Illumina DNA Prep和Exome 2.5富集提供经济的人类全外观测序(WES)结果,具有出色的性能和数据质量。易于使用的库的准备和富集解决方案是从样本到报告的端到端工作流程的一部分(图1)。Illumina合格的方法可通过我们的合作伙伴提供一系列自动化平台。Illumina DNA与Exome 2.5富集的PrEP始于提取的基因组DNA(GDNA)或直接血液或唾液输入,并结合了快速的珠宝上标记文库制备化学化学,然后进行混合捕获外部体富集(图2)。1具有富集化学的Illumina DNA准备支持高质量输入DNA(≥50ng)的综合归一化,这可以实现简单的基于体积的合并进行杂交,并提供来自每个富集外来图书馆的测序输出。库在Novaseq
直接研究基因型与表型之间关系的理想技术将分析RNA和DNA基因组全基因组以及单细胞分辨率。但是,现有工具缺乏对复杂肿瘤和组织进行全面分析所需的吞吐量。我们引入了一种高度可扩展的方法,用于在核小体耗竭后(Defnd-Seq)共同分析DNA和表达。在defnd-seq中,核是核小体耗尽的,标记的,并分离成单个液滴,用于mRNA和基因组DNA条形码。一旦核耗尽了核小体,就可以使用广泛可用的10倍基因组液滴微流体技术和商业试剂盒进行后续步骤,而无需实验性修饰。我们证明了来自细胞系和存档手术样本的数千个单个核的高复杂性mRNA和GDNA测序文库的产生,以将基因表达表型与拷贝数和单核苷酸变体相关联。
抽象的兰花(兰花科)是以其鲜花形状,颜色和香气归因于其高度美学价值而闻名的装饰植物。两种类型的混合兰花和吸引人的花朵,即phaenopsis的“牛皇后”兰花和树突状'Cheddi Jagan'的花朵在这项研究中使用了迷人的花朵,因为其花色的美丽。这项研究的目的是表征诱导花颜色的花色和CHS(Chalcone合酶)基因含量的形态。这项研究中使用的方法通过使用RHS(皇家园艺学会)的颜色图和分子分析,通过DNA基因组分离和GDNA的PCR扩增CHS基因特异性引物,分析了花朵的颜色。结果表明,使用p。通过RHS观察到紫色。'ox Queen'编码为深紫色粉红色(N73A)和d。'Cheddi Jagan'编码为强红色紫色(N72C)。CHS基因可以在p中扩增。'牛皇后'1,287 bp和d。'Cheddi Jagan'3,731 bp。在两个兰花中,放大的结果显示了具有保守域PLN03172和PLN03170的CHS基序。研究结果表明,兰花花的形态存在显着差异。紫色可以通过RHS观察到p。'ox Queen'编码为n73a和d。'Cheddi Jagan'编码为N73C。结果表明,根据Murray和Thomson的使用CTAB方法可以分离GDNA,并且CHS基因可以通过CHS引物可以扩增,从而产生1200 bp的p。'Cheddi Jagan'。'ox Queen'和2500 bp d。通过这项研究,预计将对未来的研究进行初步数据,这是通过编辑CHS基因中的CRISPR/CAS9基因组来形成杂色花的。这项研究旨在支持p。'牛皇后'和d。'Cheddi Jagan',使用CRISPR/CAS9技术专注于CHS基因。版权所有:©2024,J.热带生物多样性生物技术(CC BY-SA 4.0)
将组织活检基因组分析的结果与补充液体活检数据相结合,可以全面了解肿瘤生物学。Illumina Cell-Free DNA Prep with Enrichment 是一种多功能文库制备试剂盒,可用于从循环无细胞 DNA (cfDNA) 或从 FFPE 组织样本中提取的基因组 DNA (gDNA) 制备可用于测序的文库 (图 1)。该工作流程包括用于纠正错误和减少假阳性的唯一分子标识符 (UMI),从而能够准确、灵敏地检测 FFPE 肿瘤样本中的低频突变。Illumina Cell-Free DNA Prep with Enrichment 与 Illumina 和第三方富集探针或面板兼容,以支持灵活的实验设计。本应用说明展示了 Illumina Cell-Free DNA Prep with Enrichment 在生成高质量 NGS 文库和从 FFPE 样本中鉴定低频体细胞变异方面的优异性能。
库由(a)10 ng和(b)200 ng的人gdna(Na19240)用6个PCR循环稀释为1:3,并在挂接的HSD1000屏幕截图上运行。图4.1.b显示了在晚期PCR周期下200 ng样品的非线性扩增阶段导致的上部标记上方的峰(由红色箭头指示)。尽管在非线性扩增阶段产生的分子是可行的,但它们在屏幕映射上的迁移速度的不同迁移速度会导致文库浓度的定量不准确。在这种情况下,我们建议使用400 bp或预期的库大小来测量纳米体或疯子上的库浓度,以将浓度值转换为纳米尔。以下方程可用于将浓度从ng/μl转换为nm:[(ng/μl中的库浓度)/(bp中的660 g/mol x库尺寸)] x 10 6 = nm中的浓度。
织物活检基因组分析的发现与互补的液体活检数据的结合提供了有关肿瘤生物学的全面信息。富含富集的无细胞DNA制备是一种多功能文库制备套件,可用于根据FFPE组织样品提取的基于无细胞的DNA(CFDNA)或基因组DNA(GDNA)来制备现成的库(图1)。工作流程包括用于误差校正和误差降低的独家分子标识符(UMIS),从而可以精确且敏感地检测FFPE肿瘤样品中的低频突变。带有富集的无细胞DNA制备与照明或第三方富面板或面板兼容,提供了灵活的实验设计。本申请说明证明了Illumina无细胞DNA准备的出色性能,并在高质量的NGS库生成中富集并确定了FFPE样品的低频体细胞变体。
• 96% 的突变型 m.3243G 细胞以 10 倍稀释度转染了 mitoARCUS mRNA。转染后第 1 天和第 3 天从细胞中分离 gDNA,并分析异质体和 mtDNA 拷贝数(4A、4C),并使用海马细胞线粒体应激测试评估活细胞的呼吸变化(4B、4D)。 • 在第 1 天,观察到剂量依赖性 mtDNA 消耗,对于两个最高 mRNA 剂量而言更为显著。这种消耗与突变型 mtDNA 的选择性切割相对应。尽管 mtDNA 消耗,但呼吸不受影响(表 1)。 • 在第 3 天,mtDNA 拷贝数恢复到统计学上不显著的水平。用三种最高 mRNA 剂量处理的细胞表现出突变型 mtDNA 百分比显著下降和 WT mtDNA 百分比显著增加。异质体的剂量依赖性转变导致基础呼吸和最大呼吸同时改善(表 2)。值得注意的是,异质体的微小转变(66.5% 突变 ± 3.4%)带来的功能益处与完全转变相似。
•使用1 O.D的惯例使用A260处的分光光度吸光度来确定DNA浓度。相当于50 µg/ml的双链DNA或量子dsDNA BR分析,这是一种基于染料的荧光方法,具体取决于存储库。有关特定信息,请参见#9。示例至少读取两次以验证阅读。仪器每季度进行测试,并根据需要进行校准。•为了评估DNA完整性,通过安装贴纸评估DNA。挂接软件确定DNA完整性数(DIN)作为GDNA完整性的度量。(注意:所有存储库都不执行。)•使用6个常染色体微卫星标记的多重PCR分析确认DNA样品身份。性别是在同一反应中使用额外的底漆对确定的,该对X和Y-染色体蛋白基因基因之间的等位基因差异区域。此测定的细节及其在质量控制过程中的重要性将在下面讨论。此测定法提供了几个质量控制参数,如下:
图 4. SeqStudio Flex 和 3500xL 仪器在 MSI 分析中产生了相似的数据。(A)TrueMark MSI 检测分析了 13 个微卫星基因座的不稳定性,包括广泛使用的 Bethesda 标准。确定为不稳定的基因座可以自动调用;然后软件将使用全部调用对样本进行总体调用。该检测包括两个高度可变的短串联重复 (STR) 序列 (THO1 和 PentaD),可用于确认样本身份。该软件使用的专有算法不需要并行分析正常的非肿瘤组织即可进行稳定/不稳定调用。(B)使用 TrueMark MSI 检测分析了九个肿瘤/正常相邻对和一个仅肿瘤样本。使用两种仪器的数据,软件调用的基因座数量非常相似。样本 S07-001886-A5 回收的 gDNA 不理想;并非所有基因座都以同等方式扩增,因此在两种仪器上产生的结果略有不同。
图 3. SeqStudio Flex 和 3500xL 仪器在 MSI 分析中产生了相似的数据。(A)TrueMark MSI 检测分析了 13 个微卫星基因座的不稳定性,包括广泛使用的 Bethesda 标准。确定为不稳定的基因座可以自动调用;然后软件将使用全部调用对样本进行总体调用。该检测包括两个高度可变的短串联重复 (STR) 序列 (THO1 和 PentaD),可用于确认样本身份。该软件使用的专有算法不需要并行分析正常的非肿瘤组织即可进行稳定/不稳定调用。(B)使用 TrueMark MSI 检测分析了九个肿瘤/正常相邻对和一个仅肿瘤样本。使用两种仪器的数据,软件调用的基因座数量非常相似。样本 S07-001886-A5 回收的 gDNA 不理想;并非所有基因座都以同等方式扩增,因此在两种仪器上产生的结果略有不同。