• 独立的指令和数据存储器单元,带有 4 KB 数据缓存和 4 KB 指令缓存,以及由地址转换缓存 (ATC) 支持的独立存储器管理单元 (MMU),相当于其他系统中使用的 TLB。 • 处理器使用 16 个通用寄存器实现 113 条指令。 • 18 种寻址模式包括:寄存器直接和间接、索引、内存间接、程序计数器间接、绝对和立即模式。 • 指令集包括数据移动、整数、BCD 和浮点算术、逻辑、移位、位域操作、缓存维护和多处理器通信,以及程序和系统控制和内存管理指令 • 整数单元组织在六级指令流水线中。
arr(X,Y)x1,(1-22)x2 全基因组染色体 SNP 微阵列 (Reveal) 分析正常。根据下文所述的本报告标准,在 277 万个区域特异性 SNP 和结构靶标中未检测到显著的 DNA 拷贝数变化或拷贝中性区域。当发现新的临床重要基因时,可以根据要求重新检查档案记录。方法:使用 Cytoscan ® HD Accel 平台进行 SNP 微阵列分析,该平台使用 2,029,441 个非多态性拷贝数探针和 743,130 个 SNP 探针进行 LOH/AOH 分析和关系评估。该阵列的平均基因内间距为 0.818 kb,平均基因间距为 1.51 kb。从提供的样本类型中提取总基因组 DNA,用 Xce1 消化,然后连接到 Xce1 接头。纯化并定量 PCR 产物。将纯化的 DNA 破碎,用生物素标记,并与 Cytoscan ® HD Accel 基因芯片杂交。使用染色体分析套件分析数据。分析基于 GRCh37/hg19 组装。此测试由 LabCorp 开发并确定其性能特征。它尚未获得食品和药物管理局的批准或认可。阳性评价标准包括:* DNA 拷贝数损失 >200 kb 或在具有至少一个 OMIM 基因的已知临床重要区域之外增加 >500 kb。* DNA 拷贝数增加/损失在或包括已知 25 kb 或更大的临床重要基因内。* 如果患者结果显示单个染色体中存在 >20 Mb 间质或 >10 Mb 端粒的长连续纯合区域(印迹染色体分别为 15 和 8 Mb),则建议进行 UPD 测试。 * 如果一个区域的连续纯合性大于 8 Mb,但低于 UPD 报告标准,则报告为隐性疾病风险增加。 * 多条染色体内连续纯合性大于 8 Mb 表明存在共同祖先。这些区域具有潜在的隐性等位基因风险。 * 由于存在大量连续的短片段(与地理或社会有限的基因库相关),报告在第 99 个百分位处存在高水平的等位基因纯合性。 SNP 染色体微阵列无法检测: * 真正平衡的染色体变异 * 序列变异
基因工程小鼠模型 (GEMM) 有助于我们了解人类病理并开发新疗法,但在小鼠身上忠实地重现人类疾病却具有挑战性。基因组学的进展凸显了非编码调控基因组序列的重要性,这些序列控制着许多人类疾病的时空基因表达模式和剪接 1,2 。包括需要大规模基因组工程的调控大范围基因组区域应该可以提高疾病建模的质量。现有方法限制了 DNA 传递的大小和效率,阻碍了我们称之为基因组重写和定制 GEMM(GREAT-GEMM)的高度信息模型的常规创建。在这里,我们描述了 8 哺乳动物逐步切换抗生素抗性标记以进行整合 9 (mSwAP-In),这是一种在小鼠胚胎干细胞中进行高效基因组重写的方法。我们展示了使用 mSwAP-In 对定制的 Trp53 基因座进行多达 115)kb 的迭代基因组重写,以及使用 116)kb 和 180)kb 人类 ACE2 基因座对小鼠进行人源化。ACE2 模型重现了人类 ACE2 的表达模式和剪接,值得注意的是,与现有的 K18-hACE2 模型相比,在受到 SARS-CoV-2 攻击时表现出的症状较轻,因此代表了一种更像人类的感染模型。最后,我们通过在 ACE2 GREAT-GEMM 中对小鼠 Tmprss2 进行双等位基因人源化,展示了连续基因组写入,突出了 mSwAP-In 在基因组写入方面的多功能性。
图1Hekexpress®细胞的基因型表征。(a)使用靶向T抗原编码序列的引物(集1)的引物,跨Hekexpress®基因组的TLA序列覆盖率。绘图表明质粒的积分位点位于3染色体等效物(CHR3)上。(b)使用针对T抗原编码序列(集1)或CHR3(集3和4)的引物(集3和4)的引物(集3和4)的引物,(b)在人类CHR3中整合基因座的TLA序列覆盖率。 集合1的覆盖范围表明,与人类HG38基因组相比,Hekexpress®基因组(绿色箭头)中的550 kb缺失。 集合3和4的覆盖范围确认了综合质量PRTAK的连接。 (c)PRTAK质粒图最初集成在Hekexpress®细胞系中。 大小的T抗原序列在橙色的基因中,在深紫色和grnas(grna_beginning和grna_end)中指示。 (d)Chr3等效(红色)的图与550 kb缺失以及包含T抗原序列的PRTAK质粒的整合。 由TLA证实的质粒 - 染色体连接均以蓝色指示。 Hek,人类胚胎肾; TLA,靶向基因座放大。(b)在人类CHR3中整合基因座的TLA序列覆盖率。集合1的覆盖范围表明,与人类HG38基因组相比,Hekexpress®基因组(绿色箭头)中的550 kb缺失。集合3和4的覆盖范围确认了综合质量PRTAK的连接。(c)PRTAK质粒图最初集成在Hekexpress®细胞系中。大小的T抗原序列在橙色的基因中,在深紫色和grnas(grna_beginning和grna_end)中指示。(d)Chr3等效(红色)的图与550 kb缺失以及包含T抗原序列的PRTAK质粒的整合。由TLA证实的质粒 - 染色体连接均以蓝色指示。Hek,人类胚胎肾; TLA,靶向基因座放大。
强制性。i) 考生必须在线提交申请,并附上清晰易读的小型文件,其中包含基本和高等教育资格证书的扫描件以及分数百分比(由成绩单适当支持)、在线申请的工作经历栏中所述的经验(如果有)、最近的护照大小彩色照片(大小不超过 30 KB;分辨率为 110 x 140 像素)以及通过 RAC 网站提交的所需申请费详情。每个附件的最大文件大小不应超过 500 KB,打印时必须清晰易读。ii) 考生在申请标有 (#) 的科目/学科时,必须表明他们对 DRDO 和/或 ADA 的偏好。iii) 所有考生,无论是在政府部门还是在政府所有的组织中,
图3。增加MGCL₂浓度对目标下90%的扩增的影响。富裕的s。金黄色葡萄球菌gDNA靶序列使用Phusion Plus Plus DNA聚合酶在Proflex PCR系统上进行扩增。每个20 µL反应含有10 ng的s。金黄色葡萄球菌和另外1 mm,1.5 mm,2 mm或2.5 mmmgcl₂。热循环条件:98°C的30秒;在98°C,最佳退火温度下10秒的10秒循环(表4),在64°C时为1分钟/kb;在64°C下5分钟。PCR产品以2%E-Gel 48含Sybr安全染色的琼脂糖凝胶运行。车道M:E-GEL 1 KB Plus Express DNA梯子。
图1在小鼠中产生人类疾病遗传模型的基因替代方法(GR)的示例:APOE -GR等位基因。对于这些线,编码小鼠APOE基因簇(APOE,APOC1,APOC4和APOC2)的小鼠基因组区域(30 kb)被人类基因组的47-kb共同区域完全替代。对于这些GR等位基因,从小鼠到人类序列的过渡发生在不受保存的区域内,仅是小鼠Tomm40基因的3',并且从人类apoc2基因仅3'的非保守区域中,从人类tome序列到小鼠序列的过渡。47 kb的apoE -gr等位基因本身是完全人类的APOEε4单倍型序列。在此APOC -GR模型集中还生成了带有单个核苷酸变化的匹配线,引入了APOEε3编码变化。
图1在小鼠中产生人类疾病遗传模型的基因替代方法(GR)的示例:APOE -GR等位基因。对于这些线,编码小鼠APOE基因簇(APOE,APOC1,APOC4和APOC2)的小鼠基因组区域(30 kb)被人类基因组的47-kb共同区域完全替代。对于这些GR等位基因,从小鼠到人类序列的过渡发生在不受保存的区域内,仅是小鼠Tomm40基因的3',并且从人类apoc2基因仅3'的非保守区域中,从人类tome序列到小鼠序列的过渡。47 kb的apoE -gr等位基因本身是完全人类的APOEε4单倍型序列。在此APOC -GR模型集中还生成了带有单个核苷酸变化的匹配线,引入了APOEε3编码变化。
图3。DNA运输稳定缓冲液保持DNA干燥和存储在RT的功能和完整性。使用DNA运输管评估DNA干燥的完整性和功能,我们使用三种不同的条件进行了1个月的DNA多路复用PCR:在-20ºC(参考条件)(参考条件)冷冻,并在RT下干燥,具有或没有DNA运输稳定的RT。如上所示,在储存在-20ºC和RT的DNA中观察到了一个定义的17.5 kb(红色矩形),并在RT中使用DNART运输稳定稳定缓冲液,而在没有此缓冲液的RT中,DNA均显示出几乎无法检测到的17.5 kb带,表明DNA功能和整合性损失。观察到供体C和D的结果相同。