重要的考虑因素和PCR优化,最佳条件将从反应到反应,并取决于所使用的模板/引物。5x mytaq反应缓冲液:5x MyTAQ反应缓冲液包括5mm DNTP,15mm MGCL 2,稳定器和增强剂。每个组件的浓度已得到广泛优化,从而减少了进一步优化的需求。其他PCR增强剂,例如HISPEC,Polymate或Betaine等。。引物:正向和反向引物通常以0.2-0.6M的最终浓度使用。我们建议使用0.4M作为最终浓度(即每50 le反应体积的每个引物的下午20点)。 过高的底漆浓度可以降低启动的特异性,从而导致非特异性产物。 设计底漆时,我们建议使用Primer-Design软件,例如Primer3(http://frodo.wi.mit.edu/primer3)或可单位的10mm和3mm和3mm的阳离子阳离子浓度,或者单位阳离子浓度和分别为10mm和3mm。 引物应具有约60°C模板的熔化温度(TM):反应中的模板量主要取决于所使用的DNA类型。 对于低结构复杂性(例如质粒DNA)的模板,我们建议使用50pg-10ng DNA每50°L反应体积。 对于真核基因组DNA,我们建议每50 l反应的起始量为200ng DNA,这可以在5ng-5ng-500ng之间变化。 避免在含EDTA的解决方案中重新悬浮模板(例如)很重要 te buffer)由于EDTA螯合免费Mg 2+。每50 le反应体积的每个引物的下午20点)。过高的底漆浓度可以降低启动的特异性,从而导致非特异性产物。设计底漆时,我们建议使用Primer-Design软件,例如Primer3(http://frodo.wi.mit.edu/primer3)或可单位的10mm和3mm和3mm的阳离子阳离子浓度,或者单位阳离子浓度和分别为10mm和3mm。引物应具有约60°C模板的熔化温度(TM):反应中的模板量主要取决于所使用的DNA类型。对于低结构复杂性(例如质粒DNA)的模板,我们建议使用50pg-10ng DNA每50°L反应体积。对于真核基因组DNA,我们建议每50 l反应的起始量为200ng DNA,这可以在5ng-5ng-500ng之间变化。避免在含EDTA的解决方案中重新悬浮模板(例如te buffer)由于EDTA螯合免费Mg 2+。初始变性:对于非复合模板,例如质粒DNA或cDNA,建议在95°C下1分钟的初始变性步骤。对于更复杂的模板,例如真核基因组DNA,为了促进DNA的完全融化,需要更长的初始变性时间至3分钟。变性:我们的协议建议在95°C下进行15S循环变性步骤,这也适用于富含GC的模板,但是对于低GC含量(40-45%)模板,可以将变性时间降低到5s。退火温度和时间:最佳退火温度取决于底漆序列,通常比对下的TM低2-5°C。我们建议运行温度梯度以确定最佳退火温度,另外55°C可以用作起点。取决于反应,退火时间也可以减少到5s。
在吸附柱中部加入50-200μLElution Buffer或无菌水,室温放置2-5分钟,12000rpm离心1分钟。收集 DNA 溶液并储存于 -20°C。注:1)若后续检测对pH或EDTA敏感,可用无菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响。若洗脱液为水,则pH应为7.0~8.5(可用NaOH调节水的pH至此范围),若pH低于7.0,洗脱效率不高。
产品名称:XhoI 产品编号:R0146S 浓度:20,000 U/ml 单位定义:一个单位定义为在 37°C 下 1 小时内消化 rCutSmart 缓冲液中的 1 µg Lambda DNA(HindIII 消化)片段所需的酶量,总反应体积为 50 µl。 包装批号:10269860 有效期:05/2026 储存温度:-20°C 储存条件:10 mM Tris-HCl、50 mM KCl、1 mM DTT、0.1 mM EDTA、50% 甘油、200 µg/ml rAlbumin(pH 7.4 @ 25°C) 规格版本:PS-R0146S/L/E v3.0
• Persons living with HIV (PHIV) attending St Marys' hospital were consented and recruited between April and December 2023, all had: • Undetectable viral load at time of recruitment • Previous virological failure with drug resistance associated mutations (DRAMs) identified in ≥1 RNA sequence(s) (except 3 controls) • Virological data were extracted from clinical records and anonymized • 5ml EDTA blood was collected and用研究代码标记•从Buffy Coat细胞中提取DNA•通过经过验证的下一代测序(NGS)方法测序的蛋白酶蛋白酶修复转录酶(Prot-RT),其临界值15%•前病毒DNA序列与累积的历史RNA基因型和临床史及临床史
产品名称:MMEI目录编号:R0637L浓度:2,000 U/ml单位定义:一个单位定义为消化1 µg Phix174 rf I DNA所需的酶量,在RCUTSMART在Rcutsmart buffer中,在1小时内,在37°C的总反应量为50 µL。Packaging Lot Number: 10263891 Expiration Date: 11/2026 Storage Temperature: -20°C Storage Conditions: 10 mM Tris-HCl, 300 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.32 mM S-adenosylmethionine (SAM), 50% Glycerol, 500 µg/ml rAlbumin (pH 7.4 @ 25°C) Specification版本:PS-R0637S/L/V V4.0
产品名称:NheI-HF® 产品编号:R3131S 浓度:20,000 U/ml 单位定义:一个单位定义为在 37ºC 下 1 小时内消化 rCutSmart 缓冲液中的 1 µg Lambda DNA(HindIII 消化物)所需的酶量,总反应体积为 50 µl。 包装批号:10275520 有效期:01/2027 储存温度:-20°C 储存条件:250 mM NaCl、10 mM Tris-HCl、1 mM DTT、0.1 mM EDTA、50% 甘油、0.15% Triton X-100、200 µg/ml rAlbumin(pH 7.4 @ 25ºC) 规格版本:PS-R3131S/L v2.0
C. 使用另一款市场领先的柱式试剂盒 Apostle MiniMax ®(试剂盒 A)从 cfDNA 试管 1 和 cfDNA 试管 2 中采集的 1 mL 血浆中提取 DNA。此外,还使用另一款市场领先的柱式试剂盒 Apostle MiniMax ®(试剂盒 A)和另一个基于微珠的试剂盒(试剂盒 B)从 EDTA 采集管中采集的 1 mL 血浆中提取 DNA。对于每个试管,Apostle MiniMax ® 提取的 DNA 总产量更高。使用 Agilent Bioanalyzer 2100 分析 DNA 大小。对于所有三种试管类型,Bioanalyzer 的曲线表明提取的 DNA 与预期的 cfDNA 大小(约 170 bp)相关。
产品名称:Deep Vent® (exo-) DNA 聚合酶 产品编号:M0259L 浓度:2,000 U/ml 单位定义:一个单位定义为在 75°C 下 30 分钟内将 10 nmol dNTP 掺入酸不溶性物质的酶量。 包装批号:10270956 到期日:09/2026 存储温度:-20°C 存储条件:10 mM Tris-HCl、100 mM KCl、1 mM DTT、0.1 mM EDTA、0.1 % Triton®X-100、50 % 甘油,(pH 7.4 @ 25°C) 规格版本:PS-M0259S/L v2.0
产品名称:PspXI 产品编号:R0656S 浓度:5,000 U/ml 单位定义:一个单位定义为在总反应体积为 50 µl 的情况下,在 37°C 下 1 小时内消化 1 µg Lambda DNA(HindIII 消化物)所需的酶量。 包装批号:10215557 有效期:10/2025 储存温度:-20°C 储存条件:300 mM NaCl、10 mM Tris-HCl(pH 7.4)、1 mM DTT、0.1 mM EDTA、50% 甘油、500 µg/ml BSA 规格版本:PS-R0656S/L v1.0
