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nzyeasy克隆表达系统_userguide_v1902
nzyeasy克隆和表达系统旨在将任何PCR生成的片段定向克隆到由Nzyeasy酶混合物介导的单个连接酶独立的反应中，将任何PCR生成的片段定向到线性化的PHTP载体中。向量 - 互补的悬垂物，其中包含由Nzyeasy酶识别的特定序列，通过使用具有适当5'扩展的引物，将其掺入PCR产物中。在存在Nzyeasy酶的情况下与线性化的PHTP载体生成的插入物相结合时，两个DNA分子将通过单链区域的碱基对互补而退火。反应发生在单管沿三个温度依赖的步骤持续80分钟。含有感兴趣片段的圆形重组载体。该系统允许达到高克隆效率（80-100％），并且不需要使用DNA连接酶。此外，没有进一步的治疗（例如限制消化，磷酸化或钝性抛光剂）是需要插入物的。该系统还允许将先前克隆在其他质粒载体中的基因转移到PHTP载体中，只要两个向量具有不同的可选标记，并且要转移的基因侧翼是适当的克隆区域（请参阅第12页）。PCR生成的片段可以克隆到PHTP0克隆载体中（并入到Nzyeasy克隆套件中，CAT。编号MB281），它是一种标准的PUC衍生物，具有赋予大肠杆菌抗氨苄西林的基因。另外，插入物可以直接克隆到耐卡纳米霉素的PHTP表达向量之一中，而无需经过繁琐而费力的中间阶段。PHTP表达载体设计为实现大肠杆菌中高水平的重组基因表达。
使用创新方法的Ubia人类基因的克隆和表达，用于PUAST载体中的重组蛋白质的产生
简介：被证明是GAL4/UAS调节的转基因的系统库，已被证明是识别基因和定义发育途径的强大遗传系统。该系统提供了有价值的见解，可以突出动物与人之间的进化保护。目标：这项研究的目的是克隆，表达和表征UBIA基因。该研究使用UBIA -PCDNA3基因作为哺乳动物克隆的模型提出了克隆基因的高效方法。然后将这些基因整合到果蝇的puast载体中，果蝇是一种表达载体和真核细胞系统，通常用于产生重组蛋白。材料和方法：从人类细胞中分离出UBIA，并合成互补的DNA。基于UBIA基因序列设计了一个寡核苷酸引物对，分别在正向和反向引物的5端掺入Xhoi和Xbal限制位点。然后通过PCR扩增UBIA基因，克隆到PCDNA3质粒中，并测序所得的重组质粒。随后，将基因sub clone到Puast载体中，并在S2细胞中以真核细胞系统表示。蛋白质的确定和验证是通过蛋白质印迹技术进行的。结果：通过酶菌落-PCR和酶消化实现了将UBIA基因克隆到Puast载体中的确认。克隆和子克隆技术通过酶消化验证，以及基因测序。克隆的UBIA基因与相同基因之间的身份呈现99％。，我们通过60 kDa大小的蛋白质印迹揭示了一种奇异的带纯化蛋白质。结论：通过使用PUAST载体提供的真核表达系统，可以实现更多蛋白质基因的蛋白质合成。该技术已被证明是一个合适的平台，可以在治疗，药理学和疫苗开发等各种应用中发挥作用。
1985 年第 13 卷第 2 期核酸研究
摘要 研究了由根癌农杆菌菌株 15955 引起的克隆烟草冠瘿肿瘤 1595501。通过南方转移和杂交技术对 T-DNA 组织进行分子分析表明，1595501 肿瘤有大约 10 个 TL DNA 拷贝，其中 5 个是完整的 TL DNA，而大多数章鱼碱肿瘤只有 1 到 2 个完整的 TL DNA 拷贝。杂交研究和基因组克隆表明，T-DNA 的某些片段已发生缺失。其中一个克隆含有两个 T-DNA 拷贝，它们的方向相互颠倒。对 1595501 肿瘤系的两个 TL DNA 左端和章鱼碱质粒的相应区域进行了测序。将各种克隆的 T-DNA 序列与 Ti 质粒序列进行比较，表明虽然与 25 个碱基对的直接重复有关，但 T-DNA 中没有特定的碱基对集合与 Ti 质粒序列出现分歧。
简历 - Jayson Boubin
SoftwarePilot 我是 SoftwarePilot 的首席开发人员，SoftwarePilot 是一种支持完全自主飞行系统的中间件。SoftwarePilot 已被克隆数百次，我本人、ReRoutLab 的研究人员以及世界各地的一群科学家和业余爱好者都在使用它，利用尖端的 AI 库开发最先进的自主系统。SoftwarePilot 是开源的，可在 Github 上找到：github.com/boubinjg/SoftwarePilot
简历 - Jayson Boubin
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简历 - Jayson Boubin
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评论 - 启用 - re-scnt-clones-regulation- ...
Re：对加拿大卫生部提议的修订政策的评论，内容涉及对源自体细胞核转移（SCNT）克隆牛和猪的食物的调节，以及它们的后代在加拿大作为新颖食品。2024年5月24日 - 提交给bmh-bdm@hc-sc.gc.ca联系人：加拿大生物技术行动网络坐标coordinator@cban.ca 902 209 4906 wwww.cban.ca向加拿大生物技术网络介绍了cigal and-gigmo，非基因工程的体细胞核转移（SCNT）的产品克隆牛和猪及其后代作为新食品，因此将其排除在第28级第28区（食品和药物法规的B部分）下的市场安全评估/通知之外。加拿大卫生部2003年的临时政策，以规范SCNT克隆及其后代作为新颖的后代的临时政策，以允许进一步研究。我们认为，这项研究还不完整，需要继续进行，尤其是随着技术的不断发展。政策提案为时过早，不必要。相反，我们敦促部门创建一个持续监管的时间表，以此作为收集更多证据和经验的手段，并确保政府的安全监督和加拿大人的透明度。该提案的SCNT克隆动物的时机出现在其他有争议的监管指导变化中，从许多基因编辑的植物中免除了新的食物法规。对基因工程食品的系统放松管制引起了严重的安全性和透明度的关注。1建议：•我们敦促所有部门对SCNT克隆及其后代的产品以及所有基因工程生物（包括所有基因编辑产品）维护市场前监管。•应撤销许多基因编辑产品的最新决定，以恢复政府的监督和强制性透明度。•我们敦促联邦政府通过实施与食品系统中新技术有关的预防原则来重新定义安全和透明度的优先级。