CRISPR(成簇的规律间隔的短回文重复序列)- Cas9 基因组编辑工具源自微生物组的适应性免疫系统,可切割目标 DNA 区域并允许 DNA 自然修复。它也被称为“RGENs”(RNA 引导的工程化核酸酶),因为它由 gRNA(向导 RNA)和 Cas9 核酸酶组成。该技术为精确操作基因组提供了更简单、更有效的方法。gRNA 由 crRNA 和 tracrRNA 组成。crRNA 具有 20 nt 的靶标互补序列,而 tracrRNA 具有 Cas9 结合所需的识别序列(图 1)。
产品描述 成簇的规则间隔短回文重复序列 (CRISPR)/Cas9 系统是基因组编辑中最新的 RNA 引导核酸内切酶工具,可实现非常具体的基因组破坏和替换。Cas9 核酸酶 NLS 与 GFP 的融合可实现转染的视觉确认以及随后的 Cas9 从细胞中清除的验证。Cas9 核酸酶-GFP 也可用于 FACS 应用和筛选。Cas9 核酸酶-GFP NLS 在蛋白质的 C 端包含 SV40 T 抗原核定位序列 (NLS)。
定期间隔间隔的短篇小学重复序列(CRISPR)和CRISPR相关蛋白(CAS9)系统是ARCHEA和细菌用于降解异物(4,6)的适应性免疫反应防御机制(4,6)。该机制可以用于其他功能,包括用于哺乳动物系统的基因组工程,例如基因敲除(KO)(KO)(1,2,3,5)。crispr/cas9 ko质粒产物通过利用从基因组尺度CRISPR敲除(Gecko)V2库中得出的指导RNA(GRNA)序列来鉴定和裂解特定基因,该序列在广泛研究所的张实验室中开发的基因组规模CRISPR敲除(Gecko)V2库(3,5)。
成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR) 和 CRISPR 相关蛋白 (Cas9) 系统是一种适应性免疫反应防御机制,古细菌和细菌利用该机制降解外来遗传物质 (4,6)。该机制可重新用于其他功能,包括哺乳动物系统的基因组工程,例如基因敲除 (KO) (1,2,3,5)。CRISPR/Cas9 KO 质粒产品利用来自 Broad 研究所张实验室开发的全基因组 CRISPR 敲除 (GeCKO) v2 库的向导 RNA (gRNA) 序列,能够识别和切割特定基因 (3,5)。
成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR) 和 CRISPR 相关蛋白 (Cas9) 系统是一种适应性免疫反应防御机制,古细菌和细菌利用该机制降解外来遗传物质 (4,6)。该机制可重新用于其他功能,包括哺乳动物系统的基因组工程,例如基因敲除 (KO) (1,2,3,5)。CRISPR/Cas9 KO 质粒产品利用来自 Broad 研究所张实验室开发的全基因组 CRISPR 敲除 (GeCKO) v2 库的向导 RNA (gRNA) 序列,能够识别和切割特定基因 (3,5)。
定期间隔间隔的短篇小学重复序列(CRISPR)和CRISPR相关蛋白(CAS9)系统是ARCHEA和细菌用于降解异物(4,6)的适应性免疫反应防御机制(4,6)。该机制可以用于其他功能,包括用于哺乳动物系统的基因组工程,例如基因敲除(KO)(KO)(1,2,3,5)。crispr/cas9 ko质粒产物通过利用从基因组尺度CRISPR敲除(Gecko)V2库中得出的指导RNA(GRNA)序列来鉴定和裂解特定基因,该序列在广泛研究所的张实验室中开发的基因组规模CRISPR敲除(Gecko)V2库(3,5)。
定期间隔间隔的短篇小学重复序列(CRISPR)和CRISPR相关蛋白(CAS9)系统是ARCHEA和细菌用于降解异物(4,6)的适应性免疫反应防御机制(4,6)。该机制可以用于其他功能,包括用于哺乳动物系统的基因组工程,例如基因敲除(KO)(KO)(1,2,3,5)。crispr/cas9 ko质粒产物通过利用从基因组尺度CRISPR敲除(Gecko)V2库中得出的指导RNA(GRNA)序列来鉴定和裂解特定基因,该序列在广泛研究所的张实验室中开发的基因组规模CRISPR敲除(Gecko)V2库(3,5)。
恒温扩增核酸检测技术因其耗时短、对扩增 设备要求低和引物探针商品化合成稳定等优势 , 在 病原快速检测技术中脱颖而出。 Piepenburg 等 [ 13 ] 参 照 T4 噬菌体 DNA 复制系统于 2006 年创建了一种新 型等温扩增技术 , 使用酶来打开双链 DNA, 该技术 称为重组酶聚合酶扩增 (Recombinase polymerase am- plification, RPA) 。随后发明的重组酶介导链置换 核酸扩增技术 (Recombinase-aid amplification, RAA) 技术原理与 RPA 类似 , 不同之处在于 RAA 的重组酶 来源于细菌或真菌 , 而 RPA 的重组酶来自 T4 噬菌 体。 2017 年 [ 14 ] 结合以上重组酶 , SHERLOCK (Specifi- chigh-sensitivity enzymatic reporter unlocking) 检测 方案问世 , 并应用于新冠病毒的检测技术开发 [ 15 ] , 该技术通过改造规律间隔成簇短回文重复序列及 其关联蛋白 (Clustered regularly interspaced short pa- lindromic repeats/CRISPR-associated proteins system, CRISPR/Cas) 系统 , 使其能够识别特定的严重急性 呼吸综合征冠状病毒 2 (Severe acute respiratory syn- drome coronavirus 2, SARS-Cov-2) 基因组片段 , 1h 就能确定检测结果 , 检测限可低至 2 amol/L 。 SHER- LOCK 技术特异和简便 , 将 SHERLOCK 与 RAA 整合 集成 , 能够凸显两者的优势 , 不仅可以实现靶标核 酸的快速扩增 ( 保留等温扩增技术的优势 ), 还增强 了检测特异性。
成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR) 和 CRISPR 相关蛋白 (Cas9) 系统是一种适应性免疫反应防御机制,古细菌和细菌利用该机制降解外来遗传物质 (4,6)。该机制可重新用于其他功能,包括哺乳动物系统的基因组工程,例如基因敲除 (KO) (1,2,3,5)。CRISPR/Cas9 KO 质粒产品利用来自 Broad 研究所张实验室开发的全基因组 CRISPR 敲除 (GeCKO) v2 库的向导 RNA (gRNA) 序列,能够识别和切割特定基因 (3,5)。
成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR) 和 CRISPR 相关蛋白 (Cas9) 系统是一种适应性免疫反应防御机制,古细菌和细菌利用该机制降解外来遗传物质 (4,6)。该机制可重新用于其他功能,包括哺乳动物系统的基因组工程,例如基因敲除 (KO) (1,2,3,5)。CRISPR/Cas9 KO 质粒产品利用来自 Broad 研究所张实验室开发的全基因组 CRISPR 敲除 (GeCKO) v2 库的向导 RNA (gRNA) 序列,能够识别和切割特定基因 (3,5)。