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纳米技术可以实现神经调节的新型方式
T7表达系统是确保严格控制和高级诱导表达的常见方法。然而，该系统只能在某些细菌菌株中起作用，其中T7 RNA聚合酶基因位于染色体中。在这项研究中，我们成功地引入了在LACUV5启动子控制的T7 RNA聚合酶基因的染色体副本中，以大肠杆菌BW25113。T7表达系统在名为BW25113-T7的突变株中有效工作。我们证明了这种突变菌株可以通过C5途径令人满意地产生5-氨基乙酸。最终研究旨在通过构建T7启动子变体库来增强该突变株中T7表达系统的可控性。这些努力提高了大肠杆菌BW25113-T7，成为未来代谢工程工作的实用主持人。
CRISPR/... 敲除 lncRNA XLOC_005950 的影响
摘要：癌细胞通过糖酵解利用葡萄糖维持肿瘤细胞增殖。然而，长链非编码RNA（lncRNA）对骨肉瘤（OS）细胞糖酵解的影响尚不清楚。本研究旨在探讨lncRNA XLOC_005950/hsa‑microRNA (miR)‑542‑3p/磷酸果糖激酶肌肉（PFKM）轴在OS进展中对葡萄糖代谢、细胞增殖和凋亡的调节作用。通过逆转录定量PCR分析检测OS组织和细胞中lncRNA XLOC_005950、hsa‑miR‑542‑3p和PFKM的表达。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除MG63细胞中的lncRNA XLOC_005950表达。通过Cell Counting Kit-8实验、流式细胞术、PFKM活性、葡萄糖和乳酸含量测定，探讨lncRNA XLOC_005950敲除和hsa-miR-542-3p过表达对OS细胞表型的影响。通过双荧光素酶报告基因检测，验证lncRNA XLOC_005950、hsa-miR-542-3p与PFKM的靶向关联。结果表明，lncRNA XLOC_005950在OS组织和细胞中的表达上调。功能实验表明，lncRNA XLOC_005950敲除降低了PFKM活性，降低了细胞内葡萄糖和乳酸含量，抑制了细胞增殖，增加了OS细胞的凋亡。此外，lncRNA XLOC_005950敲除
在哺乳动物细胞中的敲入和敲除CRISPR/CAS9编辑作者：Michael Hanna 1，Pietro de Camilli 1 1 Neurosc的部门
在哺乳动物细胞中的敲击和淘汰CRISPR/CAS9编辑作者：Michael Hanna 1，Pietro de Camilli 1 1 1 1神经科学和细胞生物学部门，霍华德·休斯医学研究所，霍华德·休斯医学研究所，在纽约州纽约市纽黑文，纽约州纽黑文的蜂窝神经科学，神经变性和维修，纽约州纽黑文，纽约市210年6月210日，纽约市，纽约州。雪佛兰·蔡斯（Chevy Chase），医学博士，20815摘要该方案是为了帮助使用与上述出版物DPI相关的CRISPR/CAS9产生基因组和基因组编辑的哺乳动物细胞系（手稿尚未提交）。所需的缓冲液排序缓冲液1X DPB 0.02％EDTA 0.2％FBS敲除哺乳动物细胞系
CRISPR/CAS13D介导的猪体细胞和单毒性胚胎中的有效KDM5B mRNA敲低
需要一种有效的mRNA敲低策略来探索细胞和胚胎中的基因功能，尤其是在早期胚胎发育过程中了解母体mRNA衰变的过程。cas13是一种新型的RNA靶向CRISPR效应蛋白，可以结合并切割互补的单链RNA，该RNA已用于小鼠和人类细胞中的mRNA敲低以及植物中的RNA病毒干扰。cas13尚未据报道用于猪。在当前的研究中，我们探讨了猪中CRISPR/ CAS13D介导的内源性RNA敲低的可行性。KDM5B是H3K4ME3的组蛋白去甲基酶，在转录水平下下调了50％，在猪成纤维细胞中，CRISPR/CAS13D在转录水平下被下调。敲低KDM5B诱导的H3K4ME3表达，并降低了H3K27ME3，H3K9ME3，H3K4AC，H4K8AC和H4K12AC的丰度。这些变化影响了细胞增殖和细胞周期。此外，将CRISPR/CAS13D系统稳定地整合到猪基因组中，导致CAS13D的连续表达和KDM5B的持续敲低。最后，在猪par植物发育胚胎中进一步验证了CAS13D的RNA靶向潜力。通过将cas13d mRNA和靶向KDM5B的GRNA的显微注射到猪卵母细胞中，KDM5B的表达被下调，H3K4ME3的丰度按预期增加，并且胚胎发育相关基因的表达被相应地更改。这些结果表明CRISPR/CAS13D为猪的时空转录操作提供了易于编程的平台。繁殖（2021）162 149–160
高功率微波用于淘汰可编程...
主要研究目标是减少无人机对我们生活的危害，以及极端组织、毒贩和有组织犯罪分子使用无人机造成的后果。越来越多的涉及改装无人机的事件证明了现有技术在阻止和消除错误无人机方面的弱点，例如手持枪式干扰器、训练有素的鹰、射频干扰器等。这项技术不太可能击落无人机，也无法阻止可编程无人机。本文旨在研究 HPM（高功率微波）的定向能量，利用电磁场强度能量来损坏无人机的结构或烧毁其 PCB 板电子设备。它继续分析使用高频微波功率立即关闭无人机的电子攻击。评估了高微波功率在不同距离和不同天气条件下干扰无人机的有效性。还包括对磁控管耦合系统的锥形喇叭天线的研究，其工作频率为 2.45 GHz。
通过供体的体内 - 线性化和DNA聚合酶θ/DNA-PK的瞬时抑制，在小鼠胚胎干细胞中有效双重敲门
（未通过同行评审认证）是作者/资助者。保留所有权利。未经许可就不允许重复使用。此预印本版的版权持有人于2021年5月30日发布。 https://doi.org/10.1101/2021.05.30.446338 doi：Biorxiv Preprint
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为了访问这些优化的基因组编辑方法，我们创建了Invitrogen™Truedesign™基因组编辑器，这是一种免费的在线工具，用于设计和订购基于CRISPR-Cas9的编辑。本申请说明描述了两种用例：（1）引入诱导多能干细胞（IPSC）（IPSC）和（2）用GFP标记β-肌动蛋白的LRRK2基因（G2019S）中的SNP变化。对于SNP变化，通过在线工具自动生成了单链寡核苷核苷酸（SSODN）供体的建议设计。对于融合蛋白，使用Invitrogen™TRUETAG™供体DNA试剂盒自动生成底漆建议，以自动生成双链供体DNA。供体DNA。此应用程序说明还描述了此转染过程的详细协议。一旦输送到细胞中，供体DNA将在不到一天的时间内将其集成到目标细胞的基因组中。
在人类原代 B 细胞中高效 CRISPR-Cas9 介导基因敲除，用于 Epstein-Barr 病毒感染的功能遗传学研究
基因编辑现在已成为所有原核和后生动物细胞的常规技术，但在不到十年前 CRISPR-Cas9 技术被引入哺乳动物细胞生物学领域时，它在免疫细胞中并未受到太多关注。这种多功能技术已成功应用于人类髓系细胞和 T 细胞等的基因修饰，但应用于人类原代 B 细胞的情况很少，且仅限于活化的 B 细胞。这一限制阻碍了对这种细胞类型的细胞活化、分化或细胞周期控制的结论性研究。我们报告了在原代静息人类 B 细胞中进行高效、简单和快速的基因组工程，使用 Cas9 核糖核蛋白复合物的核转染，然后在 CD40 配体饲养细胞上进行 EBV 感染或培养以驱动体外 B 细胞存活。我们提供了使用两个模型基因在静止人类 B 细胞中进行基因编辑的原理证明：CD46 和 CDKN2A。后者编码细胞周期调节因子 p16 INK4a
CRISPR/CAS9核糖核蛋白介导的HTERT-RPE1细胞中的敲除蛋白
图1。使用ssDNA或PCR产物作为HDR模板（a）上部的蛋白质标记的策略示例：据报道编码Centriolar远端附属物蛋白SCLT1的C-末端的基因组序列。带下划线的序列代表CrRNA识别位点，PAM序列为黄色，垂直虚线表示切割位点。鉴于距离内源性终止密码子（BOLD大写字母的TAA）距离为14 bp，插入位点被任意定位为距剪切位点1 bp的位置，即在SCLT1的密码子之间的最接近的交界处。在下部，密码子（上图）和相应的氨基酸性残基（下图）构成了插入物：蓝色大写字母是指可易加的链接器，然后是v5-tag（红色）和附加的外源终止密码子（黑色）。50 bp lha或rha = 50碱基对左同源臂或右同源臂。（b）使用PCR产物作为供体DNA生成具有荧光蛋白（FP）的蛋白质（您最喜欢的蛋白质，YFP）的C端标记的示意图。PCR模板由带有FP，2A元件和电阻盒（R）的标准质粒（左侧）组成。使用一对60mer引物进行PCR反应。在右侧代表了目标基因座（您最喜欢的基因，YFG）的编辑。
2021; 17（4）：1026-1040。 doi：10.7150/ijbs.55559通过CRISPR/CAS9系统
羊绒是一种罕见且专业的动物纤维，它在山羊外皮肤上生长。由于其产量低和柔软，轻巧和温暖的特性，其经济价值很高。在这里，我们试图通过同时提高其纤维长度和羊绒收益率来改善现有的羊绒山羊犬种。我们通过使用基因编辑技术在成纤维细胞生长因子5（FGF5）位点上敲击血管内皮生长因子（VEGF），然后研究其头发生长促进机制。我们表明，RS-1和NU7441的组合显着提高了CRISPR/CAS9介导的同源指导修复的效率，而不会影响胚胎裂解率或在不同阶段的胚胎百分比。此外，我们获得了一只羊绒山羊，该山羊将VEGF基因整合在FGF5地点，并改善了该基因编辑的山羊的羊绒收益率和纤维长度。通过下一代测序，我们发现VEGF的上调和FGF5的下调通过PI3K-AKT信号途径和细胞外基质基质 - 受体相互作用的细胞周期，增殖和血管张力影响。因此，基因编辑的羊绒山羊表现出令人印象深刻的羊绒性能。总的来说，在这项研究中，我们通过在FGF5站点整合VEGF来产生一个基因编辑的羊绒山羊，并提供了一种动物模型，以进行有关头发生长机制的后续研究。