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06/2012 - 08/2012研究实习（T. Lahaye教授，遗传学），其中我克隆了一个分裂的GFP系统来监视植物病原体的故事。克隆
2023在格罗宁根大学2020年至2021年获得大学教学资格（UTQ）参加了虚拟会议（无介绍）：生物设计会议2020＆2021，CINBI 2020，世界CRISPR日，RNA 2020，RNA 2020，EFB生物催化日开放日。06/2020 Three-day course in analysis of bulk RNA-seq data with R , MRC LMB 11/2019 Four-day course in Numeric Python and Deep Neural Network Basics , MRC LMB 05/2016 Five-day training school systems biocatalysis , COST action, Siena, Italy 2015 – 2016 RUG: 1-day workshop in numerical python , 2-day course on protein mass光谱，为期5天的大师班计算方法，用于酶的发现与工程
遗传代码
: All organisms use the same genetic code, with some rare exceptions .In human mitochondrial DNA (mitochondrial RNA reads four codons differently from the cytoplasmic RNA) • The universality of the code also helped to create the field of genetic engineering by making it possible to express cloned copies of genes encoding useful protein products in surrogate host organisms, such as the production of human insulin in细菌
使用您喜欢的向量克隆有毒靶标和不稳定的DNA
图1。有毒基因产物成功克隆在CopyCut ER™Epi400™电用量细胞中。大肠杆菌ACP（酰基载体蛋白，抑制细胞生长）和噬菌体T4 regb（分别裂解细菌RNA，对大肠杆菌剧毒的RNA内核酸酶）分别将其克隆到高拷贝矢量PUC18或PET11中。transformax™EC100™细胞中的全长ACP克隆在测序时包含多个点突变。
BioXp® Select DNA 克隆试剂盒、Golden Gate 组装体...
图 1. BioXp 上的 Golden Gate 组装。Golden Gate 组装概览。要克隆的插入 DNA 带有侧翼 GG 酶识别位点（BsaI 和/或 BsmBI），可以作为合成基因片段或 PCR 扩增子（1A）和（1B）或预克隆载体格式（1C）获取。用户可以输入任何具有兼容 GG 突出端（以粉色和紫色显示）的所需目标载体（2）。用户在 BioXp 3250 上输入 96 孔板和 GG 克隆条（4）。GG 克隆产品在 BioXp 运行后作为输出交付（5）。
使用 K. lactis 蛋白质表达试剂盒进行蛋白质表达 - pKLAC2 的线性化用于 K. lactis 的整合转化。| NEB
剩余的 pKLAC2 载体 DNA。克隆的基因必须不含 SacII 位点（或 BstXI 位点，如果用 BstXI 消化）才能产生正确的表达片段。无需从剩余的 pKLAC2 载体 DNA 中纯化表达片段
一种无需单克隆选择、快速高效生成精确编辑猪的非转基因方法
用于农业和生物医学应用的基因编辑猪通常使用体细胞核移植 (SCNT) 生成。然而，SCNT 需要使用单克隆细胞作为供体，而耗时费力的单克隆选择过程限制了大批基因编辑动物的生产。在这里，我们开发了一种快速有效的方法，称为 RE-DSRNP（报告 RNA 富集双 sgRNA/CRISPR-Cas9 核糖核蛋白），用于生成基因编辑供体细胞。 RE-DSRNP利用双sgRNA精准高效的编辑特点和报告RNA富集的RNP（CRISPR-Cas9核糖核蛋白）高编辑效率、低脱靶、无转基因、低细胞毒性的特点，无需筛选单克隆细胞，将供体细胞的生成时间从3-4周大大缩短至1周，同时也降低了供体细胞凋亡和染色体非整倍体的程度。我们应用RE-DSRNP技术生产了带有野生型p53诱导的磷酸酶1（WIP1）基因缺失编辑的克隆猪：在32头断奶克隆猪中，31头（97%）携带WIP1编辑，15头（47%）为设计片段缺失纯合，未检测到脱靶事件。 WIP1 基因敲除 (KO) 猪表现出雄性生殖障碍，这说明 RE-DSRNP 可用于快速生成精确编辑的动物，用于功能基因组学和疾病研究。RE-DSRNP 在大型动物中的强大编辑性能以及其显著缩短的 SCNT 供体细胞生成所需时间，为其在快速生成无转基因克隆动物种群中的应用前景提供了支持。
鲍曼不动杆菌对 d-甘露糖敏感的菌毛与生物膜形成和粘附在呼吸道上皮细胞上有关
摘要背景/目的：鲍曼不动杆菌是一种重要的院内病原体。为了更好地了解鲍曼不动杆菌 CsuA/BABCDE 菌毛在毒力中的作用，进行了细菌生物膜形成、粘附和碳水化合物介导的抑制研究。方法：克隆鲍曼不动杆菌 ATCC17978 的 CsuA/BABCDE 菌毛产生操纵子（简称 Csu 菌毛），以分析非生物塑料平板上的生物膜形成、细菌对呼吸道上皮人 A549 细胞的粘附和碳水化合物介导的抑制。用于抑制生物膜形成和对 A549 细胞粘附的碳水化合物包括单糖、吡喃糖苷和甘露糖聚合物。结果：将鲍曼不动杆菌ATCC17978的Csu菌毛克隆表达到不产生菌毛的大肠杆菌JM109中，并将其敲除。在电镜和原子力显微镜下观察大肠杆菌JM109/rCsu菌毛产生克隆上重组Csu（rCsu）菌毛丰富，而Csu敲除的鲍曼不动杆菌ATCC17978
使用创新方法克隆和表达 UbiA 人类基因，在 PUAST 载体中生产重组蛋白
简介：Gal4/UAS 调控的转基因系统文库已被证明是一种强大的遗传系统，可用于识别基因和定义发育途径。该系统提供了宝贵的见解，强调了动物和人类之间的进化保守性。目标：本研究的目的是克隆、表达和表征 UbiA 基因。该研究提出了一种高效的基因克隆方法，使用 UbiA -pcDNA3 基因作为哺乳动物克隆的模型。然后将这些基因整合到果蝇的 PUAST 载体中，这是一种常用于生产重组蛋白的表达载体和真核细胞系统。材料和方法：从人细胞中分离 UbiA，并合成互补 DNA。根据 UbiA 基因序列设计寡核苷酸引物对，分别在正向和反向引物的 5' 端加入 XhoI 和 Xbal 限制位点。然后通过 PCR 扩增 UbiA 基因，克隆到 pcDNA3 质粒中，并对得到的重组质粒进行测序。随后将该基因亚克隆到PUAST载体中，在真核细胞系统中S2细胞中表达，通过Western印迹技术进行蛋白测定和验证。结果：通过菌落PCR和酶切验证UbiA基因克隆到PUAST载体中，通过酶切和基因测序验证克隆和亚克隆技术。克隆的UbiA基因与同源基因的同一性为99%。Western印迹结果表明纯化的蛋白为一条60kDa的单条带。结论：利用PUAST载体提供的真核表达系统可以实现更多UbiA基因的蛋白合成，该技术已被证明是一个合适的平台，可用于治疗学、药理学和疫苗开发等各种应用。