图 2:使用荧光 Cas9 mRNA 富集基因敲除 A. 对与 mKate2 Cas9 mRNA 和阳性对照 PPIB crRNA:tracrRNA 共电穿孔并根据 mKate2 荧光进行分选的 K-562 细胞群进行错配检测分析。B. 在次优和最优脂质转染条件下,EGFP Cas9 mRNA 分选的 U2OS 细胞群的 FACS 数据。C. 对 EGFP Cas9 mRNA 分选的 U2OS 细胞群进行错配检测分析
重组 RSV 病毒的组装和拯救 先前描述了重组 A2-line19F 的拯救,该病毒在 A2 骨架中表达 mKate2 和 RSV 菌株 line19 融合蛋白 [ 16 ]。为了生成在 A2-line19F 骨架内表达修饰的 G 蛋白的重组病毒,从 GenScript 获得了合成的 G 核苷酸序列,其两侧是 SacI-SacII 限制性位点,用于将相应的 G 基因克隆到 pSynkRSV-A2-line19F 细菌人工染色体中。得到的菌株 A2-line19F-G155 缺失了 G 蛋白粘蛋白结构域,而菌株 A2-line19F-G155S 缺失了 G 蛋白粘蛋白结构域和跨膜结构域,因此它只表达缺乏粘蛋白的分泌性 G 蛋白(图 1 和图 2)。为了回收重组病毒,将 BSR-T7/5 细胞与 RSV 反基因组
