hansenii

CRISPR/CAS9方法促进了在Debaromyces Hansenii

卤素和渗透剂酵母菌dealomyces Hansenii具有很高的细胞工厂应用潜力，因为它抵抗了严峻的环境因素以及与广泛的底物范围的兼容性。但是，目前可用的遗传技术不允许汉斯内尼作为细胞工厂的全部潜力。此外，大多数当前可用的工具都依赖于不适合野生型原型营养菌株的补充营养标记。此外，当需要精确的基因靶向时，首选的非同源末端连接（NHEJ）DNA损伤修复机制会带来进一步的挑战。在这项研究中，我们提出了一种新型的基于质粒的CRISPR CUG /CAS9方法，用于易于有效的基因编辑。我们的工具集设计基于主要标记，并促进了表达Cas9和单个或多个单个指南RNA（SGRNA）的矢量的快速组装，这些载体即使在原养菌株中也为多路复用基因工程提供了可能性。此外，我们已经构建了缺乏的nhej hansenii，使我们的crispr cug /cas9工具能够支持点突变和单个 /双基因缺失的高效引入。重要的是，我们还证明了90-NT单链DNA寡核苷酸足以直接修复SGRNA-CAS9诱导的DNA断裂，从而导致精确的编辑达到100％效率。总而言之，本研究中开发的工具将在D. Hansenii中大大推进基础和应用研究。此外，我们设想我们的工具可以迅速适应其他非惯性酵母菌物种的基因编辑，包括属于CUG的酵母菌物种。