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CRISPR-CAS9如何逐步工作
CRISPR-CAS9是编辑基因和基因组的强大工具。它使用引导的RNA在特定位置切割DNA，从而使研究人员可以操纵各种生物的基因组，包括动物，植物和微生物。基因编辑曾经被认为是科幻小说，但现在是现实。CRISPR-CAS9具有多种应用，包括创建遗传学的生物，治疗遗传疾病以及发展经济上重要的植物物种。有不同的方法来编辑基因，包括从生物体的基因组中插入，去除或删除序列。CRISPR-CAS9是为此目的最受欢迎的工具之一。它易于使用，高度准确且精确。该系统由核酸序列（CRISPR）和酶（CAS9）组成。需要一个引导的RNA（SGRNA）来促进目标特异性操作。CRISPR-CAS9系统于1987年首次由Ishino及其同事在1987年解释。在本文中，我们将使用简单的语言逐步解释该过程，以便初学者可以彻底理解它。我们不会从事科学写作，而要专注于外行术语的每个步骤。使用CRISPR-CAS9进行基因编辑的步骤是：1。选择实验2。选择目标基因位置3。选择并设计CRISPR-CAS9系统4。合成并克隆sgrna 5。交付sgrna和cas9 6。验证实验7。培养和分析替代细胞8。但是，其应用程序已扩展到各个字段。研究基因表达CRISPR系统首先用于研究基因敲除，其中从模型生物体中除去基因或DNA序列。通过遵循这些步骤，研究人员可以在实验室中执行基因编辑和基因工程。CRISPR-CAS9基因编辑：逐步指南我们将通过计算分析给定的基因，收集有关其序列，GC含量，表型和其他突变的数据。此信息将帮助我们设计带有指导的RNA来通过定位PAM序列来编辑基因。要选择一个用于沉默或去除的区域，我们必须选择适合我们实验要求的CRISPR-CAS9系统。提供不同的CAS蛋白，例如基因基因敲除，序列DCAS9的变化：激活和抑制以及其他诸如CAS13，Cas12，CSM，CMR和RNase III之类的其他。我们需要根据我们的需求选择正确的CAS9和CRISPR序列。CAS蛋白是一种可裂解单链和双链DNA的核酸酶。一个短的RNA序列（称为SGRNA或GRNA）可以通过靶向特定位置来编辑基因。sgrna有两个部分：具有互补的20个核苷酸的crRNA和识别Cas9的tracrocrrna环。一旦Tracrrna识别Cas，它就会将细胞核引导到裂口位置。，我们必须考虑到PAM序列的位置来计算设计SGRNA。一旦设计了GRNA，我们就需要将其合成并克隆质粒。我们的最先进的设施使我们能够在体外合成GRNA或SGRNA的寡聚。体外转录也有助于合成SGRNA。然后，我们选择一个特定的质粒，将GRNA基因插入其中，开发克隆，并分离从质粒表达的GRNA。现在我们的GRNA已合成，我们可以使用电穿孔方法将CAS9和SGRNA插入目标细胞中。我们还可以使用特定于CAS或病毒载体的mRNA，例如腺病毒，腺相关病毒，慢病毒和逆转录病毒。总体而言，CRISPR-CAS9基因编辑需要仔细的计划和执行。通过遵循这些步骤，我们可以使用这种强大的技术成功操纵基因。现在我们的CAS和SGRNA就在目标单元内，是时候验证敲除是否准确地发生了。用于验证的三种常见技术是聚合酶链反应（PCR），体外转录或DNA测序。DNA测序是在实验之前和之后进行的，使我们能够比较结果并确定是否已成功去除基因。PCR通过扩增从修饰细胞的目标序列来验证实验。此外，我们可以执行限制消化实验来验证结果。我们现在有了转基因细胞系，需要使用适当的培养基在无菌条件下培养它。一旦获得了足够量的细胞系，我们就可以将它们插入目标生物。注意：这是对CRISPR-CAS9机制的简化解释。Cas9核酸酶活性产生的差距不能保持未填充；取而代之的是，诸如非同源末端连接或直接DNA修复之类的DNA修复机制填补了空白。但是，我们的故事并没有结束。我们必须执行多个实验以检查改变的细胞的状态。基因表达研究是一种选择，我们在其中使用RT-PCR或定量PCR检查了所有细胞系改变基因的表达。可以在计算和物理上分析结果。计算工具有助于分析基因序列，表达谱等。体格检查有助于了解是否诱导了新的表型，是否仍然存在原始表型，或者结果不正确。此简短概述概述了在遗传实验室中进行CRISPR-CAS9实验的标准过程。但是，结果的特异性取决于我们选择的系统。如果我们选择了错误的CAS9，我们将无法实现所需的结果。SGRNA的设计也至关重要，因为如果不仔细设计，它可能会裂开未靶向区域。如果您有兴趣了解有关CRISPR-CAS9系统的更多信息，请从Addgene：CRISPR中阅读本文。与我们的新闻通讯一起呆在循环中，并包含最新的博客文章，发人深省的文章和重要的更新。另外，要第一个了解新产品和SNAG独家优惠！
在疫苗接种中；成本效益实际上意味着什么？
一般考虑：有不同的评估方法来检查接种疫苗（或其他健康实践或治疗）的经济成本。从疫苗接种的角度来看（例如在实施疫苗接种计划时），在国家的决策过程中；药物经济学和成本分析技术通常用于协助有效分配有限的资源和/或确定优先方法。成本分析技术可以指导医疗保健提供者和政策制定者就有效利用资源和健康规划做出明智的选择。成本分析有不同的评估方法。在本文中，作为问题的基础，将简要提及成本效益、成本效益、成本效益分析，以及基于疫苗接种的残疾调整生命年（DALY）和质量调整生命年（QALY）的概念。这些术语和/或分析可能会混淆，可能有相似之处，但它们之间有区别。
这对于植物育种的未来意味着什么？
摘要 世界人口和粮食产量正在不成比例地增长，在目前的农业实践下，这种增长方式是无法相互匹敌的。随着气候的微妙变化和可以轻易用于常规育种的天然遗传资源的流失，新出现的危机更加明显。在这种情况下，基于 CRISPR-Cas 的廉价基因编辑技术带来了希望，并为旧的植物育种机器注入了最有活力和最强大的燃料，以应对养活世界的挑战。是什么让 CRISPR-Cas 成为最强大的基因编辑技术？它与其他基因工程/育种技术有什么区别？它的产品会被贴上“常规”或“转基因”的标签吗？有太多问题需要回答，或者在我们目前的理解范围内无法回答。因此，我们想讨论和回答一些关于技术发展最新进展的问题。我们希望这篇评论能为 CRISPR-Cas 技术在未来的植物育种中的作用提供另一种视角，以用于食品生产及其他领域。
经济发展是否会影响二氧化碳排放？
2006 年至 2018 年对 21 个欧洲国家的调查数据调查了经济发展与二氧化碳排放之间的关系。根据研究结果，使用标准化因子的 PCA 创建三个金融中介的量化指标。在估计框架时，我们使用了 Hoechle 方法，该方法为线性面板样式生成系统性偏差，这些样式实际上不是同方差一致的，而且对广泛的横截面依赖性具有抵抗力。我们观察到，收入、资源利用、工业化、城市化、外国直接投资和银行体系似乎都导致了该地区二氧化碳排放量的增加。然而，更大的经济准入似乎导致了温室气体排放量的减少。在质量方面，结果对各种替代金融包容性代理以及概念框架的可接受变化具有弹性。根据实证研究结果，目前没有监管互动将国家层面的经济发展和二氧化碳排放的减少联系起来。因此，经济增长应纳入市、省和城市各级可持续绿色经济计划的实施中，特别是为了抵消随着金融包容性提高而增加的二氧化碳排放量所带来的有记录的有害影响。
疫苗犹豫是否构成医疗忽视？
在共同-19全球大流行的背景下，疫苗接种和疫苗犹豫的问题比以往任何时候都更加显着。在18岁以下的当前符合条件的青年中，有73％的人至少接受了一剂COVID-19-19和47％的疫苗，截至2021年8月初（加拿大公共卫生机构，2021年），已接受了完全疫苗接种。尽管加拿大在加拿大进行常规儿童期疫苗预防疾病的疫苗覆盖范围通常很高，但在覆盖范围的儿童和社区的差距更大（加拿大公共卫生局，2021年； Phadke等，2016）。本信息表审查了医疗疏忽和加拿大判例法的疫苗接种和疫苗接种犹豫。该信息表得到了社会科学与人文研究委员会（SSHRC）儿童福利基金主席的支持，并授予芭芭拉·法伦（Barbara Fallon）博士。
能量守恒在原子过程中成立吗？
直到 1924 年，原子过程中能量守恒定律的严格有效性才受到严重质疑。当时，为了解决当时存在的光的波动性和粒子性之间的严重冲突，玻尔、克拉默斯和斯莱特提出了一个否定该定律的理论。该理论（我们将其称为 BKS 理论）假定，原子系统在激发态下会持续发射辐射场，而不是仅在系统跃迁到较低能量状态时才发射。如果辐射频率合适，落在第二个原子上的辐射场会使其有可能跃迁到更高能量状态。该理论认为第二个原子跃迁到更高能量状态和第一个原子跃迁到较低能量状态之间不存在巧合，但除了这个巧合问题之外，它得出的结果与其他辐射理论的结果一致。因此，新理论不保证单个原子过程的能量守恒，但当大量原子过程发生时，它保证了统计守恒。新理论提出后不久，Bothe 和 Geiger 以及 Compton 和 Simons 就用实验检验了其关于电子散射辐射的预测。两种情况下的结果都不利于新理论，并支持能量守恒。此后不久，海森堡和薛定谔发现了新的量子力学，并发展了这种理论，以便在不背离能量守恒的情况下摆脱波与粒子冲突的困境。因此，人们发现 BKS 理论与实验不一致，不再需要理论考虑，因此被抛弃了。R. Shankland 最近的一些实验工作改变了这种情况。Shankland 的实验以十年技术发展带来的更高精确度进行，他的结果与早期实验者的结果不一致。相反，他们不同意能量守恒定律，并要求他们的解释符合 BKS 理论。因此，物理学现在面临着必须做出重大改变的前景。
绿色技术对金砖国家经济重要吗？
本研究试图考察数字化和绿色技术对 1993 年至 2019 年期间金砖国家健康结果的影响。互联网用户衡量数字化程度，健康结果由预期寿命决定。该研究采用 ARDL 估计方法对特定国家进行实证研究。人均 GDP 和当前卫生支出被纳入控制变量。研究结果表明，除巴西外，数字化在金砖国家中长期内可提高预期寿命。虽然绿色技术往往会在俄罗斯和中国长期内提高预期寿命，但它对短期健康结果的影响微乎其微。而 GDP 和卫生支出也会在长期和短期内提高大多数金砖国家经济体的预期寿命。我们的研究为金砖国家提供了一些政策启示。
现有的 NeuroIS 研究重点是什么？
NeuroIS 是一个利用神经科学理论和工具来更好地理解信息系统现象的研究领域。目前，NeuroIS 仍然是信息系统中的一个新兴领域，可用的研究数量有限。由于计划或执行 NeuroIS 研究的研究人员需要了解相关期刊上发表的现有实证研究的状态，我们分析了 78 篇实证文章，并提出了一个综合框架来了解现有 NeuroIS 研究的重点。我们的框架建立在刺激-有机体-反应理论的基础上，该理论解释了刺激因素会影响用户的心理过程，从而进一步导致他们的反应。然后，我们回顾收集到的文章并总结他们的发现，以提供更多有关 NeuroIS 研究的细节。通过这篇文献综述，我们在影响因素、测量工具和主题方面确定了未来 NeuroIS 研究的几个机会。我们相信我们的工作将为未来的 NeuroIS 研究提供一些有意义的见解。© 2019 Elsevier Ltd. 保留所有权利。
社会保障能起到经济稳定器的作用吗？
所有作者均来自波士顿学院退休研究中心。Laura D. Quinby 是高级研究经济学家，Robert Siliciano 是研究经济学家，Gal Wettstein 是高级研究经济学家。本文报告的研究是根据美国社会保障局 (SSA) 的一项拨款进行的，该拨款是退休和残疾研究联盟 (RDRC) 的一部分。所表达的发现和结论仅代表作者的观点，不代表 SSA、联邦政府的任何机构或波士顿学院的观点。美国政府及其任何机构或其任何雇员均不对本报告内容的准确性、完整性或实用性作任何明示或暗示的保证，也不承担任何法律责任。本文中对任何特定商业产品、工艺或服务的商品名、商标、制造商或其他方面的引用并不一定构成或暗示美国政府或其任何机构的认可、推荐或支持。