综合征计划A. iolascon综合征的客观检查和临床方法-L。garavelli多能变症肾脏-L。Massella cakut综合征-S。Giglio aneuploidie和性L. bernardini分子分子和性别诊断 - M. Zollino connerno -deyndrome -A. gerale -genitory -nusdery- genuly -nusder- L. Stuppia Hepatology/Gastroenterology P. Gasparini Genetic of intestinal pathologies - F. Bonfiglio The genetics of obesity - Sadaf Farooqi The genetics of celiac disease - L. Greco Oncology M. Geguardi Somatic Genetic Tests - Mg Tibiletti Oncological predisposition - B. Precision Medicine - D. Turchetti Neonatato GB.ferrero的新生儿 - C. romano floppy婴儿-S。d'Arrigo Micro -Macrocephaly -F。Gurrieri诊断P.语法解释变体(非编码)-G。G. G. Giannuzzi指南t -F。Locatelli基因组编辑-S。Rivella Gene疗法-Me Bernardo细胞遗传学S. Giglio的镶嵌性诊断 - O. Zuffardi稀有常染色体三体菌 - F. grati遗传性易感性,对血液中X和Chromosome X的镶嵌物损失 - X和Chromosose y -Genoese
智力残疾,癫痫,赫希斯普朗氏病和各种先天性畸形(Garavelli and Mainardi,2007年)。此外,Zeb2的过表达与不同形式的癌症的进展有关(Fardi等,2019)。虽然已经对Zeb2蛋白的功能进行了广泛的研究,但目前缺乏可用的Zeb2缺乏的人类细胞模型,无法在胚胎发育过程中进一步删除Zeb2依赖性调节网络,并且可以取消抗癌药物的发展。为此,我们使用CRISPR/CAS9介导的编辑系统生成了人类IPSC线,耗尽了Zeb2蛋白(表1)。我们分别应用了两个靶向Zeb2外显子5和外显子6的GRNA(图1 a),在父母IPSC线上Kicri002a(表1;(Uhlin等,2017)。通过LiPofection将包含两个GRNA的构建体引入IPSC系,并通过荧光激活的细胞分选(FACS)选择转染的细胞以表达绿色荧光蛋白。单细胞克隆在LN521上扩展,并通过基因组DNA上的Sanger测序分析基因编辑。分析显示了具有纯合790 bp缺失的克隆线kicri002a-4,跨越了内含子5和外显子5和6的一部分(chr2:g.144,404,077 - 144,404,404,404,867del;1 a;补充。图1 A-B)。 外显子5和外显子6的其余部分被融合,预测氨基酸194上的截短的Zeb2 mRNA,其截短的Zeb2 mRNA(PTC)(P.THR188888888888888888888888;图1 A-B)。外显子5和外显子6的其余部分被融合,预测氨基酸194上的截短的Zeb2 mRNA,其截短的Zeb2 mRNA(PTC)(P.THR188888888888888888888888;图1 a)。与136PTC位于编码N末端锌指(NZF)域的区域以及更C末端的R-SMAD结合域(SBD),CTBP相互作用结构域(CID)(CID)和C-末端的c-terminal Zinc Zinc Finger(CZF(CZF)和Homeododomain(例如Domains)(epifa)(epifa)。
