XiaoMi-AI文件搜索系统
World File Search Systemintron
莎莎参考选择DNA SD072-S01
130参考00797-L00463 B1 2 135 CFHR3上游22996-L32432 B1 2 139 CFH下游22043-L08618 B1 2 142 CFH EXON 2 07821-L07575 B1 2 148 CFHR4 EXON 10 22222111-111111111198 B1 1 154 B1 B1 22069-L31040 B1 2 157 Reference 02731-L01824 B1 2 164 CFHR3 exon 1 07832-L07588 B1 2 168 CFHR3 exon 6 08218-L09921 B1 2 172 CFH exon 15 22071-L31042 B1 2 179 CFH exon 3 07822-L07576 B1 2 184 CFHR2 exon 4 07844-L07600 B1 2 190 Reference 03915-L03370 B1 2 196 CFHR1 exon 4 22072-L31043 B1 2 202 CFH exon 1 07820-L07574 B1 2 208 CFH exon 18 22073-L31044 B1 2 214 CFH exon 14 22074-L31045 B1 2 220 Reference 08879-L08935 B1 2 226 CFHR2 exon 3 21368-L31327 B1 2 232 CFHR5 exon 3 07847-L07603 B1 2 238 CFHR3 upstream 22997-L32433 B1 2 244 CFHR1 exon 5 22076-L31047 B1 2 253 CFHR5外显子8 22077-L31048 B1 2 258参考16472-L26940 B1 2 265 CFHR2 EXON 2 07842-L07598 B1 2 274 CFHR3 EXON EXON 3 22079-L31050 B1 2 301 Reference 02767-L02196 B1 2 310 CFH exon 12 07828-L07583 B1 2 317 CFHR4 exon 5 22994-L32539 B1 2 324 CFH exon 22 22044-L31698 B1 2 330 CFHR5 exon 1 07845-L30998 B1 2 337 CFH exon 6 07824-L07578 B1 2 346 CFHR1 intron 3 07839-L07595 B1 2 355 Reference 05991-L05416 B1 2 364 CFHR3 intron 4 07835-L07591 B1 2 373 CFH intron 11 07827-L07582 B1 2 382 CFH外显子17 07830-L07586 B1 2 392 CFHR3外显子3 07834-L07590 B1 2 400 CFHR4 EXON 6 22558-L31052 B1 2 406 CFHR2 INTON2 INTON 2 INTRON 1 22113-L31101 B1 2 414 B1 2 414参考12787-LESON HOR HORON 4199787-2224 CCR HOR HOR HOR HOR HOR HOR HOR HOR HOR HOR HOR HOR HOR HOR HOR HOR HOR HOR HOR HOR HON HOR HOR HOR HOR HOR HOR HOR HOR HOR HOR HOR HOR HOR HON HOR HOR 07823-L16758 B1 2 427 CFHR5外显子2 07846-L16757 B1 2 436 CFH EXON 21 22082-L31053 B1 2 445 CFHR4 EXON 1 22084-L31055 B1 2
使用CRISPR/CAS9与同源指导的修复来使人拓扑异构酶IIα内含子19 5'剪接位点保持沉默：人类白血病K562细胞中依托泊苷耐药性的产生
DNA拓扑异构酶IIα（TOP2α /170）是增殖细胞必不可少的酶。为了说话繁殖恶性肿瘤，这使Top2α /170成为依托泊苷和其他临床活性抗癌药物的重要靶标。这些药物的功效通常受到与TOP2α /170表达水平的改变有关的情况的限制。我们的实验室最近显示出TOP2α /170的水平降低，并且由于内含子的聚腺苷酸化（IPA;内含子19）在获得的可获得的依托托糖苷抗性K562 k562 k562 clonal细胞系中，C末端截短的90 kDa同工型TOP2α /90降低了TOP2α /90。我们先前报道说，这种同工型用TOP2α /170异构二聚体是对依托泊苷的耐药性的决定因素。通过基因编辑恢复的TOP2α /170水平，在耐药K /VP.5细胞中优化耐药的K /VP.5细胞中的剪接位点，TOP2α /90表达降低，并降低了耐药性。通过CRISPR /CAS9对父母K562细胞中的外显子19 /内含子进行沉默，并通过同源指导修复（HDR）进行沉默，从而迫使内含子19保留，从而诱导抵抗力，从而诱导抵抗力，从而破坏正常的RNA处理（即进一步评估90 nir and 2 and 2 and 2 and 2）同工型作为抗性决定因素。通过定量聚合酶链反应（QPCR）鉴定基因编辑的克隆，并通过Sanger测序验证。RNA-SEQ和QPCR研究表明，内含子19保留导致TOP2α编辑的mRNA转录物的降解导致TOP2α /170的表达降低。TOP2α / 170 mRNA /蛋白质表达水平在TOP2α基因编辑的克隆中衰减，这会导致对依托泊苷的耐药性，如依托泊苷诱导的DNA损伤（γH2AX，彗星测定）和生长抑制所评估。在基因编辑的K562细胞中TOP2α /90的强制表达进一步降低了依托泊苷诱导的DNA损伤，以支持该截短的同工型的主要负面作用。共同支持TOP2α /170和Top2α /90作为对TOP2α-靶向剂的灵敏度 /耐药性的重要作用。
ullrich
简化剪接机制的示意图。（a）由三个外显子（E1，E2和E3）组成的前MRNA的通用图以及具有外显子和内含剪接调节元件（ESE，ESS，ISE，ISE和ISS）的两个内含子（外显子之间）。剪接因子（SF）识别调节元件，然后将内含子插入，并产生连续的编码mRNA序列。（b）包含外显子11和12（E11和E12）和内含子11的Col6a1前MRNA段。内含子11的侧面是5'剪接供体（SD）和3'剪接受体（SA）位点。在正常条件下，在没有改变剪接的变体的情况下，内含子11被剪接，并且E11和E12在结果的转录本中连接在一起。（c）用C.930+189c> t变体（RNA中的C> u）从COL6A1基因转录的Pre-MRNA。该变体创建了一个新颖的5'SD位点，并激活了一个先前休眠的3'SA位点，位于新型SD位点上游的72个核苷酸（NT）。如果这两个新站点被剪接体识别，则在成熟的mRNA中将72 nt长的伪外exon（PE）插入E11和E12之间。只有确认新颖的5'SD位点时，将其上游的72 nt长PE和115 nt长的区域都插入成熟的mRNA中。但是，后一个成绩单不超过框架，而不会被翻译而降级。当两个新地点都没有识别出来时，会产生野生型成熟的转录本。（d）剪接切换ASOS在空间上阻止剪接体识别新颖的5'SD位点，并从成熟的转录本中从整个内含子11中获得正确的剪接
非小细胞肺癌 MET 外显子 14 跳跃变异的当前和未来治疗选择
近膜 (JX) 结构域，其中包含 PKC 磷酸化位点 (S985)、胱天蛋白酶切割位点 (D1002) 和 E3 泛素连接酶 CBL (Casitas-B 系淋巴瘤) 对接位点 (Y1003)，均控制 RTK 活性的下调 (图 1a)。3–7 这种改变破坏了外显子 14 两侧的内含子剪接位点，包括内含子 13 的剪接受体位点和内含子 14 的剪接供体位点，或外显子 14 编码序列本身内的突变，都会导致外显子 14 在转录本中跳跃。这些突变中最常见的是碱基替换，其次是插入/缺失。因此，导致MET外显子14跳跃的可变剪接事件会激活MET-HGF通路，促进肿瘤细胞增殖、迁移，并阻止细胞凋亡（图1b）。
完全从克隆的互补DNA中拯救第一个alphanucleorhabdovirus：一种有效的载体，用于MAI
fi g u r e 1从植物中的全长cDNA克隆中拯救感染性玉米镶嵌病毒（MMV）。（a）PJL-MMV-WT，PTF-N＆P和PJL-L-Lintron质粒的示意图。全长的MMV型质粒设计用于转录，以产生MMV抗原组RNA（AgRNA），并包含位于截短的CAMV Double 35S启动子（2×35s）和肝炎乙肝（RZ）rzl89 bjl89 bilary prinary prinary pharine pharione phinary phinary phinary phincy sequence之间的全长MMV cDNA。请注意，序列以抗原（mRNA）感显示。在PTF二进制质粒中的2×35s和35s终结序列之间插入了N和P的全长cDNA。L的全长cDNA与植物内含子ST-LS1插入2×35s和35S终结序列之间的植物内含子cDNA，在PJL89二元质粒中。（b）用含有PJL-MMV-GFP，PTF-N＆P和PJL-L-INTRON质粒的农杆菌菌株的农杆菌菌株的示意图，并说明了PJL-MMV-GFP质粒构建。全长PJL-MMV-GFP包含重复的N/P基因连接，将MMV抗原组cDNA的N和P基因之间的GFP基因两侧。le，领导者； TR，拖车； Ter，终结者； TEV，烟草蚀刻病毒； LB，左边界序列； RB，右边界序列。（c）通过烟草本尼亚娜（Nicotiana Benthamiana）的MMV救援程序的例证，并转移到玉米和Peregrinus Maidis Planthoppers。dpi，接种后天。图1C：使用biore nder.com
使用合成的同源供体构建体进行 CRISPR 介导的同源重组，为果蝇基因标记提供扩展工具包
摘要 之前，我们描述了大量果蝇菌株，每个菌株都携带一个人工外显子，其中包含一个基于 CRISPR 介导的同源重组插入目标基因内含子中的 T2AGAL4 盒。这些等位基因可用于多种应用，并且已被证明非常有用。最初，基于同源重组的供体构建体具有较长的同源臂（>500 bps），以促进大型构建体（>5 kb）的精确整合。最近，我们表明，供体构建体的体内线性化使得能够使用短同源臂（100-200 bps）将大型人工外显子插入内含子中。较短的同源臂使得商业合成同源供体成为可能，并最大限度地减少了供体构建体生成的克隆步骤。不幸的是，大约 58% 的果蝇基因缺乏适合所有注释异构体中人工外显子的编码内含子整合。在这里，我们报告了新构建体的开发，这些构建体允许用 KozakGAL4 盒替换缺乏合适内含子的基因的编码区，从而产生与目标基因类似地表达 GAL4 的敲除/敲入等位基因。我们还开发了定制载体骨架，以进一步促进和改善转基因。在包含目标基因 sgRNA 的定制质粒骨架中合成同源供体构建体，无需注射单独的 sgRNA 质粒，并显著提高了转基因效率。这些升级将使几乎所有果蝇基因都能靶向，无论外显子-内含子结构如何，成功率为 70-80%。
使用 CRISPR/Cas9 和 53BP1 抑制技术通过靶向 CYBB cDNA 插入来修复 X-CGD 患者的 HSPC，从而增强同源性定向修复
蛋白质。我们在此报告了通过同源定向修复在患者造血干细胞/祖细胞 (HSPC) 中进行基因校正，使用 CRISPR/Cas9 将腺相关病毒供体的 CYBB 外显子 1-13 或 2-13 cDNA 靶向插入内源性 CYBB 外显子 1 或外显子 2 位点。外显子 1-13 cDNA 的靶向插入不会恢复生理 gp91 phox 水平，这与 CYBB 表达对内含子 1 的要求一致。然而，外显子 2-13 cDNA 的插入完全恢复了吞噬细胞分化时 gp91 phox 和 ROS 的产生。添加土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件不会进一步增强外显子 2-13 校正细胞中的 gp91 phox 表达，表明保留内含子 1 足以实现最佳 CYBB 表达。使用 i53 mRNA 暂时抑制非同源末端连接，靶向校正增加了约 1.5 倍。在 NSG 小鼠中植入后，校正后的 HSPC 产生了吞噬细胞，并恢复了 gp91 phox 和 ROS 的产生。我们的研究结果证明了
技术
消费电子展（CES）2025将于1月7日至10日在美国拉斯维加斯举行。我们认为AI将仍然是今年最热门的话题。虽然AI到处都是CES 2024，但我们预计2025年的现实世界中的AI应用程序和设备，包括AI眼镜，智能家居和可穿戴设备。对于自动技术，我们希望看到有关智能驾驶舱，显示器和更多EV原型的最新技术。此外，卫星通信，PC，AR/VR和机器人技术将继续在CES 2025保持强大的存在。对于股票，我们更喜欢Edge AI供应链（AI眼镜/PC/可穿戴设备），包括LuxShare，小米，阳光光学，Q-Tech，AAC Tech，而对于自动电子产品，我们喜欢Byde，Boevx，Fit Hon Teng，Teng，Luxshare和Intron Tech。对于AR/VR和机器人技术，我们对阳光明媚的光学，AAC，Luxshare和Byde很积极。
内含子编辑可以使谱系特异性表达与HSPC基因治疗相关的治疗剂
基因编辑的造血茎和祖细胞（HSPC）的自体移植可以在不久的将来作为选择的多种遗传疾病（包括溶酶体储存疾病（LSD））的选择。HSPC的传统基因治疗方法基于慢病毒载体对转基因的整合，而最近靶向的盒式磁带的整合通常由设计器核酸酶支持。无论哪种情况，转基因的表达通常都由外源无处不在的启动子维持，该启动子可能会改变或失调周围的原始癌基因和/或肿瘤抑制器的表达。此外，普遍存在的启动子在干细胞水平上诱导所需转基因的表达，这可能会影响其功能性，因为已建议将半乳糖脑脑苷酶（Krabbe）或葡萄糖脑苷酶（Gaucher）的过表达表达。，我们基于将剪接功能的盒式集成到谱系特异性基因座的内含子中的集成基于HSPCS的新型基因编辑系统。这种方法旨在防止转基因在干细胞水平上的表达，仅在细胞分化后触发转基因表达。作为概念证明，我们编辑了CD11b在HSPC中的内含子，并诱导转基因（用于治疗I型I型的GFP或IDUA）在体外分化和体内髓细胞塑料插入后的髓样含量I型）中的髓样特异性表达。我们证明了这种方法对CD20和CD4基因的可运输能力。
mRNA 技术 - 洞察报告
mRNA 在转录过程中在细胞核中合成，产生前 mRNA，然后加工成 mRNA。在转录过程中，遗传信息由 RNA 聚合酶从 DNA 中复制，形成所谓的前 mRNA。然后，该分子通过添加 5' 帽和 3' poly(A) 尾巴进行加工，并通过在细胞核中剪接内含子序列形成五组分成熟 mRNA 结构。mRNA 结构中的每个组分在细胞质中核糖体的运输、翻译和有效生产蛋白质方面都有特定的作用（见图 3）。