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Cre/lox 调节条件性救援和失活......
摘要 在空间和时间上调节基因活性的能力对于研究发育过程中以及胚胎后过程和疾病模型中的细胞类型特异性基因功能至关重要。Cre/lox 系统已广泛用于对斑马鱼的基因功能进行细胞和组织特异性条件分析。然而，缺乏简单有效的分离稳定的 Cre/lox 调控斑马鱼等位基因的方法。在这里，我们应用了我们的 GeneWeld CRISPR-Cas9 靶向整合策略来生成可提供强大条件失活和拯救的 floxed 等位基因。通用靶向载体 UFlip 具有用于克隆位于 floxed 2A-mRFP 基因陷阱两侧的短同源臂的位点，被整合到 rbbp4 和 rb1 的内含子中。 rbbp4 off 和 rb1 off 整合等位基因导致强烈的 mRFP 表达、内源基因表达减少 99% 以上，并重现已知的 indel 功能丧失表型。Cre 的引入导致 floxed 盒的稳定倒位、mRFP 表达的丧失和表型挽救。rbbp4 on 和 rb1 on 整合等位基因与功能丧失突变相结合不会引起表型。Cre 的添加通过盒的稳定倒位、基因捕获和 mRFP 表达以及预期的突变表型导致条件性失活。神经祖细胞 Cre 驱动器用于条件性失活和表型拯救，以展示如何在特定细胞群中使用这种方法。这些结果共同验证了一种在斑马鱼中有效分离 Cre/lox 反应条件等位基因的简化方法。我们的策略为生成基因嵌合体提供了一种新的工具包，并代表了斑马鱼遗传学的重大进步。
使用笼子乙基雌二醇和诱导的Cre/Lox系统迈向眼睛的光介导的基因疗法
摘要：越来越多地，正在用病毒介导的基因疗法治疗视网膜病理。能够以光特定针对视网膜病理区域的病毒转基因表达，我们确定了视网膜组织的体内光活化基因表达para-digm。基于诱导型Cre/Lox系统，我们发现乙基雌二醇是他莫昔芬的合适替代品，因为乙基雌二醇更适合通过光敏保护化合物（即“笼子”）修饰。在计算机结合研究中支持了突变的人雌二醇受体的乙基甲基二醇作为配体的鉴定，该研究表明笼中乙基雌二醇的结合降低。用依赖性的TDTOMATO报告基因转基因注入双转基因GFAP-CREERT2小鼠的眼睛中，然后用450 nm的光照射。光活化显着增加了视网膜TDTOMATO表达。因此，我们展示了为眼睛开发靶向的，光介导的基因治疗的第一步。
基于液氧/生物甲烷半重复使用发射器的航天发射服务参数生命周期评估
摘要 ArianeWorks 是由法国国家空间研究中心和阿丽亚娜集团发起的创新平台，它加速了 Themis 的开发，Themis 是一种由液氧和生物甲烷推动的低成本可重复使用的火箭级演示器，为 2030 年的欧洲发射系列铺平了道路。根据其股东的生态设计愿景，ArianeWorks 在 Themis 计划中启动了生态设计战略的实施。在此背景下，本研究介绍了基于半可重复使用发射器的发射服务的生命周期评估，该发射器源自 Themis 并在圭亚那航天中心运行，该评估发生在 Themis 的早期设计阶段。该分析意味着开发一个特定的框架来解释下级的可重复使用性，需要使用经过调整的功能单元、在生命周期中引入新的阶段以及特定的参数化来描述其复杂性。本文接着进行了敏感性分析，以确定影响的主要驱动因素并支持设计权衡分析，然后估计最大可信缓解潜力。然后，概述了一种评估可重复使用性可能带来的环境效益的方法，并为所研究的发射服务提供了初步结果。影响评估结果证实，结构和推进剂的生产对阿丽亚娜火箭的生命周期影响最大。由于延长寿命阶段会产生额外影响，因此低级火箭的回收和翻新也发挥着重要作用，但也使一些影响减少成为可能，这些影响可以通过明确的惯例来隔离。跨大西洋运输阶段或测试和加油期间的推进剂消耗会造成不可忽略的影响，这些影响可以通过采用节俭的方法或技术创新来减轻。总体而言，该研究强调，与基线相比，对气候变化和资源枯竭的总影响可能减少约 30-80%。然而，尽管人们普遍认为可重复使用性可以减少生命周期影响，但研究表明，实际情况要复杂得多，因为从发射器的环境性能比较中得出的结论取决于惯例、市场参数、运营方案和环境影响类别。对于所研究的发射服务，结果表明，虽然可重复使用性可能会减少对资源枯竭的影响，但它可能会增加对气候变化的影响。此外，可重复使用性的任何环境效益都可能被这项技术所促进的全球太空活动的增长完全抵消，从而导致适得其反的反弹效应。本研究强调，由于采用生态设计方法，影响可能会减少，这将减轻这种影响。关键词：环境影响、生命周期评估、生态设计、发射器、可重复使用性、方法论 首字母缩略词/缩写
DOI: 10.29261/pakvetj/2021.053 利用 CRISPR/Cas9 和 Cre/Lox 构建针对伪狂犬病毒的三基因删除活疫苗候选物
当前市场上销售的伪狂犬病毒（PRV）疫苗的免疫保护效果逐渐降低，并未能对新型PRV变种提供完全保护。本研究利用CRISPR/Cas9和Cre/LoxP基因编辑系统及低熔点琼脂糖纯化法，同时敲除三种主要毒力基因（gE/gI和TK），成功构建了三基因删除活毒株rZDΔTK-gE-gI。接种rZDΔTK-gE-gI PRV候选疫苗的3周龄仔猪在感染PRV强毒株后均存活，且未出现任何临床症状，而所有未接种疫苗的仔猪均出现PRV呼吸道和神经系统症状，感染后7天内死亡率100％。 rZDΔTK-gE-gI候选疫苗在接种仔猪后诱导出高水平的抗gB抗体，其免疫保护效果优于经典毒株Bartha-K61。因此，三基因缺失活PRV候选疫苗有望控制目前由PRV变异株引起的伪狂犬病疫情。
2023 年 5 月 15 日 | COMSTAC
• 液氧/甲烷是一种液体推进剂组合，具有多项优势：运载火箭可以更快地获得高度和速度。这是因为液氧/甲烷比其他推进剂具有更高的“比冲”。发射前运载火箭中会留有更多燃料。与精炼石油-1 (RP-1) 和液氢 (LH) 不同，液氧和甲烷可以在相似的温度下以液体形式存在，并混合以增加其爆炸性。燃烧更清洁。液氧/甲烷也比其他一些液体燃烧更清洁
crispr/cas9介导的黄豌豆中的脂氧合酶基因编辑导致脂肪酸和脂肪酸的主要变化
结果与讨论：通过野生型（WT）和TGP PSLOX2突变型线的DNA测序确定了稳定转基因PEA系（TGP）的成功CRISPR/CAS9介导的LOX基因编辑（TGP）。还评估了这些线路的LOX活性，PUFA水平和VOC。Compared to WT peas, the TGP lines showed a signi fi cant reduction (p < 0.05) in LOX activity and in the concentration of key VOCs, including hexanal, 2-hexenal, heptanal, (E)-2-heptenal, (E,E)-2,4- heptadienal, 1-octen-3-ol, octanal, (E)-2-octenal （E，E）-2,4-非二烯和Furan-2-苯基。在TGP浮动中，两个必需的PUFAS，亚油酸和二酚酸的含量是LOX的已知底物，表明CRISPRPR介导的基因编辑的效率在最小化其氧化和PUFAS及其产品的进一步调节方面具有效率。vocs的集合
AIAA-2016-5280-LOx-甲烷-GAT.pdf
作为全球探索路线图 (GER) 的一部分，国际空间探索协调小组 (ISECG) 组建了两个技术差距评估小组，以评估迄今为止尚未在国际层面开展的学科领域。参与机构包括 ASI、CNES、DLR、ESA、JAXA 和 NASA。因此，ISECG 技术工作组 (TWG) 根据 GER 技术发展图 (GTDM) 中反映的关键技术需求推荐了两个学科领域：防尘和液氧/甲烷推进。液氧/甲烷推进系统通过使用现场推进剂生产显著减少火星上升阶段的着陆质量，从而改善生命支持、动力和推进的通用流体，从而实现多样化冗余，消除腐蚀性和有毒推进剂，从而改善表面操作和可重复使用性，并提高推进系统的性能，从而为未来人类火星任务提供支持。国际团队的目标和目的是确定必须弥补哪些技术差距，才能将液氧/甲烷用于地月、月球和火星任务中的载人探索任务。重点放在近期月球着陆器应用上，并可扩展到火星。每个机构都提供了迄今为止大量液氧/甲烷推进系统开发的状态，以及他们对尚存技术差距的意见。然后讨论这些差距，这些差距现在是合作的机会。