静脉窦。注射后一天,荧光素酶信号只能在肺中检测到,仅在N/P比> 3中检测到(图1B)。在6、8和10(分别为6.4 x 10 4,5.0 x 10 4和3.9 x 10 4光子/s)的N/P比时,肺中的荧光素酶表达水平相似(图1B)。,解剖了包括肺在内的不同器官,并分析器官提取物以表达荧光素酶表达。用发光仪测量荧光素酶信号,并表示为每毫克蛋白质的相对光单位(RLU)。如图1c所示,在整个动物中的生物发光成像与肺提取物中的荧光素酶测定之间观察到了良好的相关性。然而,在器官提取物上进行的荧光素酶测定能够检测到整个动物成像未检测到的荧光素酶表达水平较低。如图1D所示,在器官解剖和均匀化后,使用荧光素酶测定法在脾,肝,肾脏和心脏提取物中确定荧光素酶表达。在脾脏,肾脏和心脏中,8和10的N/P比似乎给出的荧光素酶表达更高,而N/P比6。在肝脏中,8的N/P略优于其他N/P比。因此,应将DNA与体内 - JETPEI®比率和注射条件应适应靶向器官。共同表明,IVIS100成像系统能够检测到99%的发射荧光素酶信号,而其余的1%可以通过在器官提取物上执行的荧光素酶测定法确定。
体内-jetpei®是一种线性聚乙基亚胺(PEI),它辅助有效的核酸(DNA,SHRNA,siRNA,miRNA,miRNA,miRNA,寡核苷酸,…)使用各种递送途径递送到多种组织中:在静脉内施用后,将高水平的核酸输送到肺中。静脉注射后,其他器官,例如唾液腺,心脏,脾脏和肝脏也是针对的。此外,体内-Jetpei®是用于局部基因和siRNA递送的有效载体,例如在皮肤上肿瘤内或局部应用。使用体内-jetpei®的出版物可以在polyplus-transfection数据库中找到,可在https://www.polyplus-sartorius.com/polyplus-comes/polyplus-resource/cell-cell-transfection-database
ucd-pymt,产生显性阴性蛋白,该蛋白特异性抑制了由Charles Vinson(NCI,Bethesda,MD,MD,USA)提供的C/EBP成员的DNA结合。根据制造商的说明,使用JetPEI(Polytransfection; Qbiogene,Irvine,CA,美国)进行瞬态转染。允许转染进行16小时,并用1 nm TCDD或0.1%DMSO(对照)处理细胞24小时,然后再诱导凋亡或用TCDD处理TCDD进行RNA表达分析。用于DRE荧光素酶报告基因测定UCD-PYMT细胞用DRE报告基因质粒瞬时转染。 16小时后,用1 nm TCDD或0.1%DMSO(对照)处理4小时。将细胞裂解,并使用Luminometer(Berthold Lumat LB9501/16;宾夕法尼亚州匹兹堡)使用荧光素酶报告基因测定系统(Promega Corp.,Madison,WI)测量荧光素酶活性。 使用Bradford染料测定法(Bio-Rad Laboratories,Inc。,Hercules,CA)将相对光单元标准化为蛋白质浓度。用于DRE荧光素酶报告基因测定UCD-PYMT细胞用DRE报告基因质粒瞬时转染。16小时后,用1 nm TCDD或0.1%DMSO(对照)处理4小时。将细胞裂解,并使用Luminometer(Berthold Lumat LB9501/16;宾夕法尼亚州匹兹堡)使用荧光素酶报告基因测定系统(Promega Corp.,Madison,WI)测量荧光素酶活性。使用Bradford染料测定法(Bio-Rad Laboratories,Inc。,Hercules,CA)将相对光单元标准化为蛋白质浓度。