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1.4 DNA测序：研究的基本工具
在Sanger测序中，DNA聚合酶用于复制单链DNA模板。这些反应是在普通DNA nu-lecletides和一小部分所谓二氧基核苷酸的一小部分中进行的，该核苷酸阻塞了序列的进一步扩展。在原始的Sanger测序中，在四个不同的反应中进行了模板复制，每个终止核苷酸：dideoxy-a，dideoxy-c等。ul-最后，二氧基A反应包含不同大小的DNA片段的集合，对应于A.碎片在电泳凝胶上用完，该凝胶将分子分离为大小。DNA片段用放射性原子标记，以便可以在X射线膜上检测到它们。您可以在右侧的图像中看到一个示例。
DNA 测序
Sanger 测序或链终止或双脱氧方法基于 DNA 聚合酶的两个特性：聚合酶合成单链 DNA 模板的精确正确的互补拷贝，并且它们可以使用 2'，3'- 双脱氧核苷酸三磷酸 (ddNTP) 作为底物。双脱氧核苷酸的 3' 端缺少羟基并且只有氢，因此一旦该核苷酸在生长点被掺入链中，链的延长就会停止在 ddNTP 处并且不再充当链延长的底物。在实践中，使用 DNA 聚合酶 I 的 Klenow 片段，因为它不具有 5'- 3' 外切酶活性，这是完整酶的特性。所有 DNA 合成都需要引物，因此化学合成的寡核苷酸被用作引物，该引物退火到靠近需要测序的序列的位置。 （克列诺片段是大肠杆菌的DNA聚合酶I被蛋白酶枯草杆菌蛋白酶酶切时产生的一个大的蛋白质片段，它保留了5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性，用于去除预编码核苷酸并进行校对，但失去了5'→3'外切酶活性，即引物去除活性）。