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液滴数字PCR（DDPCR）的初学者指南
液滴数字PCR（DDPCR）已成为分子诊断中的一种变革性技术，在核酸定量中具有无与伦比的灵敏度和精度。通过将样品划分为数千滴，DDPCR可以实现数字方法进行DNA和RNA分析，克服传统PCR方法的局限性。这种微型审查强调了DDPCR在肿瘤学中的关键进步和应用，包括其在检测循环肿瘤DNA（CTDNA），拷贝数变化（CNV）和表观遗传生物标志物方面的效用。该技术鉴定罕见的遗传事件和Moni Tor肿瘤异质性的能力对癌症的诊断，治疗和监测产生了重大影响。此外，DDPCR在非侵入性液体活检中的作用及其在新兴领域的应用，例如CAR-T治疗监测和肿瘤微生物组分析，证明了其广泛的临床潜力。尽管诸如标准化和成本等挑战，但多重和自动化方面的持续进步有望扩大DDPCR的范围，从而进一步增强了其对个性化医学和分子肿瘤学的贡献。
dPCR 微生物 DNA 检测分析
dPCR 微生物 DNA 检测试剂盒旨在使用数字 PCR 检测细菌、真菌、寄生虫、病毒、抗生素抗性或毒力因子基因的存在。该检测可以在 QIAcuity ® 上大约两小时内完成，且无需太多手动操作。该检测针对超过 700 种细菌、真菌、寄生虫、病毒、抗生素抗性或毒力因子基因。检测产品由一个含有引物对和水解探针的试管组成，并可针对染料（荧光团）进行配置。可选染料包括 FAM、HEX、ROX、TAMRA 和 Cy5，可在单个试剂盒中混合搭配最多 5 个目标/检测
开发三体一步RT-DDPCR方法作为VMIX™平台的定量效力测定
参考：Becker La等。自然2017; 544：367–71。缩写：AAV9：腺相关病毒血清型9； ALS：肌萎缩性侧索硬化； atxn2：ataxin 2; AVB-205：AAV9-MIR-ATXN2; CB7：鸡β-肌动蛋白启动子；简历：变异系数； HKG：家政基因； HPRT1：低黄嘌呤 - 瓜氨酸磷酸贝糖基转移酶； ITR：反向终端重复； KD：敲除； mirna：microRNA； MOI：感染的多样性； mRNA：Messenger RNA； RNA：核糖核酸； RPP30：核糖核酸酶P蛋白亚基P30； RT-DDPCR：逆转录液滴数字聚合酶链反应； TDP-43：TAR DNA结合蛋白43; VG：病毒基因组。致谢和披露：这项研究由Aviadobio Ltd. RL，JK，LR，RJ，RJ，LL，IB，IB，JI，JI，AB，AM，AM，HC，HC，MM，PB是Aviadobio Ltd. RJ的雇员和/或股东，与VMIX™Platform and aviaDobio Ltd.RJ命名为AVIADOBIO LTD。根据国际医学杂志编辑委员会（ICMJE）的建议，作者符合作者身份标准。医学写作和社论支持由英国Costello Medical的Calum Suggett提供，并由Aviadobio Ltd.
MEGA dPCR揭示染色体畸变、NHEJ精确修复、复发性核酸酶切割和DSB半衰期
附加声明：是的，存在潜在的竞争利益。N.W.、A.C.、A.J.T.和 G.T.¦ 领导了 dPCR MEGA 方法的专利申请。M.M.、M.H.P.和 S.S. ¦ 领导了用于增强 HDR 的药物抑制剂的专利申请。这项工作得到了英国威康信托基金会 (217112/Z/19/Z) 的支持。A.J.T.、C.B.、A.C.、G.T.和 G.S.还得到了英国国家健康和护理研究所、大奥蒙德街儿童医院、国家健康服务基金会和伦敦大学学院的生物医学研究中心的支持。A.J.T.是 Orchard Therapeutics、Generation Bio、Carbon Biosciences 和 4BIO Capital 的科学顾问委员会成员。C. Booth 在过去 3 年中为 SOBI 和 Novartis 提供临时咨询服务，并为 SOBI 和 Chiesi 制作教育材料。P.A.、S.W.、C.R.J、G.S.、R.N.、M.M.、G.T.目前受雇于阿斯利康，可能是阿斯利康的股东
Qualyfast®免费DNA Inacrivator
仅用于研究使用。不适用于诊断程序。©2024 Thermo Fisher Scientific Inc.保留所有权利。除非另有说明，否则所有商标都是Thermo Fisher Scientific及其子公司的财产。Taqman是在许可和许可下使用的Roche Molecular Systems，Inc。的商标。ext6773 0424
resdnaseq dpcr cho dna定量
仅用于研究使用。不适用于诊断程序。©2024 Thermo Fisher Scientific Inc.保留所有权利。除非另有说明，否则所有商标都是Thermo Fisher Scientific及其子公司的财产。Taqman是在许可和许可下使用的Roche Molecular Systems，Inc。的商标。ext6771 0424
DNA甲基化分析DPCRDNA甲基化分析DPCR
高-GC区域（例如RASSF1A启动子）的扩增通常效率低下，即使在未甲基化的区域中也是如此（请参阅下图中图中的第一组数据；测试的GC的GC含量为72％GC）。这可能会使不论甲基化状态如何准确量化模板的数量。然而，在使用DigitalLightCycler®DPCR系统时，将高GC增强子添加到扩增反应中可以显着提高放大效率和定量准确性（请参见下文）；这增加了基于DPCR的DNA甲基化分析的灵敏度和准确性。
开发用于定量纯化样品中AAV病毒基因组的DDPCR方案
这项研究的目的是开发纯化样品中AAV病毒基因组的DDPCR方案。未包装的污染物DNA，以及其他来自生产质粒和/或细胞系中的DNA，需要在准确量化病毒基因组之前被消除。我们测试了几个方案，以便它们去除未包装的DNA的能力，同时保持准确的包装病毒基因组滴度。为此，我们将质粒DNA刺激到纯化的AAV2载体中，并评估了以下样品处理条件：（a）仅与DNasei孵育； （b）DNAsei孵育，然后再灭活，72°C热灭活，蛋白酶K处理，最后95°C热灭活； （c）与条件B相同，但在72°C而不是95°C（d）无样品预处理时进行最终热灭活。质粒和AAV基因组拷贝通过双链DDPCR（QX200液滴数字PCR系统，Bio-Rad）量化。与条件D相反，在未进行样品处理的情况下，与条件A和C条件A和C相比，在条件B和条件B中观察到较低的AAV2 VG滴度的趋势在条件A，B和C中未检测到质粒DNA（图1）。有趣的是，在条件A和C中都会发现可比较的VG滴度。在重复使用纯化的AAV9实验时，进行了类似的观察结果。
批准的练习设置
▪人口/预期用户； - 肿瘤学，传染病，遗传疾病，个性化医学和移植患者。▪将由医疗保健专业人员使用以下操作。▪通过临床环境： - 医院和专业诊所。▪使用条件： - 被怀疑或诊断患有特定疾病或疾病的患者，可以使用DDPCR系统上的目标测定法检测或监测。▪包含标准： - 具有特定遗传突变，生物标志物或遗传性遗传变异的患者已知与被诊断或监测的疾病或状况相关的患者。这些目标应具有临床相关性和确定的证据，以支持其用于诊断或预后目的的使用。▪排除标准： - 可能不足以测试的样品材料不足的患者。- 诊断环境或预期使用DDPCR的患者在临床上无关或适当。- 没有DDPCR分析靶向的特定遗传突变，生物标志物或遗传变异的患者。- 使用DDPCR的患者在其特定的诊断或治疗环境中不提供临床上有显着的好处或有助于决策。