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干细胞研究
欧洲诱导性多能干细胞库 (EBiSC) 收集了来自欧洲各地与遗传疾病和健康对照相关的 iPSC 系，并将其提供给国际学术和商业用户用于研究。要确保大规模和各种来源的高质量 iPSC 的可用性，需要灵活而强大的质量系统，以最大限度地利用现有资源。在这里，我们概述了适合大规模运营环境的质量控制制度的建立和实施。严格的放行测试可确保分布式 iPSC 系的安全性和完整性，而信息测试则允许发布 iPSC 系的完整特性和评估。质量控制筛选以“适合用途”的质量管理体系为基础，提供完整的可追溯性并支持持续的科学和工艺开发。关键检测和技术的评估和鉴定可确保检测灵敏度和检测限是可接受的。使用快速测试技术代替更“传统”的检测方法，使 EBiSC 能够快速响应用户需求，以节省劳动力和成本高效的方式生成完全合格的 iPSC 系库。
具有新型组合 KO 的 iPSC 衍生 CAR-γδT 在临床前试验中无需细胞因子支持即可表现出更长的寿命和显著的抗肿瘤功效
用于 iγδT 细胞疗法的 GMP 克隆生成始于人类 PBMC。在富集和重编程后，根据基因组完整性测试（包括残留基因表达、TCR 测序和形态学评估）选择 iPSC 克隆。合格的 iPSC 系被冷冻保存并经过多轮基因编辑，每轮之后进行单细胞分选。根据细胞健康、靶向和脱靶编辑以及基因组完整性（通过全基因组测序和致癌基因突变面板）选择工程 iPSC 克隆进行冷冻保存到种子库中。在分化之前，完全改造的 iPSC 将扩增、成熟为 γδT 细胞，增殖后，iγδT 细胞被收获为药品。
基于IPSC的肌源性细胞疗法的临床前发育的挑战和考虑
摘要：源自诱导的多能干细胞（IPSC）的细胞疗法，由于IPSCS的可扩展性，免疫兼容性和多元潜力，在再生医学领域提供了有希望的途径。已经进行了越来越多的临床前试验和临床试验，探索了基于IPSC的疗法在挑战性疾病中的应用，例如肌肉营养不良。骨骼肌的独特合成性使茎/祖细胞可以整合，形成新的肌核并恢复受肌病影响的基因的表达。这种特征使基因组编辑的技术在这些疗法中特别有吸引力。具有遗传修饰和IPSC谱系方法的方法，可以制造免疫兼容的健康IPSC衍生的肌肉细胞以扭转肌肉疾病的进展或促进组织再生。尽管取得了令人兴奋的进步，但基于IPSC的肌肉疾病和组织再生疗法的大部分发展仅限于学术环境，没有成功的临床翻译报告。体内未知分化过程，潜在的肿瘤性和移植细胞的表观遗传异常正在阻止其临床应用。在这篇综述中，我们概述了IPSC衍生的肌源性细胞移植疗法的临床前开发，其中包括与IPSC衍生的肌源性细胞有关的过程，例如分化，扩展，传递，递送和CGMP依从性。我们讨论了临床翻译的每个步骤的潜在挑战。另外，描述了用于测试用于临床应用的肌生细胞的临床前模型系统。
文章人类IPSC衍生的肌肉细胞是研究EDMD1发病机理的新模型。
†最后一位联合作者摘要Emery-Dreifuss肌肉营养不良1型（EDMD1）是由EMD基因突变引起的罕见遗传疾病，该突变编码编码核包膜蛋白Emerin。尽管了解了疾病的遗传基础，但肌肉和心脏发病机理的分子机制仍然难以捉摸。进展受患者衍生样品的可用性有限的限制，因此迫切需要人类特异性的细胞模型。在这项研究中，我们介绍了诱导多能干细胞（IPSC）系的产生和表征，这些细胞（IPSC）系来自携带EMD突变的EDMD1患者，这些突变导致EMD突变，这些突变与健康供体的IPSC一起导致截断或缺失。患者特异性的IPSC表现出稳定的核型，保持适当的形态，表达多能标记，并证明将分化成三个细菌层的能力。为模型EDMD1，这些IPSC被分化为肌源性祖细胞，成肌细胞和多核肌管，这些肌管代表了肌发生的所有阶段。每个发育阶段都通过特定于阶段的标记的存在来验证，从而确保模型的准确性。我们提出了第一个基于IPSC的体外平台，该平台捕获了肌发生过程中EDMD1发病机理的复杂性。该模型可以显着有助于理解疾病机制，并为EDMD1制定靶向的治疗策略。
CRISPRi 基因调控和分化后人类 iPSC 心肌细胞的全光学电生理学
通过在人类诱导性多能干细胞衍生的心肌细胞 (iPSC-CM) 中进行精确的基因调节并使用可扩展的全光学电生理学平台进行后续表型分析，可以揭示基因-表型关系。近期 CRISPR 衍生的可逆基因抑制或激活技术 (CRISPRi/a) 可以为人类功能基因组学方面的此类努力提供帮助。我们着手表征 CRISPRi 在后分化 iPSC-CM 中的性能，以关键的心脏离子通道基因 KCNH2、KCNJ2 和 GJA1 为目标，并使用全光学工具提供对心脏复极、静息膜电位稳定性和传导特性影响的多参数量化。更有效的 CRISPRi 效应物（例如 Zim3）和优化的病毒递送可使性能得到改善，与使用 CRISPRi iPSC 系相当。当 CRISPRi 部署在非分裂分化心脏细胞中时，确认轻微但具体的表型变化是朝着更全面的临床前心脏毒性测试和未来体内治疗应用迈出的重要一步。关键词：CRISPRi、iPSC-CM、心脏电生理学、离子通道、KCNH2、KCNJ2、GJA1、全光电生理学、光遗传学、光学映射
通过转录因子过表达将人IPSC分化为功能性卵巢颗粒样细胞
摘要人类卵巢卵泡的体外模型将极大地有益于女性繁殖的研究。卵巢发育需要生殖细胞和几种类型的体细胞的结合。其中，颗粒细胞在卵泡形成和对卵子发生的支持中起关键作用。存在有效的方案来产生人类诱导的多能干细胞（HIPSC）的人类原始生殖细胞样细胞（HPGCLC），但产生颗粒细胞的一种方法是难以捉摸的。在这里，我们报告说，两个转录因子（TFS）的同时过表达可以将hipsc的分化指向颗粒样细胞。我们阐明了几种与颗粒相关的TF的调节作用，并确定NR5A1的过表达和Runx1或Runx2足以生成类似颗粒状的细胞。我们的颗粒状细胞具有类似于人类胎儿卵巢细胞的跨文章组，并概括了包括卵泡形成和类固醇生成在内的关键卵巢表型。与HPGCLC聚集时，我们的细胞形成卵巢样类器官（卵形），并支持从迁移到性腺阶段的HPGCLC发育，这是通过诱导DAZL表达来衡量的。该模型系统将为研究人类卵巢生物学提供独特的机会，并可以开发女性再生健康的疗法。
A9-pacemaking.pdf - acsu.buffalo.edu
摘要：背景：黑质（A9）多巴胺能（DA）神经元的退化导致帕金森病（PD）的主要运动症状。parkin 的功能丧失突变与一种罕见的早发性 PD 有关，这种疾病是隐性遗传的。目的：我们生成了有或没有 parkin 突变的同源人类 A9 DA 神经元，以确定 parkin 突变与人类 A9 DA 神经元功能障碍之间的因果关系。方法：利用 TALEN（转录激活因子样效应核酸酶）或 CRISPR/Cas9 介导的基因靶向技术，我们通过修复来自 PD 患者的 iPSC 中 parkin 的外显子 3 缺失以及将与 PD 相关的 A82E 突变引入来自健康受试者的 iPSC，产生了两对同源的幼稚诱导性多能干细胞 (iPSC)。四条同源 iPSC 系分化
基因组编辑诱导多能干细胞体内产生的造血干细胞可用于小鼠血友病 A 的血小板靶向基因治疗
基因治疗是针对含有抑制剂的HA的一种有前途的方法。由FVIII修饰的HSPC产生的释放FVIII的血小板可以在抑制剂存在的情况下改善出血素质。9-11 CRISPR / Cas9为靶向整合治疗基因以治疗遗传疾病提供了一种便捷的方法。12-14同时，由于iPSC易于增殖和筛选，因此iPSC的基因组编辑比HSPC更容易，效率更高。15在本研究中，我们旨在探索使用基因组编辑的iPSC体内产生的HSPC进行血小板靶向基因治疗HA的可能性。首先，我们对FVIII盒（命名为opF8）进行了密码子优化，并证实了opF8在HEK293T细胞和HA小鼠中的高表达效率（在线补充图S1A-E）。然后，我们将 opF8 置于巨核细胞/血小板特异性 α IIb 启动子 (2bopF8) 的控制之下，并验证了该盒的特异性
同种异体IPSC衍生血小板产品（MEG-002）的开发和第一次人类输血
1。nakamura S等人，可扩展的巨核细胞细胞系可从人类诱导的多能干细胞中临床适用的血小板。细胞干细胞。 2014; 14（4）：535-548。 2。 sugimoto n等，IPLAT1：IPSC衍生血小板作为1期自体输血研究的第一个人类临床试验。 血。 2022; 140（22）：2398-2402。 3。 Yoshida S等人，人类诱导多能干细胞的临床级HLA hla Haplobank匹配日本人群的40％。 Med。 2023; 4（1）：51-66。 4。 ITO Y等，湍流激活血小板生物发生，使临床量表可在体内产生。 单元格。 2018; 174（3）：636-648。 5。 sugimoto n等人，用于IPLAT1临床试验的自体IPSC衍生的血小板产物的生产和非临床评估。 血液副词。 2022; 6（23）：6056-6069。 6。 Watanabe N等人，精制的方法来评估兔模型中输血人血小板的体内止血功能和生存能力。 输血。 2017; 57（8）：2035-2044。细胞干细胞。2014; 14（4）：535-548。2。sugimoto n等，IPLAT1：IPSC衍生血小板作为1期自体输血研究的第一个人类临床试验。血。2022; 140（22）：2398-2402。3。Yoshida S等人，人类诱导多能干细胞的临床级HLA hla Haplobank匹配日本人群的40％。Med。2023; 4（1）：51-66。4。ITO Y等，湍流激活血小板生物发生，使临床量表可在体内产生。 单元格。 2018; 174（3）：636-648。 5。 sugimoto n等人，用于IPLAT1临床试验的自体IPSC衍生的血小板产物的生产和非临床评估。 血液副词。 2022; 6（23）：6056-6069。 6。 Watanabe N等人，精制的方法来评估兔模型中输血人血小板的体内止血功能和生存能力。 输血。 2017; 57（8）：2035-2044。ITO Y等，湍流激活血小板生物发生，使临床量表可在体内产生。单元格。2018; 174（3）：636-648。5。sugimoto n等人，用于IPLAT1临床试验的自体IPSC衍生的血小板产物的生产和非临床评估。血液副词。2022; 6（23）：6056-6069。6。Watanabe N等人，精制的方法来评估兔模型中输血人血小板的体内止血功能和生存能力。输血。2017; 57（8）：2035-2044。
鼠ipsc加载的支架移植物改善了关键尺寸骨缺损的骨再生
摘要：在某些情况下，骨骼在骨折后无法完全愈合。这些情况之一是骨骼不足的临界大小骨缺损，骨骼无法自发治愈。在这种情况下，需要长时间的复杂骨折治疗，这具有并发症的相关风险。使用的常见方法，例如自体和同种异体移植物，并不总是会导致成功的治疗结果。当前增加骨形成以弥合缝隙的方法包括在骨折侧应用干细胞。大多数研究研究了间充质基质细胞的使用，但有关诱导多能干细胞（IPSC）的证据较少。在这项研究中，我们研究了小鼠IPSC负载的支架和脱细胞的支架的潜力，这些支架含有来自IPSC的细胞外基质，用于在小鼠模型中处理关键大小的骨缺损。体外分化，然后是艾丽丽莎林红染色和定量逆转录聚合酶链反应确认了IPSCS系的成骨分化潜力。随后，进行了使用小鼠模型（n = 12）进行临界骨缺损的体内试验，其中将PLGA/ACAP - 骨传导性支架移植到骨缺陷9周中。将三组（每组n = 4）定义为（1）仅骨连导支架（对照），（2）IPSC衍生的细胞外基质，将播种在支架上，（3）IPSC扎在脚手架上。IPSC种子PLGA/ACAP支架的移植可以改善小鼠关键大小骨缺损的骨再生。IPSC种子PLGA/ACAP支架的移植可以改善小鼠关键大小骨缺损的骨再生。Micro-CT和组织学分析表明，植入后9周后9周的骨骼体积诱导的成骨分化的IPSC随后诱导成骨分化导致骨骼体积高明显高于骨失位的支架。