病毒-宿主共同进化常常会促使病毒逃逸免疫。然而,植物抗病毒的自然变异是否富含已知赋予植物必需抗病毒防御能力的 RNA 干扰 (RNAi) 途径基因仍不清楚。本文,我们报告了两项全基因组关联研究筛选,以探究野生采集的拟南芥种质对地方性黄瓜花叶病毒 (CMV) 的定量抗性的自然变异。我们证明,在两次筛选中与抗性显着相关的排名最高的基因可调控哥伦比亚-0 生态型中的抗病毒 RNAi。一个对应于减少休眠 5 (RDO5) 的基因通过促进病毒衍生的小干扰 RNA (vsiRNA) 的扩增来增强抗性。有趣的是,第二个基因被指定为抗病毒 RNAi 调节器 1 (VIR1),它抑制抗病毒 RNAi,因此通过 CRISPR/Cas9 编辑使其基因失活可增强 vsiRNA 的产生和 CMV 抗性。我们的研究结果确定了抗病毒 RNAi 防御的正向和负向调节器,它们可能在病毒-宿主共同进化中发挥重要作用。
液体冷和咳嗽配方在存在或不存在Carbopol®聚合物的情况下评估了商用液体冷和咳嗽配方的体外粘膜粘附特性。Carbopol®聚合物包含水平有所不同,以确定随着时间的推移对制剂保留的影响。含有Carbopol®聚合物的配方的保留率明显高于不含Carbopol®聚合物的制剂(图5)。此外,以较高的聚合物浓度实现了更高的保留率。粘膜粘附增强含有Carbopol®聚合物聚乙烯醇的膜在药物配方中以膜以前已知,而Carbopol®聚合物表现出粘粘性特性。膜的粘膜受到交联的Carbopol®聚合物度的影响,含有Carbopol®971pNF聚合物的膜确保了更长的保留。膜的厚度影响了预期的粘膜粘附,较厚的膜显示出更好的保留率。在类似厚度的情况下,与基准PVA膜相比,含有Carbopol®971pNF聚合物的PVA膜显示出更长的保留率(图6)。90分钟后,PVA膜几乎被完全洗净,而含有PVA膜的Carbopol®聚合物即使在240分钟也保留了一定程度(图7)。
* 通讯作者:mlong@uchicago.edu (ML);jbergelson@uchicago.edu (JB);huangyuan@mail.kib.ac.cn (YH)。† 资深作者 ‡ 这些作者贡献相同 (YH、JC)。ML、JB 和 YH 设计了这项研究。YH 撰写了论文初稿。YH 和 JC 进行了所有实验,包括表型观察和分析、突变体生成、鉴定、表达、转录组和基因组测序以及进化分析。CD 和 SD 参与了群体遗传分析。CF 提供了植物材料。CF、YO、DL、SX 和 EM 修改了稿件。ML 和 JB 指导了这项研究,构思并监督了写作。根据作者须知 (https://academic.oup.com/plcell) 中所述的政策,负责分发与本文所述研究结果相关的材料的作者是:Manyuan Long (mlong@uchicago.edu)。
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几十年来,农杆菌介导的转化一直是生成转基因植物的首选工具。在此过程中,携带转基因的 T-DNA 从细菌转移到植物细胞中,在那里它通过聚合酶θ (Pol h ) 介导的末端连接 (TMEJ) 随机整合到基因组中。通过同源重组 (HR) 将 T-DNA 靶向到特定基因组位点也是可能的,但此类基因靶向 (GT) 事件发生的频率很低,并且几乎总是伴随着随机整合事件。另一个复杂因素是,T-DNA 和目标位点重组的产物可能不仅映射到目标位点 (真正的 GT),还可能映射到基因组中的随机位置 (异位 GT)。在本研究中,我们通过使用突变了 TEBICHI 基因(该基因编码 Pol h )的拟南芥,研究了 TMEJ 功能如何影响植物中 GT 的生物学。在 TMEJ 功能强大的植物中,我们主要发现 GT 事件伴随着随机的 T-DNA 整合,而在 teb 突变体背景下获得的 GT 事件缺乏额外的 T-DNA 拷贝,证实了 Pol h 在 T-DNA 整合中的重要作用。Pol h 缺乏也会阻止异位 GT 事件,这表明导致此结果的事件序列需要 TMEJ。我们的研究结果提供了可用于制定在农作物中获得高质量 GT 事件的策略的见解。
tumefaciens介导的转化一直是生成转基因植物的首选工具。在此过程中,携带转基因的T-DNA从细菌转移到植物细胞,在该细菌中,它通过聚合酶theta(Pol H)介导的末端连接(TMEJ)随机地整合到基因组中。通过同源重组(HR)将T-DNA靶向特定的基因组基因座(HR),但这种基因靶向(GT)事件以低频发生,几乎总是伴随着随机整合事件。另一个复杂性是,T-DNA和目标基因座之间的重组的乘积不仅可以映射到目标基因座(TRUE GT),还可以映射到基因组中的随机位置(异位GT)。在这项研究中,我们通过使用用于Tebichi基因的Tebichi Gene突变的拟南芥,研究了TMEJ功能如何影响植物中GT的生物学,该基因编码为polH。虽然在TMEJ-Profientient植物中,我们主要发现GT事件伴随着随机T-DNA整合,而在TEB突变体背景中获得的GT事件缺乏其他T-DNA拷贝,从而证实了POL H在T-DNA整合中的基本作用。pol H的表现也阻止了异位GT事件,这表明导致此结果的事件顺序需要TMEJ。我们的发现提供了见解,可用于制定策略以获得农作物中的高质量GT事件。
摘要 — 研究了 T-DNA 插入拟南芥 At3g58450 基因(该基因编码与发芽相关的通用应激蛋白 (GRUSP))的 3'-UTR 区域的影响。研究发现,在长日照条件下,该突变会延迟 grusp-115 转基因株系的开花转变,这是因为与野生型植物 (Col-0) 相比,内源生物活性赤霉素 GA1 和 GA3 的含量降低。外源 GA 加速了这两个株系的开花,但没有改变 Col-0 和 grusp-115 之间开花开始时间的差异。除了 GA 代谢的变化之外,grusp-115 显然在诱导开花信号的实现方面存在干扰。开花整合因子 FLOWERING LOCUS T ( FT ) 和开花抑制因子 FLOWERING LOCUS C ( FLC ) 的基因表达结果证实了这一点,它们是关键的开花调节因子,作用相反。我们假设,由于 FLC 表达上调,FT 表达水平较低也会影响 grusp-115 表型的形成。
米兰的圣心天主教大学; SDA Bocconi公司财务硕士硕士前总监;竞争部门13/b4的国家科学资格委员会已经是国家科学委员会成员(金融中介机构和公司财务经济);中国欧洲国际商学院(CEIBS)上海(RPC)已经是学术委员会的成员;公司金融和房地产地区SDA Bocconi的前董事;访问国际学校和大学(纽约大学;伦敦商学院;斯德哥尔摩经济学院;伊姆德·洛桑(Imd Lausanne),萨格勒布大学,美国保加利亚美国大学;黎巴嫩美国大学); ADIMF会员(教师协会中介经济学金融市场);普通学术艾迪亚(意大利商业经济学学院)。
摘要:在拟南芥中,含环的E3泛素连接酶高表达的高响应基因1(HOS1)是冷信号传导的主要调节剂。在这项研究中,进行了第一个外显子中HOS1基因的CRISPR/CAS9介导的靶向诱变。DNA测序表明,由HOS1的基因组编辑引入的固定插入导致出现过早的停止密码子,从而破坏了开放的阅读框架。将获得的HOS1 CAS9突变植物与SALK T-DNA插入突变体(HOS1-3线)进行了比较,就其对非生物胁迫的耐受性,二级代谢产物的积累和参与这些过程的基因表达水平的积累而言。在暴露于冷应激后,在HOS1-3和HOS1 Cas9植物中都观察到了冷响应基因的耐受性和表达。HOS1突变会导致转化细胞中植物甲状腺素合成的变化。葡萄糖醇(GSL)的含量被1.5次下调,而转基因植物中氟乙醇糖苷的上调为1.2至4.2倍。还改变了拟南芥中次级代谢的相应MYB和BHLH转录因子的转录物丰度。我们的数据表明,HOS1调节的下游信号传导与植物甲壳虫生物合成之间存在关系。