图 5. 使用 AzureRed 和化学发光 Western Blot 同时检测总蛋白。通过 SDS-PAGE 分离 2 倍连续稀释的 HeLa 裂解物并转移到 PVDF 膜上。半干转移完成后,用 AzureRed 总蛋白染料对膜进行染色。然后用 Azure 化学发光印迹封闭缓冲液封闭印迹,然后与小鼠抗 GAPDH 孵育。用 Azure 印迹洗涤缓冲液洗涤印迹 3 次,然后用 Azure 山羊抗小鼠 HRP 二抗孵育。用 Radiance ECL 底物检测化学发光信号。底物孵育后,对印迹进行成像以产生总蛋白染色和 GAPDH 蛋白的叠加。AzureRed 显示为绿色,GAPDH 显示为灰色。
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摘要:用生物大分子(例如蛋白质,聚糖或具有良好控制方向和密度的核酸)装饰的表面形成至关重要的重要性对于在体外模型的设计中,例如合成细胞膜和互动分析。为此,配体分子通常用锚固术功能化,该锚特定与具有高密度结合位点的表面结合,从而控制了分子的呈现。在这里,我们提出了一种方法,可以通过在孵育溶液中调整靶分子的相对浓度和自由锚固剂的相对浓度来鲁棒和定量控制一种或几种类型的锚固分子的表面密度。我们提供了一种理论背景,该背景将孵育浓度与感兴趣分子的最终表面密度联系起来,并提出了有效的指南,以优化对表面密度定量控制的孵化条件。专注于生物素锚,这是一种相互作用研究的常用锚,作为一个显着的例子,我们在实验上证明了表面密度在多种密度和靶分子大小上的控制。相反,我们可以通过量化样品溶液中的残留游离生物素反应剂的量来表明该方法如何适应质量控制质量的质量纯度,例如生物素化的糖胺聚糖。■简介
养分明胶是根据以前用于检查水,污水和其他卫生重要材料的配方制备的(1)。明胶液化是肠杆菌分化的基本测试之一(2)。该培养基也可以用于水的微生物板计数。肽和HM肽B提供氮和碳源,长链氨基酸和其他生长养分,以供非养生生物生长。明胶是确定生物体产生明胶酶的能力的底物,这是一种活跃于明胶液化的蛋白水解酶。从三糖铁琼脂(M021)或克里格勒铁琼脂(M078)中使用18-24小时的纯培养物,在营养明胶中刺接,直接接种针的针头,直接向下降低了介质的深度,到距管底部大约一英寸的深度。在35±2°C下孵育包括未接种的对照24-48小时。许多物种需要长时间的孵育(3,4)才能明胶液化。明胶在20°C或较低的温度和35°C或更高温度下的液体固体。明胶液化在约28°C下,因此在35°C下进行孵育,但在冰箱中保存约2小时,然后再解释结果(3)。明胶的液化发生在表面层上,因此应注意不要摇动管子(5)。控制与每项测试一起进行,因为明胶的胶凝能力变化(3),明胶浓度也不应超过12%,因为它可以抑制生长(6)。对于水的板数,在20-22°C下进行孵育长达30天。营养明胶培养基来确定挑剔的物种和强制性厌氧菌的明胶液化。在孵育过程中以各个间隔检查管子的生长和液化。在每个间隔中,拧紧盖子并将管转移到冰箱中,以进行足够的时间,以确定是否发生了液化。
使用最佳接种物稀释对照培养基的微生物测试:胰蛋白胨大豆琼脂、富含 5% v/v 马血的哥伦比亚血琼脂基质、富含 5% v/v 巧克力马血的哥伦比亚血琼脂基质或 Sabouraud 葡萄糖琼脂(视情况而定)在 37±2°C 下孵育 18 小时后的反应培养基受到 10-100 个菌落形成单位的攻击化脓性链球菌 ATCC® 19615 浑浊生长肺炎链球菌 ATCC® 6303 浑浊生长肺炎链球菌 ATCC® 6305 浑浊生长粪肠球菌 ATCC® 19433 浑浊生长铜绿假单胞菌 ATCC® 27853 浑浊生长可见生长代表满意结果。在厌氧条件下 37 ± 2°C 培养 18 小时后的反应(有关详细信息,请参阅 Oxoid 手册 - 大气生成系统) 培养基中出现 10-100 个菌落形成单位 肺炎链球菌 ATCC® 6305 浑浊生长 可见生长代表满意的结果。 在 37 ± 2°C 培养 48 小时后的反应 培养基中出现 10-100 个菌落形成单位 白色念珠菌 ATCC® 10231 浑浊生长 可见生长代表满意的结果。
摘要:这项研究的目的是确定与四种细菌接触的氧化石墨烯(GO)的杀菌潜力:大肠杆菌,S。Mutans,S。Aureus和E. faecalis。细菌细胞的抑制在含有GO的培养基中孵育,孵育时间为5、10、30和60分钟,最终浓度为50、100、100、200、300、300和500 µg/ml。使用活/死染色评估GO的细胞毒性。使用BD精度C6浮动到液化计记录结果。使用BD CSAMPLER软件分析获得的数据。在所有含有的样品中都注意到了一个显着的细菌生存能力。GO的抗菌特性受到GO浓度和孵育时间的强烈影响。在所有孵育时间(5、10、30和60分钟)的浓度为300和500 µg/mL时,观察到最高的杀菌性活性。在大肠杆菌中观察到最高的抗菌电位:60分钟后,以300 µg/ml的GO为94%,在500 µg/mL时为96%;发现最低的金黄色葡萄球菌-49%(300 µg/ml)和55%(500 µg/ml)。
临床诊断需要正确的病原体鉴定才能为患者选择最适当的治疗方法。临床医生可用的当前诊断方法包括培养和灵敏度以及PCR或定量PCR(QPCR)测试。虽然培养和灵敏度测试仍然被认为是黄金标准,并且允许表型抗生素耐药性面板和最小的抑制浓度(MIC)测试,但这种方法存在显着的限制。由于种类繁多的致病细菌和富生物,需要仔细考虑培养培养基,温度,氧气水平,水含量和孵化时间,以解决各个病原体的不同生长要求。1尤其是为了诊断
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