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CRISPR/CAS9的基因组编辑工具箱，用于拟南芥
CRISPR/CAS9系统已成为一种强大的基因组工程工具，用于研究基因功能并改善植物特征。基因组编辑是通过Cas9核酸内切酶在特定的基因组序列上实现的，以产生由短导RNA（SGRNA）指导的双标准断裂（DSB）。DSB通过容易出错的非同源末端连接（NHEJ）或无错误的同源指导修复（HDR）路径来修复，分别导致基因突变或序列替换。这些细胞DSB修复途径可以被利用以敲除或替换基因。另外，胞质或腺嘌呤碱基编辑器（CBES或ABE）融合到催化死亡的Cas9（DCAS9）或Nickase Cas9（NCAS9）（NCAS9）时，也用于执行精确的基础编辑而无需生成DSB。在本章中，我们描述了通过使用基于CRISPR/CAS9的系统在拟南芥基因组中执行单个/多基因突变和精确基础编辑的详细程序。特别是，描述了转基因线的目标基因选择，SGRNA设计，矢量结构，转化和分析的步骤。该方案有可能适应在其他植物物种（例如水稻）中进行基因组编辑。
使 ipsc 衍生细胞疗法的设计成为可能...
并表征重组 MAD7 以用于我们 iPSC 基因编辑平台中的核糖核蛋白 (RNP)。我们的工艺产生的蛋白质在配制后在溶液中是均质和单体的。此外，通过生物物理和功能表征测量，蛋白质稳定性在 -8080 C 下保持 6 个月。重组产生的 MAD7 的活性在 iPSC 中多个基因座的敲除 (KO) 和同源定向修复 (HDR) 效率方面与 Cpf1 相当。我们已经生成并测试了针对基因组中不同位点的多个 gRNA，并证明 MAD7 不会引起任何结构异常，这通过正交遗传表征测定确定。数据表明，重组 MAD7 CRISPR 核酸酶可以有效表达、纯化和配制，从而能够将哺乳动物细胞稳健而精确地改造为核糖核蛋白 (RNP)。我们目前正在使用我们的 MAD7 优化工艺来生成 MAD7 RNP，以便对具有多个基因编辑的治疗性 iPSC 衍生的 NK 和 T 细胞候选产品进行基因工程改造。Hunter Hoffman、Jill M. Carton、Buddha Gurung、Justin Bianchini、Shelby Keating、Michael F. Naso、Luis Borges
议会关于可再生能源的议案 - 后续报告
1 目的/执行摘要 1.1 在 2024 年 9 月 30 日的理事会会议上，通过了一项动议，以塑造理事会向社区提供有关整个理事会地区规划的主要能源相关开发规划过程的信息的方式。 1.2 该动议分为多个部分，并已获得通过，但须进行财务评估。本报告包含有关实施该动议的计划以及为评估该动议的财务影响而开展的工作的信息。 1.3 虽然该决定已得到成员的批准，但应理解，官员实施该决定的能力将取决于资源的可用性，以满足预期的要求，以及预计将这些资源投入使用的时间表，特别是在对人员配备和其他业务领域产生连锁反应的情况下。 1.4 此外，报告明确指出，尽管高地议会做出了决定，但拟议的措施仍存在许多法律和程序问题。 1.5 根据动议条款，官员们必须向下一次理事会会议提交一份文件，以分享更多有关财务影响的细节并规划实施路径。财务影响估计为全年 278,000 英镑的额外未列入预算的费用，可能在 2024/25 年产生部分年度费用，这些费用的资金需要理事会考虑。
通过基因编辑验证功能等位基因，充分利用丰富的遗传资源进行作物改良
摘要：过去几十年来，分子技术的发展（例如高通量 DNA 标记基因分型）提供了更强大的植物育种方法，包括标记辅助选择和基因组选择。同时，以全基因组测序为首的对植物遗传学和基因组学的大量投资使人们对植物基因组中的基因和遗传途径有了更深入的了解。然而，正向遗传学方法（从表型开始绘制突变位点或 QTL，目的是克隆致病基因）与反向遗传学方法（从大规模序列数据开始，然后追溯基因功能）之间仍然存在差距。最近建立的基于 CRISPR-Cas 的高效基因编辑有望弥补这一差距，并提供一种快速方法来验证通过自然变异研究确定的基因和等位基因的功能。CRISPR-Cas 技术可用于敲除单个或多个基因、通过碱基编辑和主要编辑精确修改基因以及替换等位基因。此外，原生质体分离、植物体内转化和发育调控基因的使用等技术有望实现高通量基因编辑，从而加速作物改良。
拮抗瞬时受体电位黑素瘤素-2......
摘要。黑色素瘤仍然是最具侵袭性和破坏性的皮肤癌，需要开发新的治疗方法。本研究旨在确定拮抗瞬时受体电位黑素瘤素 2 (TRPM2) 离子通道对原发性人类恶性黑色素瘤细胞的影响。使用抗真菌剂克霉唑拮抗 TRPM2 导致细胞增殖减少，以及所有研究的黑色素瘤细胞系中细胞死亡率呈剂量依赖性增加。使用 TRPM2 敲低验证了 TRPM2 通道的靶向性，其中与克霉唑治疗相比，使用 TRPM2 小干扰 RNA 治疗导致所有黑色素瘤细胞系的细胞死亡率相似。在非癌性人类角质形成细胞中拮抗或敲低 TRPM2 后观察到对增殖和细胞死亡的最小影响。此外，在这些黑色素瘤细胞中探索了 TRPM2 的特征，结果表明，TRPM2 定位于质膜，作为非癌细胞中的非特异性离子通道，在所分析的所有人类黑色素瘤细胞系中均表现出核定位。对这些黑色素瘤细胞系的进一步表征证实，每种细胞系都表达一种或多种已确定的多药耐药性
2020；8：30-36。doi：10.7150/jgen.43928 研究论文利用 Cas13a 进行可编程 CRISPR 干扰，实现蚊子基因沉默
在 CRISPR-Cas 系统中，Cas13a 是一种 RNA 引导的 RNA 核酸酶，专门靶向单链 RNA。我们开发了一种 Cas13a 介导的 CRISPR 干扰工具，以靶向 mRNA 来实现蚊子的基因沉默。通过胸内注射将表达 Cas13a 的质粒递送给蚊子，递送后至少 10 天仍可检测到 Cas13a 转录本。使用 T7 RNA 聚合酶在体外合成靶向特异性 crRNA。Cas13a 质粒和靶向 crRNA 可以通过胸内注射一起递送，或者可以先提供 Cas13a 构建体，然后在适当的时候提供靶向 crRNA。在两种蚊子中测试了该机制。在冈比亚按蚊中，卵黄蛋白基因被 Cas13a/Vg-crRNA 沉默，同时伴有产卵量显著下降。在埃及伊蚊中，COPI 基因的 α 和 δ 亚基被 Cas13a/crRNA 沉默，导致死亡和中肠脆弱，重现了之前报道的表型。当提供目标 crRNA 混合物时，可以同时实现基因共沉默。研究中未观察到非目标转录本的可检测的附带切割。除了 dsRNA 或 siRNA 介导的 RNA 干扰外，可编程的 CRISPR 干扰方法提供了一种在蚊子中敲除基因的替代方法。
“自给自足村社区”的神话
由于远古印度村庄的时代一直试图保持孤立状态，而没有任何以满足其需求的外部机构。每个村庄都试图生产其需求所需的东西。它不仅为其使用，而且用于使用城市人士。它具有一个非常合理的Panchayat系统，该系统解决了所有争议，因此除非被迫这样做，否则乡村人民不喜欢敲门法院的门。同样，村民也有自己的牧师在敬拜方面帮助他们。家庭负责人被认为是朋友，向导和哲学家。也有用于教育乡村寺庙的孩子的安排。村庄的长者也没有提及任何外部权威，也解决了所有社会问题。由于当时村庄的需求和要求非常有限，因此，每个村庄都试图是自主和自给自足的。这就是有人说每个印度人本身就是一个自治共和国的原因。对自治的渴望仍然存在于我们的村庄中，人们仍然不喜欢任何外部干扰。Panchayati Raj机构的民主权力下放和增长的政策是维持我们村庄的自主权的尝试。
使用 TALE-BE 进行高效的多工具/多重基因工程
TALE 碱基编辑器是最近添加到基因组编辑工具箱中的。这些分子工具是转录激活因子样效应结构域 (TALE)、分裂 DddA 脱氨酶半体和尿嘧啶糖基化酶抑制剂 (UGI) 的融合，它们具有直接编辑双链 DNA 的独特能力，将胞嘧啶 (C) 转化为胸腺嘧啶 (T)。为了剖析 TALE-BE 的编辑规则，我们将数十个靶向核基因组位点的 TALE-BE 的筛选与基于将 TALE-BE 靶位点集合精确敲入细胞基因组的中/高通量策略相结合。后一种方法使我们能够深入了解 cellulo 中的编辑规则，同时排除不同基因组位点之间的表观遗传和微环境差异等混杂因素。利用获得的知识，我们设计了靶向 CD52 的 TALE-BE，并实现了非常高的基因敲除频率（高达 80% 的表型 CD52 敲除）。我们进一步证明 TALE-BE 仅产生微不足道的插入/缺失和副产物。最后，我们将两种分子工具（TALE-BE 和 TALEN）结合起来进行多重基因组工程，产生高水平的双基因敲除（~75%），而不会在两个靶位点之间产生易位。
出版
斯科特（Scott）史密斯（Smith and Huntsman）和亨斯曼（Huntsman）到达他的公寓时感到沮丧和幻觉。史密斯和亨斯曼敲打并确定自己的身份后，斯科特向军官大喊“摔倒”，声称他的房子里有些人。军官没有闯入门，因为他们没有听到公寓内的任何人。相反，他们继续敲门并命令斯科特来到门口。第一次敲门后约两分钟，史密斯告诉亨斯曼：“这是一个421a，”使用部门代码表明他认为斯科特患有精神病。亨斯曼随后在门口打电话：“先生，您是否被诊断出患有任何精神疾病？”斯科特（Scott）没有来到门口之后，史密斯（Smith）要求派遣打电话给斯科特（Scott）要求他来门，再次指出斯科特（Scott）似乎患有精神病。史密斯然后对亨斯曼说：“我不是去那里。太粗略了。”亨斯曼同意说：“那个家伙的古怪。”亨斯曼凝视着斯科特的窗户，问史密斯是否可以看到“斯科特的眼睛里的疯狂表情”。他们在斯科特的公寓里看不到其他人
关税对供应链的影响，MANTS 回顾，
闪亮的绿叶，锥形，是理想的隐私树篱。没错，本月我们将长期关注侧柏。在我们的封面故事中，迈克尔·迪尔深入探讨了侧柏的世界。当然，如果要谈论侧柏，您必须从“绿巨人”开始。在这片土地上，没有其他植物能像它一样高大。但正如您将在我们的封面故事中发现的那样，侧柏远不止这种传奇植物。迪尔博士的评价和意见从第 12 页开始。内维尔·斯坦带着他的第二篇《大西洋彼岸》专栏回来了。本月，内维尔将分享英国种植者如何应对英国对园艺使用泥炭的禁令。西欧逐步淘汰泥炭是美国容器植物生产商一直饶有兴趣但又忐忑不安地关注的一个话题。去年夏天，我们发表了 James Altland 撰写的题为“为泥炭辩护”的文章，旨在利用科学来权衡继续使用泥炭作为栽培介质基质的利弊。您可以在这里阅读该文章：bit.ly/defensepeat。请阅读第 8 页 Neville 的看法。随着拟议的关税和与我们最亲密的贸易盟友的贸易协定的重组，物流行业在全球货物运输方面正进入一个不确定的时代。种植者也未能幸免。虽然大多数成品植物在国内销售和运输，但许多投入和供应都来自其他地方。《温室管理》编辑 Patrick A. Coleman 采访了供应链管理专业委员会首席执行官 Mark Baxa，讨论关税、运输延误等潜在影响。在第 20 页，阅读他对绿色产业如何保持灵活和控制成本的看法。最后，《苗圃管理》的编辑和销售人员今年悉数出席了 MANTS。看看您右边的列表并选一个名字。他或她可能在那里。我总是喜欢与多年来结识的业内朋友相聚，MANTS 上的人们通常都兴致勃勃。这是新的一年的开始，大多数人都感到精神焕发、充满活力。MANTS 是一个如此大型的展览，我们尽最大努力尽可能多地参观。对我来说，亮点之一是听到 Will Radler 讲述他如何培育出最初的 Knock Out 玫瑰的故事。我们的官方展览回顾从第 28 页开始。一如既往，感谢您的阅读。