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人类神经类器官突触结构的分离和表征
突触体传统上是从啮齿动物或死后人类脑组织中富集的，但啮齿动物模型缺乏人类特有的突触特征，而死后组织中突触体的功能受到死后间隔的限制，并且通常仅显示疾病终点。此外，由于道德问题和可用性问题，只有少数研究针对人类样本。然而，神经类器官 (NO) 已成为分离完整和活的人类神经末梢以研究人类特有的突触传递方面的可能新来源。此外，突触体的富集通常使用密度梯度离心进行，这需要大量的起始材料。在本研究中，我们开发了一种应用差速离心方案从人类 NO 中富集突触结构的方法。然后，我们使用基于质谱的定量蛋白质组学来记录突触和生长锥特异性蛋白的富集，并在 KCl 刺激下进行定量磷酸化蛋白质组学来证明衍生突触结构的活力和生理功能。
可以合成本身和互补链的聚合酶核酶
图1。三个小聚合酶核酶基序的发现和进化。（a）选择构造的格式用于初始选择回合（回合1至3或1至5），库是通过柔性链接器链接到杂交标签的六聚体标签的。生物素化引物可以捕获活性连接酶（在图中进行了详细描述S1-S2）。（b）在后期回合中使用的选择构建体的格式（3至11或5至11），需要三磷酸化的三核苷酸（Triplet）底物的聚合。在选择过程中，三胞胎（xxx）的序列（xxx）和由模板（x'x'x'）编码的三重态数（y）在选择过程中变化（表S1中的详细信息）。（c）序列和预测从显示迭代三重三重连接的库中发现的三个核酶的二级结构，即三重酶聚合酶活性。在绿色中，源自随机库部分的核苷酸。在灰色的核苷酸中，源自恒定区域（接头和引物结合位点）。（d）在（b）中显示的（c）中显示的核酶的迭代三重聚会聚合，带有xxx = gcg和x'x'x'= cgc，y = 3。反应条件：50 nm核酶 - 基底，50 nm引物BCY3P10GA，50 nm模板T6FP10GAGCG3，5μMPPPGCG三胞胎，0.05％Tween 20，200 mm Kcl，50 mm Kcl，50 mm mgcl 2，50 mm mgcl 2，50 mm ches-koh，ph 9，3天，3天，以-77°°°°°°°°核酶与模板杂交。（E）序列和预测源自1-40克隆的QT51核酶的二级结构。黑色圆圈表示从1-40个祖先序列突变的6个残基；三角形表示2-核苷酸缺失。（f）60核苷酸序列的合成，该序列由CGU三重态的20个重复组成。Reaction conditions: 0.25 μM primer F10, 0.25 μM template tP10CGU20, 0.25 μM ribozyme, 10 μM pppCGU triplet, QT51 in 0.05% Tween 20, 50 mM MgCl 2 , 50 mM CHES-KOH, pH 9, 5TU+t1.5 in 200 mM MgCl 2 , 50 mM Tris-Cl, pH 8.3, 2 weeks在-7°C冷冻。核酶未与模板杂交。
用于金属材料喷射支撑结构的盐类分析
摘要 材料喷射 (MJT) 是一种增材制造工艺，其中构建材料以单个液滴的形式沉积。由于 MJT 具有潜在的高打印速度以及低设备和原材料成本，因此最近已扩展到金属加工领域。为了实现完整的 3D 功能，需要支撑结构，打印作业后必须将其移除。我们研究了水溶性盐和合适的喷嘴材料，以实现 MJT 工艺中的熔盐打印。在这里，熔体和喷嘴的润湿特性至关重要，因为明显的润湿会影响液滴的喷射。建立了一个固着滴接触角测试台，以评估三种盐或盐混合物（NaCl、KCl-NaCl 和 NaCl-Na 2 CO 3 ）在六种不同喷嘴材料（各种陶瓷和石墨）（即潜在喷嘴材料）上的润湿特性。结果表明，除石墨上的 KCl-NaCl 外，大多数检查样品都具有较高的润湿趋势。这些材料在 MJT 测试台上的应用证实了我们研究结果的可行性。
三维印刷藻酸钠和k- ...
摘要：这项工作报告了基于K-Carrageenan和Alginate钠的海洋衍生多糖配方的开发，以生产一种用于工程技术的新型脚手架。在3D打印之前，通过流变测试评估了双成分墨水的粘弹性。在没有任何交联的两个聚合物之间具有不同重量比的组成，第一次对我们的最大知识进行了3D打印，并且对制造参数进行了优化，以确保受控体系结构。在存在不同浓度的氯化物混合物（CaCl 2：KCl = 1：1; v / v）的情况下，进行了3D打印支架的交联。通过肿胀行为和机械性能评估了交联方案的效率。肿胀行为表明当交联剂的浓度增加时，肿胀程度下降。这些结果与纳米识别测量和宏观测试的结果一致。还使用形态分析来确定样品冻干后样品的孔径以及脚手架的均匀性和微体系特征。总体而言，注册的结果表明，双成分墨水ALG/KCG = 1：1可能对组织工程应用显示出潜力。
tulsi蜂蜜合并CEO2纳米复合材料用于染料降解，抗氧化剂和环状伏安传感器研究
本研究涉及通过反流方法的Tulsi Honey掺杂氧化葡萄岩（TH/CEO 2）的便利合成。使用UV-可见，FTIR，TEM和XRD技术对样品进行表征。使用TH/CEO 2在RH-B（Rhodamine b）染料上实施了光催化研究，并在80分钟后显示了95％的降解，在反应的一阶动力学速率和半寿命（t 1/2）周期为42.58分钟。使用镍网状电极在1 M KCL溶液中分析Th掺杂的CEO 2的氧化还原行为，表明电化学特性（例如电容（CSP），扩散系数（D）和可逆性（ER））的氧化还原行为显着改善。使用环状伏安法检测制备的纳米复合材料来检测Hg +2和Pb +2离子的传感器活性。在这里，Hg +2和Pb +2传感器使用准备好的材料展示了更好的传感特性。生成的TH/CEO 2使用2,2-二苯基丙烯酰氢羟基（DPPH）自由基表现出88％的自由基清除活性，IC50值为339.449 mg/ml。
高度AV块患者的经胸蛋白心脏淀粉样变性的患病率
我们介绍了两个框架的耦合 - 伪开放的边界模拟方法称为恒定电位分子动力学模拟（CμMD），结合了量子力学/分子动力学（QMMD）计算 - 描述与电解质接触的石墨烯电极的性能。然后将所得的CμQMMD模型应用于散装溶液中的三个离子溶液（LICL，NaCl和KCl），范围为0.5 m至6 m，与带电的石墨烯电极接触。我们在这里描述的新方法提供了一种模拟协议，以控制电解质溶液的浓度，同时包括完全极化的电极表面的效果。由于这种耦合，我们能够准确地对双层的电极和溶液侧进行建模，并彻底分析带电接口处电解质的性质，例如电解质的筛选能力和电势元曲线。我们还报告了对每个离子物种分析的整个浓度范围内积分电化学双层电容的计算，而量子机械模拟则可以访问差异和积分量子电容。我们强调了微妙的特征，例如钾石墨烯的吸附或离子形成簇的趋势有助于石墨烯储存电荷的能力，并暗示对淡化的影响。
大区域，自我修复块共聚物膜用于能量转换
强烈的电鱼连续将代谢能量转化为离子选择性膜的电势差。1,2具有此能力的可植入人造电器器官的制造将需要宏观，稳定，自我修复，流体和能量转化的膜。这里提出的工作引入了一种自组装策略，以准备满足所有这些标准的人造膜。该策略使用水性两相系统的界面来模板并稳定具有可扩展区域的分子薄（〜35 nm）平面块聚合物双层双层分子的形成，这些双层均可能超过10平方米，而没有缺陷。这些膜具有自我修复的能力及其屏障功能，以与离子（〜1mcm2）相匹配磷脂膜的能力。这些膜的流动性可以通过分子载体来直接功能化，该分子载体将钾离子沿浓度梯度沿钠离子降低了浓度梯度。与技术膜的电荷选择性相反，这种生物启发的离子 - 选择性使得在膜上建立电势差，以将等效浓度的NaCl和KCl分离溶液。我们通过与互连的流体储层构造台式原型人造器官来证明适用性，其电压增加了60 mV，每增加一个离子选择性膜串联。
核酸研究
8％聚丙烯酰胺凝胶。cDNA（-0.5 tg）范围为550至1500个碱基对，通过电装饰回收。使用末端脱氧核苷酸转移酶（20）与脱氧残基一起扩展了20 ng等分试样，并用PST I裂解并用Deoxyg残基尾巴（20）将PBR322的100 ng退火100 ng。通过公开的程序（23），使用退火的混合物用于转化大肠杆菌K-12菌株294（22）。制备诱导和未诱导的32P-CDNA探针。5 Zg的12S mRNA与2个寡核酸（DT）12-18（协作研究）或每个合成引物池（FIB 1至FIB 6）的2 Ig合并，在10mm Tris-HCl（pH 8），1 mm EDTA中。将混合物煮沸3分钟，然后在冰上淬火。60 ul of 40 mM Tris-HCl (pH 8.3), 40 mM KCl, 16mM MgCl2, 60 mM o-mercaptoethanol, 1 mM dATP, dGTP, dTTP and 5 x 10 7M (Q-32P) dCTP (Amersham, 2,000 - 3,000 Ci/mmole) was added to each template-primer mix at OC.在添加100个AMV逆转录酶后，将反应在42％C下孵育30分钟，并通过超过10 ml Sephadex G-50列的通道纯化。产品用
CRISPR/HDR编辑与慢病毒转导的影响对恒河猕猴中HSPC的长期植入和克隆动力学的影响
复制蛋白A（RPA）是单个链DNA（ssDNA）结合蛋白，可协调各种DNA代谢过程，包括DNA复制，修复和重组。RPA是一种异三聚体蛋白，具有六个功能性寡糖/寡核苷酸（OB）结构域和柔性接头。 灵活性使RPA能够采用多种配置，并被认为可以调节其功能。 在此，使用单分子共焦荧光显微镜与光学镊子和粗粒细粒的分子动力学模拟结合使用，我们研究了在张力下ssDNA上单个RPA分子的扩散迁移。 在3 pn张力和100 mM KCl时，扩散系数D是最高（20,000个核苷酸2 /s），当张力或盐浓度增加时，则显着降低。 我们将张力效应归因于段转移，这受到DNA拉伸和盐效应的阻碍，降低了RPA-SSDNA的结合位点大小和相互作用能量的增加。 我们的综合研究使我们能够估计通过通过RPA上多个结合位点在DNA上的遥远位点的短暂桥接发生的细胞分段转移事件的大小和频率。 有趣的是，RPA三聚芯的删除仍然允许大量的ssDNA结合，尽管降低的接触面积使RPA的移动性增加了15倍。 最后，我们表征了RPA拥挤对RPA迁移的影响。 这些发现揭示了如何重塑高亲和力RPA-SSDNA相互作用以产生访问，这是多个DNA代谢过程中的关键步骤。RPA是一种异三聚体蛋白，具有六个功能性寡糖/寡核苷酸（OB）结构域和柔性接头。灵活性使RPA能够采用多种配置，并被认为可以调节其功能。在此，使用单分子共焦荧光显微镜与光学镊子和粗粒细粒的分子动力学模拟结合使用，我们研究了在张力下ssDNA上单个RPA分子的扩散迁移。在3 pn张力和100 mM KCl时，扩散系数D是最高（20,000个核苷酸2 /s），当张力或盐浓度增加时，则显着降低。我们将张力效应归因于段转移，这受到DNA拉伸和盐效应的阻碍，降低了RPA-SSDNA的结合位点大小和相互作用能量的增加。我们的综合研究使我们能够估计通过通过RPA上多个结合位点在DNA上的遥远位点的短暂桥接发生的细胞分段转移事件的大小和频率。有趣的是，RPA三聚芯的删除仍然允许大量的ssDNA结合，尽管降低的接触面积使RPA的移动性增加了15倍。最后，我们表征了RPA拥挤对RPA迁移的影响。这些发现揭示了如何重塑高亲和力RPA-SSDNA相互作用以产生访问，这是多个DNA代谢过程中的关键步骤。
目录
内容实验细节图S1。使用0.15m钠（ - ） - dibenzoyl-l-tartrate的洗脱完成了L，L-1 4+和D，D，D，D-1 4+的对映体分离的示例。图S2。 使用阳离子 - 交换色谱法分辨出L，L -L -1 4+，D，D，D -1 4+和D，L -1 4+的圆形二色光谱。 表S1。 [D，D -1] Cl 4的晶体数据摘要。 表S2。 [L，L -1] Cl 4的晶体数据摘要。 图S3。 用于[D，D -1] Cl 4晶体结构图S4的阳离子的热椭圆形图。 用于[L，L -1]阳离子的热椭圆形图（PF 6）4晶体结构图S5。 在将DNA逐渐滴定到过量的情况下，涉及L，L -1 4+（5µm）的水缓冲液滴定的示例（25°C时PH7.0）。 顶部：在5mm Tris中添加CT-DNA，25mm NaCl。 底部：在添加人端粒序列时，HTS，（D [Ag 3（T 2 Ag 3）3]）在缓冲液中（10 mmKH 2 PO 4 /k 2 HPO 4，1MM k 2 EDTA在50–200 mm kCl中）。 用HTS（ - ）L，L -1 4+（5µm）的L，L -1 4+（5μm）的最大发光强度。 与CT -DNA（ - ）的等效滴定在实验误差中对于D，D -1相同。 显示了与HTS（ - ）的D，D -1（5µM）在等效滴定上获得的最大发射强度的示例。 箭头指示每个发射图S7的L最大值。 用L，L -1 4+（Lambda），D，D，D -1 4+（Delta）和D，L -1 4+（MESO）在MTT分析中获得的细胞活力数据示例。 图S8。 图S9。图S2。使用阳离子 - 交换色谱法分辨出L，L -L -1 4+，D，D，D -1 4+和D，L -1 4+的圆形二色光谱。表S1。 [D，D -1] Cl 4的晶体数据摘要。 表S2。 [L，L -1] Cl 4的晶体数据摘要。 图S3。 用于[D，D -1] Cl 4晶体结构图S4的阳离子的热椭圆形图。 用于[L，L -1]阳离子的热椭圆形图（PF 6）4晶体结构图S5。 在将DNA逐渐滴定到过量的情况下，涉及L，L -1 4+（5µm）的水缓冲液滴定的示例（25°C时PH7.0）。 顶部：在5mm Tris中添加CT-DNA，25mm NaCl。 底部：在添加人端粒序列时，HTS，（D [Ag 3（T 2 Ag 3）3]）在缓冲液中（10 mmKH 2 PO 4 /k 2 HPO 4，1MM k 2 EDTA在50–200 mm kCl中）。 用HTS（ - ）L，L -1 4+（5µm）的L，L -1 4+（5μm）的最大发光强度。 与CT -DNA（ - ）的等效滴定在实验误差中对于D，D -1相同。 显示了与HTS（ - ）的D，D -1（5µM）在等效滴定上获得的最大发射强度的示例。 箭头指示每个发射图S7的L最大值。 用L，L -1 4+（Lambda），D，D，D -1 4+（Delta）和D，L -1 4+（MESO）在MTT分析中获得的细胞活力数据示例。 图S8。 图S9。表S1。[D，D -1] Cl 4的晶体数据摘要。表S2。 [L，L -1] Cl 4的晶体数据摘要。 图S3。 用于[D，D -1] Cl 4晶体结构图S4的阳离子的热椭圆形图。 用于[L，L -1]阳离子的热椭圆形图（PF 6）4晶体结构图S5。 在将DNA逐渐滴定到过量的情况下，涉及L，L -1 4+（5µm）的水缓冲液滴定的示例（25°C时PH7.0）。 顶部：在5mm Tris中添加CT-DNA，25mm NaCl。 底部：在添加人端粒序列时，HTS，（D [Ag 3（T 2 Ag 3）3]）在缓冲液中（10 mmKH 2 PO 4 /k 2 HPO 4，1MM k 2 EDTA在50–200 mm kCl中）。 用HTS（ - ）L，L -1 4+（5µm）的L，L -1 4+（5μm）的最大发光强度。 与CT -DNA（ - ）的等效滴定在实验误差中对于D，D -1相同。 显示了与HTS（ - ）的D，D -1（5µM）在等效滴定上获得的最大发射强度的示例。 箭头指示每个发射图S7的L最大值。 用L，L -1 4+（Lambda），D，D，D -1 4+（Delta）和D，L -1 4+（MESO）在MTT分析中获得的细胞活力数据示例。 图S8。 图S9。表S2。[L，L -1] Cl 4的晶体数据摘要。 图S3。 用于[D，D -1] Cl 4晶体结构图S4的阳离子的热椭圆形图。 用于[L，L -1]阳离子的热椭圆形图（PF 6）4晶体结构图S5。 在将DNA逐渐滴定到过量的情况下，涉及L，L -1 4+（5µm）的水缓冲液滴定的示例（25°C时PH7.0）。 顶部：在5mm Tris中添加CT-DNA，25mm NaCl。 底部：在添加人端粒序列时，HTS，（D [Ag 3（T 2 Ag 3）3]）在缓冲液中（10 mmKH 2 PO 4 /k 2 HPO 4，1MM k 2 EDTA在50–200 mm kCl中）。 用HTS（ - ）L，L -1 4+（5µm）的L，L -1 4+（5μm）的最大发光强度。 与CT -DNA（ - ）的等效滴定在实验误差中对于D，D -1相同。 显示了与HTS（ - ）的D，D -1（5µM）在等效滴定上获得的最大发射强度的示例。 箭头指示每个发射图S7的L最大值。 用L，L -1 4+（Lambda），D，D，D -1 4+（Delta）和D，L -1 4+（MESO）在MTT分析中获得的细胞活力数据示例。 图S8。 图S9。[L，L -1] Cl 4的晶体数据摘要。图S3。用于[D，D -1] Cl 4晶体结构图S4的阳离子的热椭圆形图。用于[L，L -1]阳离子的热椭圆形图（PF 6）4晶体结构图S5。在将DNA逐渐滴定到过量的情况下，涉及L，L -1 4+（5µm）的水缓冲液滴定的示例（25°C时PH7.0）。顶部：在5mm Tris中添加CT-DNA，25mm NaCl。底部：在添加人端粒序列时，HTS，（D [Ag 3（T 2 Ag 3）3]）在缓冲液中（10 mmKH 2 PO 4 /k 2 HPO 4，1MM k 2 EDTA在50–200 mm kCl中）。用HTS（ - ）L，L -1 4+（5µm）的L，L -1 4+（5μm）的最大发光强度。与CT -DNA（ - ）的等效滴定在实验误差中对于D，D -1相同。显示了与HTS（ - ）的D，D -1（5µM）在等效滴定上获得的最大发射强度的示例。箭头指示每个发射图S7的L最大值。用L，L -1 4+（Lambda），D，D，D -1 4+（Delta）和D，L -1 4+（MESO）在MTT分析中获得的细胞活力数据示例。图S8。图S9。lambda堆叠实验显示了活的MCF -7细胞中A）D，D -1 4+和L -1 4+的发射曲线。MCF7细胞的CLSM图像使用两个单独的检测通道，分别为670-700 nm（红色）和630-640 nm（黄色），对于D，D，D -1 4+（TOP）和L，L，L -1 4+（底部）。