产品描述:Akron的重组NLS-SPCAS9-NLS(CAS9)核酸酶解决方案均遵循所有相关的辅助材料指南。下游纯化过程使用多步矫正方法,不使用亲和力标签,以最大程度地减少外源杂质,并确保提供高度纯化和活性的物质以进行进一步的制造应用。Akron的Cas9核酸酶是单链,162 kDa,非糖基化的DNA核酸内切酶,在大肠杆菌中表达。氨基酸序列来自链球菌链球菌,蛋白质结构已通过在蛋白质的N-和C-末端添加核定位序列(NLS)改变了蛋白质结构。将NLS添加到蛋白质结构中确保您的RNP复合物有效地导入细胞核。
摘要:本研究的目的是确定Olive Pomace水提取物的ACE抑制活性,并了解它们是否代表了营养和药理应用的生物活性LMW肽的良好来源。我们从橄榄Pomace产生了水提取物(var。picual),并获得了其低分子量(LMW)馏分(<3 kDa)。每100 g橄榄色的Pomace计算出的提取产率为100.2±7.9 mg LMW肽。橄榄色Pomace LMW馏分具有强大的ACE抑制活性(IC 50 = 3.57±0.22 µg Prot/ml)。通过纳米级液相色谱 - 轨道和串联质谱和从头测序的纳米液相色谱 - 轨道分析LMW分数(<3 kDa)。使用可用的Olea Europaea(CV。farga)基因组数据库。还通过从头测序峰鉴定出十种新肽。通过BLAST搜索确定了峰DB在数据库中检测到的十二肽的蛋白质来源。通过Biopep软件预测了已鉴定肽的ACE抑制活性。我们得出的结论是,橄榄色的Pomace具有ACE抑制活性,并包含具有(预测)生物学活性的低分子量肽。橄榄色Pomace可能代表了营养和药物应用的良好肽来源。在我们的研究中,已经表明橄榄色的Pomace具有ACE抑制活性,并包含具有(预测)生物学活性的低分子量肽。橄榄色Pomace可能代表了营养和药物应用的良好肽来源。需要进行更多的研究,以鉴定橄榄Pomace生物活性肽的体内影响。
抑制素 (PHB) 是一类保守的蛋白质,主要位于线粒体内膜和细胞核中,具有多种生物学功能。PHB 包括 PHB1 (32 kDa) 和 PHB2 (37 kDa),是包含口素和浮素的超家族成员 [1]。PHB 主要以具有玫瑰花结结构的聚合物形式存在,直径为 20–25 nm [2,3]。据推测,PHB 调节细胞周期、衰老和肿瘤抑制,同时特异性地抑制 DNA 合成的起始 [4]。PHB1 抑制几种类固醇激素受体的信号传导 [5-7],而 PHB2 选择性地抑制雌激素受体 (ER) 活性 [8]。 PHB2 参与重要的细胞过程,包括细胞存活、凋亡、代谢、炎症、基因转录和信号转导 [9,10]。已发现秀丽隐杆线虫和小鼠的 PHB 缺失会导致胚胎死亡 [11,12]。为了进一步阐明 PHB2 在生理和病理生理过程中的作用,已经建立了几种组织特异性 PHB2 敲除小鼠模型。例如,前脑特异性 PHB2 缺陷小鼠表现出 tau 过度磷酸化和神经退行性[13],肾足细胞中 PHB2 的缺失导致肾小球硬化[14],肝细胞特异性 PHB2 敲除小鼠表现出肝功能衰竭和糖异生受损[15],β 细胞特异性 PHB2 敲除导致 β 细胞功能受损和糖尿病[16]。心脏特异性 PHB2 敲除小鼠会出现心力衰竭并死亡[8]。结果表明正常器官功能需要 PHB2。PHB1 或 PHB2 中的任何一个的敲低都会导致另一个的敲低,从而造成 PHB“超复合物”表达降低。例如,在前脑或 HEK293T 细胞中,其组装伙伴 PHB1 的有效丧失伴随 PHB2 的耗竭 [ 13 , 14 ],这突显了 PHB 亚基在某些组织中的功能相互依赖性。
滋养层细胞表面抗原 2 (TROP2) 受体蛋白,又称 GA733-1 (胃肠道抗原 733-1)、EGP-1 (上皮糖蛋白-1)、TACSTD2 (肿瘤相关钙信号转导子-2),是一种分子量为 36 kDa 的跨膜糖蛋白,最初在正常和肿瘤滋养层细胞中发现 [1, 2]。TROP2 是位于 1p32 染色体上的 TACSTD2 基因的蛋白质产物,该基因是一种细胞原癌基因。其突变导致获得致癌功能,从而决定原发性癌细胞的转化过程及其转移能力。 TROP2蛋白在内质网中合成,然后运输至高尔基体,在此进行糖基化。其表达于细胞膜表面及细胞质内,膜表达的存在与
成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR)/CRISPR 相关蛋白 9 (Cas9) 系统已成为修改多种细胞类型基因表达的重要工具,在肿瘤治疗中显示出前所未有的潜力 (2)。许多研究已将 CRISPR/Cas9 应用于治疗相关的体外和体内实验 (3)。然而,由于 Cas9 蛋白的尺寸较大 (160 kDa),CRISPR/Cas9 的应用受到限制。迫切需要高效、安全地将 CRISPR/Cas9 递送到 AML 细胞中以探索新的治疗靶点。近年来,CRISPR/Cas9 核糖核蛋白 (RNP) 复合物已通过电穿孔直接递送到肿瘤细胞中,由于 RNP 复合物的寿命短,脱靶效应减少 (4-9)。
图S3。用于检测HPNPO的抗体似乎无法识别果蝇PNPO。(a)普遍存在的SGLL敲低(基因型:actin -gal4/uas -SGLL RNAI)和对照曲线(基因型:actin -gal4/+和uas -sgll rnai/+)中的SGLL mRNA水平。n =每个基因型4。误差线代表平均值±SEM。* P <0.05。单向方差分析与Tukey的邮政为HOC。(b)具有各种基因型的成人头部匀浆的蛋白质印迹。n =每个基因型2。微管蛋白是负载对照。从所有三种基因型中检测到一种结合。这个乐队的大小似乎是正确的;果蝇PNPO的预测分子量(约27 kDa)。然而,SGLL敲低频率中的带强度与两个对照中的带强度相同,表明该频带不太可能是果蝇PNPO。
在真核细胞中,线粒体是内共生器官,与各种细胞过程有关,包括能量消耗,生物合成,信号转移和程序性细胞死亡。1显着,它们是创建三磷酸腺苷(ATP)的主要位置,腺苷三磷酸腺苷(ATP),包括所有生物的通用自由能载体,包括所有五个呼吸链络合物和所有三羧酸周期(TCA)酶。在细胞质和线粒体基质之间的代谢物交换对于执行这些代谢过程是必要的,这些代谢过程仅限于线粒体腔室并保留内部内稳态。电压依赖性阴离子通道允许微小的分子穿过外部线膜。然而,线粒体内膜(IMM)对分子和离子高度渗透,必须依靠特定的转运蛋白和通道来连接细胞质和线粒体的代谢。线粒体载体家族成员执行大部分运输步骤。2其他转运蛋白家族包括线粒体丙酮酸载体(MPC)。3 MPC是一种蛋白质复合物,存在于线粒体内膜中,并负责将丙酮酸从线粒体转运到线粒体基质中,其中丙酮酸转化为乙酰基氧乙烯酶A(乙酰辅酶A)。ace-tyl-coa进入TCA循环,并在其中进一步氧化。另外,线粒体中的丙酮酸也可以通过吡二酸酯羧化酶的羧化来参与糖异生,以产生草乙酸以补充TCA循环。7如上所述,除了被运输到线虫外,丙酮酸还可以通过细胞质中的乳酸脱氢酶(LDH)还原为乳酸。MPC是在1970年代4提出的,最初被称为BRP44L(脑蛋白44样)和BRP44(脑蛋白44)。它在2003年被鉴定在酵母中,并在2012年进一步鉴定在哺乳动物中。3,5,6 MPC是一个相对较小的杂物,由两个亚基组成,分别由12和14 kDa组成,分别为12和14 kDa。
抗体工程技术出现后,研究人员开始重组产生和产生抗体片段。开发了三个主要碎片,成为许多替代格式的基础。首先,重组Fab是酶消化产生的FAB的一种干净而定义的替代品。第二,单链变量片段(SCFV)是IgG的最小稳定且功能齐全的形式。它由可变的重域和可变光域组成,并在两者之间具有灵活的接头。最后,单个结构域抗体(DAB)缺乏轻链,代表大约15 kDa的最小结合域。单域抗体在骆驼和软骨鱼(例如鲨鱼)中发现,与传统的鼠和人类抗体相比,它们含有更长的CDR环。
雷帕霉素途径的哺乳动物靶标MTOR蛋白属于磷酸肌醇3-激酶(PI3K)家族及其信号通路是细胞代谢,增殖和分化,免疫系统调节和自噬机制的关键调节剂。3 MTOR蛋白与其他蛋白质结合,形成两种多蛋白络合物,即mTOR-complex 1和MTOR-COMPEMPERX 2,具有不同的组成和信号传导功能。如图1所述,mtor-complex 1对雷帕霉素敏感且对缺氧敏感,营养缺乏脱氧核糖核酸损伤。它由阳性调节剂组成,例如G蛋白β-亚基样蛋白和两个阴性调节剂Proline富含Akt蛋白40 kDa,以及含Dep域的MTOR相互作用蛋白。MTOR-COMPERX 2是一种对雷帕霉素不敏感的复合物,由m-tor,哺乳动物应激激活的蛋白激酶相互作用的雷帕霉素不敏感的伴侣组成,G蛋白β亚成蛋白和deptor。
番石榴的后衰减后,主要是由储存时间中的微生物物种引起的。因此,分离出可能导致番石榴后腐烂的真菌和细菌物种分离并评估低分子量(LMW)壳聚糖与纳米二氧化物(Nano Sio 2)的抗菌和抗真菌能力(LMW)壳聚糖结合使用。这项研究成功地隔离了四种真菌物种,即热孢子虫,cladosporium sphaerospermum,Aspergillus wentii,colletototrichum acutatum和三个细菌种类,不,无论是azotobacter sp。发现,有0.04%纳米SIO 2和1%低分子壳聚糖44.5 kDa的混合物能够以最高的抗菌区直径和生长真菌的最低直径进行测试。这项工作为延长番石榴的延长货架寿命的潜在化合物。