由于融合蛋白NUP96-MEGFP的稳定表达而选择了该特定的克隆,并选择了数字195,并保留了U-2 OS系的典型特征,包括固体细胞骨架结构,这对于与癌细胞和转移的迁移有关的研究至关重要。使用CRISPR技术可确保基因的精确版本,从而最大程度地减少可能威胁实验结果完整性的脱靶效应。这意味着U-2 OS-Crispr-NUP96-MEGFP 195克隆在高分辨率成像技术和详细的细胞结构中特别有用,有助于细胞生物学,癌症研究和核转运现象的先进研究。
亚培养从相邻的细胞中去除旧培养基,并将其洗净,而PBS不含钙和镁。对于T25烧瓶,使用3-5 mL PBS,对于T75烧瓶5-10 ml。然后,使用1-2 mL对T25和2.5 ml平底物完全覆盖Accutase细胞,用于T75烧瓶。让细胞在室温下持续8-10分钟,将它们分开。孵育后,将细胞与10 mL培养基轻轻混合以再次悬挂,然后以300xg的速度将其提起3分钟。拒绝上清液,再次将细胞挂在新鲜的培养基中,然后将其转移到已经包含新鲜培养基的新瓶中。
亚培养从Adher细胞中去除旧培养基,并在没有钙和镁的情况下洗净PBS。用于T25烧瓶使用3-5 ml PBS和T75 5-10 ml烧瓶。然后,使用1-2 mL对T25和2.5 mL烧瓶完全覆盖细胞,用于T75烧瓶。让细胞在室温下孵育8-10分钟以分开。孵育后,将细胞与10 ml培养基再次悬浮,然后在300xg洒3分钟。丢弃上清液,将细胞溶解在新鲜培养基中,然后将其转移到已经包含新培养基的新瓶中。
亚培养消除了粘附细胞的古老介质,并用缺乏钙和镁的PBS洗涤它们。 div>对于T25烧瓶,使用3-5毫升PBS,对于T75烧瓶,使用5-10毫升。 div>然后用1-2 mL对T25和2.5 mL烧瓶进行T75烧瓶的作用覆盖细胞。 div>让细胞在室温下孵育8-10分钟以释放它们。 div>孵化后,将细胞与10 ml培养基轻轻混合,以重悬于它们,然后离心至300xg 300倍。 div>丢弃上清液,将细胞重悬于凉爽的介质中,然后将其转移到已经包含新鲜手段的新瓶中。 div>
亚培养物从粘附细胞中去除旧培养基,并用缺乏钙和镁的PBS洗涤它们。对于T25烧瓶,使用3-5毫升PBS,对于T75烧瓶,使用5-10毫升。然后,使用1-2 mL对T25烧瓶完全覆盖细胞,T75烧瓶2.5 mL。让细胞在室温下孵育8-10分钟以将其分离。孵育后,将细胞与10 ml培养基轻轻混合以重悬于它们,然后以300xg离心3分钟。丢弃上清液,将细胞重悬于新鲜培养基中,然后将其转移到已经包含新鲜培养基的新瓶中。
亚培养消除了粘附细胞的古老介质,并用缺乏钙和镁的PBS洗涤它们。 div>对于T25烧瓶,使用3-5毫升PBS,对于T75烧瓶,使用5-10毫升。 div>然后用1-2 mL对T25和2.5 mL烧瓶进行T75烧瓶的作用覆盖细胞。 div>让细胞在室温下孵育8-10分钟以释放它们。 div>孵化后,将细胞与10 ml培养基轻轻混合,以重悬于它们,然后离心至300xg 300倍。 div>丢弃上清液,将细胞重悬于凉爽的介质中,然后将其转移到已经包含新鲜手段的新瓶中。 div>