番茄 ( Solanum lycopersicum ) 是一种全球性种植的作物,具有巨大的经济价值。外果皮决定了番茄果实的外观,并在收获前和收获后保护其免受各种生物和非生物挑战。然而,目前还没有番茄外果皮特异性启动子,这阻碍了基于外果皮的基因工程。在这里,我们通过 RNA 测序和逆转录-定量 PCR 分析发现番茄基因 SlPR10 ( PATHOGENESIS RELATED 10 ) 在外果皮中大量表达。由 2087-bp SlPR10 启动子 ( pSlPR10 ) 表达的荧光报告基因主要在 Ailsa Craig 和 Micro-Tom 品种的转基因番茄植株的外果皮中检测到。该启动子进一步用于番茄中 SlANT1 和 SlMYB31 的转基因表达,它们分别是花青素和角质层蜡质生物合成的主要调节因子。pSlPR10 驱动的 SlANT1 表达导致花青素在外果皮中积累,赋予果实抗灰霉病和延长保质期,而 SlMYB31 表达导致果皮蜡质增厚,延缓水分流失并延长果实保质期。有趣的是,pSlPR10 和另外两个较弱的番茄外果皮优先启动子在转基因拟南芥 (Arabidopsis thaliana) 植物的子房中表现出一致的表达特异性,这不仅为番茄外果皮和拟南芥子房之间的进化同源性提供了线索,而且为研究拟南芥子房生物学提供了有用的启动子。总的来说,这项研究报告了一种理想的启动子,能够在番茄外果皮和拟南芥雌蕊中实现靶基因表达,并证明了其在番茄果实品质遗传改良中的实用性。
*通讯作者:abraham.ogofureabraham@live.com摘要番茄(Solanum lycopersicum),是索拉纳科家族中最重要的蔬菜农作物之一,它在世界各地种植以食品和其他经济目的。在本研究中研究了不同产品品牌的罐头番茄罐头的微生物变质。观察到总有氧和厌氧计数小于10个3个细胞,这些细胞在可接受的极限之内。罐装产品中的两种没有微生物计数,而其他罐头的计数从2 x 10 1到5 x 10 1不等,用于有氧开放的番茄的有氧计数,1 x 10 1至2 x 10 1用于厌氧计数。然而,在所有六种研究中,损坏的番茄罐装产品的有氧运动范围为4.2 x 10 4到9.1 x 10 4。厌氧罐装番茄的厌氧计数范围为2.5 x 10 4到6.8 x 10 4。从变质罐头番茄样品中获得的孤立生物显示出存在芽孢杆菌,金黄色葡萄球菌,乳酸链球菌,乳酸菌,假单胞菌,sp。,梭状芽孢杆菌,梭状芽孢杆菌,梭状芽孢杆菌,coagulus coagulans,saccharomyces sp。,念珠菌sp。,粘液sp。,尼日尔曲霉和青霉。这些生物与在贝宁市销售的罐头番茄产品的破坏有关。开放后立即消耗这些产品时,它们是安全的,因为新鲜产品的微生物负载在可接受的监管标准之内。关键字:西红柿罐头,监管标准,有氧计数,厌氧计数
番茄(Solanum lycopersicum L.)是热带和亚热带地区的重要作物,但它非常容易受到生物胁迫,尤其是由植物疫霉引起的晚疫病。这种真菌疾病会导致突然爆发,导致严重的作物损失。化学控制仍然是管理这种爆发的重要策略。这项研究评估了以建议剂量喷洒的20种不同杀菌剂的有效性,用于控制晚期番茄和改善番茄的生产。易感番茄品种纳吉纳(Nagina)在体内随机完整块设计(RCBD)下种植。基于在番茄植物上产生的疾病感染的百分比和统计分析结果,结果发现,氯化脂蛋白(13.62%),Cabrio Top(14.91%),Curzate M(15.38%),Ridomil Gold(16.77%),Jalva(17.13%),Jalva(17.13%),Nanok(17.13%),Nanok(19.2%),以及34%(199.2%),和34 and and and,and and and and and and and and and and and and(and)针对p的杀菌剂。İnfestans。其他杀菌剂,例如共同仿制(21.1%),Flumax(21.54%),Alliette(23.81%),得分(24.35%),成功40 WSP(25.13%)和旋律应得的(28.82%)也表现出有效的结果。然而,杀菌剂如拉力赛(32.23%),cytrol(34.28%),刺激性(37.46%),evito(37.52%),什叶州(43.63%),TOPAS(45.83%)和倾斜度(48.59%)在疾病中的有效性较小。这些发现突出了使用氯糖蛋白,Cabrio Top,Curzate M,Ridomil Gold,Jalva,Nanok和Antracol的重要性,是高效杀真菌剂来对抗晚期疫病。这种靶向方法可确保在最有效地预防疾病暴发,减少杀菌剂的总体使用和成本时,可以应用它们。
图1。UMI-DSBSEQ定量单分子测序DSB和修复产品在番茄中的三个靶标。a)时间课的收集:叶肉细胞原生质体是从2-3周大的M82 Solanum Lycopersicum的幼苗中分离出来的。重复的样品在72小时内为72个时间点中的每一个中的每一个制备了200,000个原生质体。CRISPR RNP由PEG介导的转换引入。在提取RNP引入和DNA后,在0、6、12、24、36、48和72小时将样品冷冻。b)UMI-DSBSEQ目标设计:特定于目标序列的引物,与SGRNA目标序列两侧的限制酶位点结合,以创建完整分子(WT或Indel)的可用端,以连接适配器。c)UMI-DSB文库制备:从时间探索收集中提取DNA,其中包含WT(1),未经修复的DSB(2)和包含Indels(3)的完整分子,在体外受到限制,限制了确定目标切割位点的限制酶。通过填充和a添加的最终修复后,由P7 Illumina流量细胞序列和包含i7索引和9BP唯一分子标识符(UMIS)组成的Y形适配器(UMIS)与未经修复的DSB和受限端相连。通过连接介导的PCR进行的靶标特异性扩增,其中一个引物与适配器序列相同,并包含P7 Illumina Tail(橙色)和一个针对靶序列(蓝色)的引物(橙色),带有P5 Illumina Tail(红色)。这会导致SPCAS9切位点和底漆之间的DSB的单端扩增。红色X表示DSB的未捕获端。
近年来CRISPR - CAS9系统的开发使真核基因组编辑,特别是用于反向遗传学的基因敲除,这是一个简单有效的任务。该系统通过与之基础对的编程单个指定RNA(SGRNA)有关,将其引导到基因组目标位点,随后导致特定于位点特定的修改。然而,真核基因组中的许多基因家族表现出部分重叠的功能,因此,一个基因的敲除可能被另一个基因的功能隐藏。在这种情况下,CRISPR – Cas9系统的特异性降低,这可能会导致与SGRNA不相同的基因组位点的修改,可以同时敲除多个同源基因的同时敲除。我们介绍了Crispys,这是一种用于SGRNA最佳设计的算法,该算法可能针对给定基因家族的多个成员。crispys首先将输入序列中的所有潜在目标簇列为层次树结构,该结构指定了它们之间的相似性。然后,通过在需要的地方嵌入不匹配的情况下,在树的内部节点中提出了SGRNA,以使编辑诱导目标的效率最大化。我们建议使用几种设计最佳单个SGRNA的方法,以及一种计算实验平台允许多个以上的情况下的最佳SGRNA集合的方法。后者可以选择说明基因家庭成员之间的同源关系。我们进一步表明,通过在Solanum lycopersicum基因组中的所有基因家族中,通过在计算机检查中,CRISPYS优于基于比对的技术。©2018 Elsevier Ltd.保留所有权利。
02.30 pm - 02.40 pm索马·蒙达尔·戈莱(Soma Mondal Ghorai)教授(印度德里印度学院):嵌合内olysins的抗高速球菌和抗生物膜的活性分析:维特罗(Vitro印度德里):超级细菌的兴起:噬菌体可以提供防御线吗?02.50 pm – 03.00 pm Dr Jyoti Taneja (Daulat Ram College, University of Delhi, India ) : Identification and characterization of Potential Vaccine Candidate using hypothetical proteins from Mycoplasma genitalium : A Reverse Vaccinology Based Approach 03.00 pm – 03.10 pm Dr Raunak Dhanker (GD Goenka University, Gurugram, India) : Importance of Ciliates在浮游动物饮食中03.10 pm - 03.20 pm阿米特·加尔格教授(Acharya Narendra Dev学院,印度德里大学):03.20 pm - 03.30 pm Sarita Kumar教授(Acharya Narendra Dev College,Delhi of Delhi of Delhi of India of India) Engineering for Enhancing Abiotic Stress Tolerance: A Sustainable Pathway for Future Agriculture 03.40 pm – 03.50 pm Dr Geetika Kalra (Acharya Narendra Dev College, University of Delhi, India) : Impact of Exogenous Application of Antioxidants on ROS Signaling in Germinating Seeds of Solanum lycopersicum L. 03.50 pm – 04.00 pm Dr Manoj Kumar Singh (University of阿拉哈巴德(Allahabad),印度Prayagraj):探索从火龙果植物中分离出的内生细菌的潜力04.00 pm - 04.20 pm茶
使用 CRISPR/Cas 系统的基因组编辑 (GE) 彻底改变了植物诱变。然而,传统的转基因介导的 GE 方法存在局限性,因为通过组织培养生成表达 Cas9/单向导 RNA (sgRNA) 模块的稳定转基因系需要花费很长时间。病毒诱导的基因组编辑 (VIGE) 系统已成功用于模型植物,例如拟南芥和烟草属。在本研究中,我们开发了两种用于茄科植物的 VIGE 方法。首先,我们使用烟草脆裂病毒 (TRV) 载体将 sgRNA 递送到表达 Cas9 的转基因番茄 (Solanum lycopersicum) 品种 Micro-Tom 品系中。其次,我们设计了一种基于马铃薯病毒 X (PVX) 载体的非转基因 GE 方法来递送 Cas9 和 sgRNA。我们设计并克隆了靶向八氢番茄红素去饱和酶的 sgRNA,并将其放入 VIGE 载体中,并确定了 VIGE 的最佳条件。我们通过病毒载体接种后对靶基因的深度测序来评估 VIGE 效率,检测到 TRV 和 PVX 介导的 GE 的突变率分别为 40.3% 和 36.5%。为了提高编辑效率,我们采用了 37 ◦ C 热处理,这分别使 TRV 和 PVX 介导的 VIGE 的编辑效率提高了 33% 至 46% 和 56% 至 76%。为了获得编辑植物,我们对接种的子叶进行了组织培养,获得了成功的编辑事件。我们还证明 PVX 介导的 GE 可应用于其他茄科作物,例如马铃薯 (Solanum tuberosum) 和茄子 (Solanum melongena)。这些简单且高效的 VIGE 方法在茄科作物中生成基因组编辑植物方面具有巨大潜力。
在过去的七十年中,G-氨基丁酸(GABA)引起了科学家在植物,动物和微生物中的普遍性以及其生理意义的极大关注,因为它是参与多种途径和过程的信号分子的生理意义。最近,食品和制药行业还显示出对GABA的兴趣显着增加,因为它对人类健康的潜在潜在好处以及消费者对促进健康功能化合物的需求,从而释放了很多GABA富含GABA的产品。然而,许多农作物物种在其可食用的部分中积累了可观的GABA水平,并可以帮助满足GABA每日摄入的摄入量以促进积极的健康影响。因此,植物育种者致力于用改善GABA含量的精英品种繁殖。在这方面,番茄(溶胶番茄)是全球生产和消费最多的蔬菜,也是一种含水果的型号,它因其积累了显着的GABA水平而受到了很多考虑。尽管已经实施了许多不同的策略,从经典的杂交到诱发诱变,但新的植物育种技术(NPBT)已经达到了最佳的GABA积累,从而导致红色成熟的番茄果实以及对GABA代谢和基因功能的启示。在这篇综述中,我们总结,分析和比较了所有有助于番茄GABA育种的研究,并就最新的NPBT进行进一步的讨论和建议,这些NPBT可以使这一过程达到更高的精度和效率。本文档还提供了指南,其他农作物的研究人员可能会利用番茄在更有效的GABA育种计划中取得的进展。
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CRISPR/CAS能够同时瞄准多个基因座(多重)的能力是改变植物育种的游戏规则。多路复用不仅会加速性格金字塔,而且还可以揭示功能冗余所隐藏的特征。此外,多路复用增强了基于DCAS的可编程基因表达,并实现了类似级联的基因调节。然而,包含串联阵列导向RNA(GRNA)的多重构建体的设计和组装需要无疤的克隆,并且由于存在重复序列而仍然很麻烦,从而阻碍了更广泛的使用。在这里,我们介绍了软件辅助克隆平台Goldenbraid(GB)的全面扩展,其中除了其多基因克隆软件之外,我们将新的工具集成了新的工具,用于基于IIS的易于且六个串联阵容的GRNA,使用Cas9和cas12a,使用GRNA-trees-trees-trees-crrna-crrrna-crrrna和crrrnna crrrnna crrrnna crrrnna crrrna carrna-crrrna crrrna cas12a。作为新工具的应力测试,我们组装并用于农杆菌介导的稳定转化A 17 cas9-grnas构造,靶向烟草中的Squamosa-promoter结合蛋白样(SPL)基因家族的子集。14个选定的基因是miR156的靶标,因此在少年到成年和营养至生殖相变中可能起重要作用。使用17个grnas构建体,我们生成了一组无Cas9的SPL编辑的T 1植物,该植物携带了多达9个双重突变,并显示出叶少年和更多的分支。GB4.0 Genome Edition纳入了新的基于Web的工具和随附的DNA零件集合,为植物基因组工程提供了多合一的开放平台。使用荧光素酶lyanum lycopersicum mtb促进剂或Agrobacterium tumefaciens Nopaline benthase prospermers inice inice inice Amamaine inice Amamaine in NiceAtient在NICAPASE中,NICAPASE PROSSITER in NICAPASE in NICAPASE in NICAPASE in NICAPASE in NICAPASE in NICAPASE in NICASIEN中,NICAIN中的使用单个和多重GRNA的GB组装DCAS9和基于DCAS12A的CRISPR/CAS激活剂和阻遏物使用单一和多路复用GRNA的功能。使用单个和多重GRNA的GB组装DCAS9和基于DCAS12A的CRISPR/CAS激活剂和阻遏物使用单一和多路复用GRNA的功能。