类型克隆性造血的意义尚不明确。9 CHIP 也可能出现在异基因造血干细胞移植接受者中，其机制不同，包括从供体转移克隆、从供体细胞中新生克隆或宿主中现有克隆的扩增。10 总之，现有证据已证明体细胞突变分析对疑似髓系肿瘤患者的实用性，从而能够识别具有临床意义的前体状态。此外，微创评估的获得为具有轻度或缺失血液学表型的个体的克隆造血筛查程序铺平了道路。
RNA病毒克隆平台 有历史的小鼠
《自然》杂志的一项研究报告了酵母酿酒酵母作为组装和维护各种 RNA 病毒基因组（包括 SARS-CoV-2）的平台的适用性，该平台可实现对 SARS-CoV-2 的基因操作和功能表征。在疫情爆发期间，病毒分离株可用于开发诊断、体内模型、抗病毒疗法和疫苗。如果病毒分离株的可用性有限，可以从化学合成的 DNA 中克隆病毒基因组，但使用大肠杆菌的既定方法通常不足以容纳冠状病毒（冠状病毒科）等 RNA 病毒的大型基因组。Thao 等人将转化相关重组 (TAR) 克隆应用于含有 GFP 基因的小鼠肝炎病毒 (MHV)，该病毒具有成熟的反向遗传学平台。将覆盖 MHV-GFP 基因组和 TAR 载体的重叠 DNA 片段转化到酵母中，DNA 片段通过同源重组组装，产生包含全长病毒 cDNA 的酵母人工染色体 (YAC)。值得注意的是，90% 以上的筛选克隆显示 YAC 组装正确，表明组装效率高。通过分离和线性化 YAC 进行体外转录以生成病毒 RNA，成功从两个单个克隆中回收了传染性病毒，然后将其与编码 MHV 核衣壳蛋白的 mRNA 一起转染到 BHK-MHV-N 仓鼠细胞系中，以产生和扩增病毒。回收的病毒表现出与亲本 MHV-GFP 相同的复制动力学。该团队着手确定合成基因组学平台是否可以应用于 MERS-CoV，使用低拷贝细菌人工染色体 (BAC) 从八个重叠的 PCR 扩增 DNA 片段克隆病毒。该方法还应用于突变的 MERS-CoV 克隆，该克隆中插入了 GFP 基因。YAC 克隆组装和从克隆 DNA 中拯救病毒均取得成功，确定了该平台可适用于更广泛的病毒，包括转基因病毒基因组。进一步的实验确定病毒基因组可以稳定维持，并且该平台适用于其他难以克隆的病毒，例如寨卡病毒（黄病毒科）和人类呼吸道合胞病毒（副粘病毒科），包括直接从临床样本中克隆，而无需事先了解病毒基因型。令人惊讶的是，在收到基于 2020 年 1 月发布的基因组序列的 SARS-CoV-2 合成 DNA 片段后 1 周内，就实现了重组 SARS-CoV-2 和 SARS-CoV-2-GFP 的克隆和拯救。总之，这项研究展示了合成基因组学平台在疫情期间从不同起始材料（包括病毒分离物、克隆 DNA、合成 DNA 或临床样本）快速生成和功能表征进化 RNA 病毒的实用性。
CLDN1 敲除角质形成细胞作为研究多种皮肤病的模型
图 2 CLDN1 敲除会降低 N/TERT-2G 单层细胞和器官型细胞浸没培养物中的屏障完整性。浸没单层细胞培养物在高 Ca 2 + 培养基中分化。通过 (A) 分化后 5 天内每天的跨上皮电阻 (TEER) 或 (B) 分化后 1、2 和 3 天的通透性测定来量化屏障功能。WT、pCLDN1 KO 和 A8 克隆细胞用于开发器官型培养物，并且 (C) 在提升到气液界面 10 天后测量电阻抗。-gRNA、pCLDN1 KO n = 4 个实验（A、B）。B6、A8、H1 克隆 n = 3 个实验和 D5 克隆 n = 1 个实验（A、B）。n = 3-9 个来自三个实验的总构建体，不同的符号代表各个实验（C）。通过配对 t 检验 (A、B) 或 ANOVA (A、B、C) 评估与相关 WT 对照的统计差异。数据以平均值 ± SEM 表示。 * p < 0.05，** p < 0.01。
组织工具盒-IHC关键测定性能...
来自2个乳腺癌的显微照片，MRQ-50克隆具有异常PAX8的表达。用苏木精和曙红（a，d）染色时，两个肿瘤都是高级的，具有坏死。用MRQ-50抗体（B，E）对PAX8进行免疫组织化学显示肿瘤细胞和淋巴细胞（箭头）的核阳性。PAX8 IHC，带有BC12克隆（C，F）不染色肿瘤或淋巴细胞。PAX8 IHC，带有BC12克隆（C，F）不染色肿瘤或淋巴细胞。
crispr-tsko的金门装配
在第一步中，将六个金门入口向量合并为目标向量。有各种可以使用的金门目标向量，其中包含可以使用的不同植物和/或视觉标记物（请参阅补充数据集1中的金门目标矢量（CCDB +）1）。第一个入口向量（AB）包含组织特异性表达的启动子。第三个入口矢量（CD）包含核酸酶，可以与N末端（BC）或C末端标签（DE）结合使用。另外，如果不需要标签，则使用链接序列。第五入口矢量（EF）包含工厂终结器。选择的第六个黄金入口向量（FG）取决于最终目标。要克隆与一个或两个GRNA兼容的矢量，请使用未武装的GRNA进入矢量PGG-F-F-ATU6-26-AARI-AARI-AARI-G（请参阅补充数据集1中的未武装GRNA进入向量1）。要克隆与多个GRNA兼容的矢量，请使用可变的链接器PGG-F-a-aari-sacb-aari-g-g（请参阅补充数据集1中的可变链接器）。由于我们的克隆策略使用限制酶Bsai和Aari，因此要求所有向量都需要无BSAI和AARI-FIME（除了克隆位点）。
模块定义表格（MDF）
您将获得对基本实践实验室技术的知识和理解（例如基于实验室的数学技能，移液，称重化学品和制造解决方案）。您将使用当代生物信息学技术来获得对硅中DNA的操纵和分析的经验和洞察力，并将这些知识应用于实验室，您将在其中克隆基因并表达蛋白质。您将进行实验并分析和量化您的结果，并将对您的实际能力进行监控以及记录工作的能力。
