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社论：哺乳动物大脑中GABA能抑制回路的组装，可塑性和功能的细胞和分子机制
通过GABA能中间神经元（INS）抑制法规在正常大脑中的复杂神经计算中起着至关重要的作用，其畸形和功能错误会导致多种脑部疾病（Del Pino等，2018; Frye等，2016; kepecs and 2016; Kepecs and 2014; kepecs and fishell，2014; theanno; theang; theang; ealig; al ang e e eT; Al。，2016）。在过去的二十年中，在理解GABA能抑制回路的发展，可塑性，功能和病理相关性方面取得了显着进展。尤其是单细胞OMICS，遗传靶向，体内成像，功能操纵和行为分析的最新技术进步，我们在亚型中的知识已经爆炸。文章的研究主题，包括七篇原始研究论文和两项评论，其主题是“哺乳动物大脑中GABA能抑制回路的组装，可塑性和功能的主题”主题，突显了我们要走多远，以及我们需要走的地方。这些报告全面讨论了有关GABA能抑制系统的主题，从细胞类型的规范，突触组件和功能多样性到其在健康和疾病中的作用。总体目标是解开无数的INS将自己编织到功能电路中，这是理解皮质抑制的力量和脆弱性的核心。The challenging but essential tasks for dissecting the inhibitory system is to disentangle intricate inhibitory circuits consisting of diverse GABAergic IN subtypes ( Bandler et al., 2017 ; Hu et al., 2017 ; Lodato and Arlotta, 2015 ; Miyoshi, 2019 ; Pelkey et al., 2017 ).Machold和Rudy回顾了由转录组学和发育起源定义的亚型皮质和海马的新兴观点，并突出了一种用于靶向亚型特定的遗传工具包，以及每种方法固有的技术考虑因素。
工程自动核解哺乳动物悬架宿主细胞系，以降低无血清慢病毒过程流中的DNA杂质水平
摘要：我们用转基因编码四环素诱导的金黄色葡萄球菌核酸酶，并结合了易位信号。我们调整了未修饰和核酸酶工程的细胞系在无血清培养基中的悬浮液中生长，分别产生HEK293TS和NUPRO-2S细胞系。瞬时转染产生的1.19×10 6慢病毒转染来自Nupro-2S细胞的每毫升（TU/mL），HEK293TS细胞的1.45×10 6 Tu/ml。DNA梯子消失揭示了以四环素诱导的方式由NUPRO-2S细胞引起的中等居民核酸酶活性。DNA杂质水平在NUPRO-2S和HEK293TS细胞引起的慢病毒材料中无法通过SYBR安全琼脂糖凝胶染色检测到。通过PICOGREEN试剂进行直接测量表明，在HEK293TS细胞的慢病毒材料中，DNA以636 ng/ml的形式存在，在Nupro-2S细胞的慢病毒材料中，杂质水平降低了89％至70 ng/ml。通过使用50个单位/mL苯并酶处理HEK293TS衍生的慢病毒材料，这种还原与23 ng/ml相当。关键词：慢病毒，哺乳动物细胞，生物普应，基因治疗，核酸酶
利用设计 PPR 蛋白构建多功能、可编程的 RNA 结合蛋白及其在哺乳动物细胞剪接控制中的应用
摘要：RNA 在基因表达中发挥着许多重要作用，并参与各种人类疾病。尽管基因组编辑技术已经建立，但与基于核苷酸的 RNA 操作技术（如 siRNA 和 RNA 靶向 CRISPR/Cas）相比，操纵特定细胞 RNA 分子的序列特异性 RNA 结合蛋白的工程化尚不成熟。在这里，我们展示了一种使用含五肽重复 (PPR) 基序的蛋白质的多功能 RNA 操作技术。首先，我们开发了一种基于 PPR 的设计序列特异性 RNA 结合蛋白的快速构建和评估方法。该系统已经能够稳定构建数十种针对长 18 nt RNA 的功能性设计 PPR 蛋白，该蛋白针对哺乳动物转录组中的单个特定 RNA。此外，设计 PPR 蛋白的细胞功能首次通过控制报告基因或内源性 CHK1 mRNA 的可变剪接得到证明。我们的研究结果展示了一种使用 PPR 蛋白的多功能蛋白质 RNA 操作技术，该技术有助于理解未知的 RNA 功能和创建基因回路，并有可能用于未来的治疗。
噬菌体与细菌和哺乳动物之间的三方相互作用托管杰里米·巴尔生物科学学院，莫纳什大学
噬菌体与细菌和哺乳动物之间的三方相互作用托管杰里米·J·巴尔（Jeremy J.，当我们开始在其哺乳动物或真核宿主的更广泛背景下考虑噬菌体时，这种经典的定义是限制的。在这种三方情况下，噬菌体可能直接相互作用并影响其细菌宿主，但它们可以直接结合，进入和刺激哺乳动物宿主。这些相互作用在很大程度上没有探索，并且在这些三方环境中发现潜水机制，反馈回路和共生物具有巨大的潜力。线性关系拾取了任何本科生的微生物学教科书，您会发现“噬菌体”的定义类似于“能够仅在细菌细胞中感染和复制的病毒”。当考虑噬菌体（或简称简称其细菌宿主）的各种相互作用时，此描述适用。这些相互作用涵盖了共生的多样性，包括严格的寄生虫到互助。虽然在技术上是该定义是在考虑在三方共生的更广泛背景下考虑噬菌体时的限制。这些相互作用可以以类似于细菌宿主的方式与真核细胞结合，但不注射其在这些三方系统中，噬菌体确实可以直接与细菌宿主相互作用，但它们也通过各种机制与哺乳动物或真核宿主相互作用（图1）。
在哺乳动物细胞中的敲入和敲除CRISPR/CAS9编辑作者：Michael Hanna 1，Pietro de Camilli 1 1 Neurosc的部门
在哺乳动物细胞中的敲击和淘汰CRISPR/CAS9编辑作者：Michael Hanna 1，Pietro de Camilli 1 1 1 1神经科学和细胞生物学部门，霍华德·休斯医学研究所，霍华德·休斯医学研究所，在纽约州纽约市纽黑文，纽约州纽黑文的蜂窝神经科学，神经变性和维修，纽约州纽黑文，纽约市210年6月210日，纽约市，纽约州。雪佛兰·蔡斯（Chevy Chase），医学博士，20815摘要该方案是为了帮助使用与上述出版物DPI相关的CRISPR/CAS9产生基因组和基因组编辑的哺乳动物细胞系（手稿尚未提交）。所需的缓冲液排序缓冲液1X DPB 0.02％EDTA 0.2％FBS敲除哺乳动物细胞系
![arxiv：2406.12109v1 [CS.CL] 2024年6月17日](/simg/a\a0852110e08f2258b8ed3e33aa83098394b2b43a.webp)
arxiv：2406.12109v1 [CS.CL] 2024年6月17日
1弗里伊大学柏林，化学与生物化学研究所，蒂埃拉利（Thielallee）63，14195德国柏林2.美国密歇根州底特律5当前隶属关系：堪萨斯大学堪萨斯大学劳伦斯大学药物学系6美国密歇根州立大学，密歇根州立大学，密歇根州立大学妇产科和生殖生物学系，美国密歇根州密歇根州，美国密西根州，美国7.这些作者7同等贡献：用CRISPR-CAS9进行蛋白质标记可以研究其本机环境中蛋白质功能的研究，但受到低同源指导修复（HDR）效率的限制，导致速率低。我们使用含有抗生素耐药性盒的HDR供体质粒提出了一条详细的管道，用于快速选择基因编辑的细胞。我们的协议简化了人类细胞中的n-或c-末端标记，可以在单个克隆步骤中启用HDR供体质粒制备。
项目研究科学家职位的公告-I ...
• Experience in mammalian cell culturing, maintenance and handling, UV/Vis and fluorescent spectroscopy, histology, immunohistochemistry, fluorescent microscopy, molecular biology techniques including agarose gel electrophoresis, western blotting, flow cytometry, RT-PCR, and related techniques - A proven record of scientific publications (as first author) applying the above said methods in在信誉良好的期刊中的博士/博士研究是必须的。
遗传学 利用 dCas9 控制的 CRISPR/Cas3 在哺乳动物细胞和小鼠中产生精确的大片段缺失
目前，Cas9 和 Cas12a 系统被广泛用于基因组编辑，但它们精确产生大片段染色体缺失的能力有限。I-E 型 CRISPR 介导广泛和单向的 DNA 降解，但迄今为止，控制 Cas3 介导的 DNA 缺失的大小已被证明是难以捉摸的。在这里，我们证明了 Cas9 的内切酶失活 (dCas9) 可以精确控制哺乳动物细胞中 Cas3 介导的大片段缺失。此外，我们分别报告了使用 CRISPR/Cas3 和 dCas9 控制的 CRISPR/Cas3 在小鼠中消除 Y 染色体和精确保留 Sry 基因。总之，dCas9 控制的 CRISPR/Cas3 介导的精确大片段缺失为通过染色体消除建立动物模型提供了一种方法。该方法也有望成为治疗涉及额外染色体的片段突变或人类非整倍体疾病的潜在治疗策略。
技术概述 - 使用Nanobind HT套件的PACBIO长阅读测序的自动高通量HMW DNA提取
纳米生HT CBB试剂盒（102-762-700; 96 rxn）•最多可用于200μl人/哺乳动物血液，非哺乳动物动物血液1，培养的细胞和细菌•预期的HMW DNA产量：血液和培养的哺乳动物细胞和2-10μg的3-15μg
II（组 - IIA服务）A部分 - 一般研究（学位...
Non-chordate, chordate, classification and relationship of various phyla up to subclasses, symmetry, parasitic adaptation, metamorphosis in insect and its hormonal regulation, mollusc, pisces, amphibian, reptilian, aves, mammalian, ecology, biosphere, concept of ecosystem, population characteristics, population dynamics, ethology, social organization in insects, evolution, theories生命的起源，生理学，特别提及哺乳动物。印度野生动植物，林业，造林，森林昆虫学，野生动植物行为，野生动物管理技术，野生动植物人口普查技术，人类野生动物冲突，野生动植物的保健，野生动植物保护，野生野生动物保护，野生动物保护中的现代概念，野生动物保护，野生动物管理和立法生物学，环境和环境。