ATP 对几乎所有细胞功能都很重要,包括肌肉收缩、蛋白质合成(细胞由 DNA 制造蛋白质的过程)和细胞分裂。细胞呼吸:线粒体在细胞呼吸(分解食物并以 ATP 的形式释放能量)中发挥着核心作用。细胞死亡的调节:线粒体参与调节细胞凋亡(一种细胞死亡),这对于维持健康的组织和器官很重要。线粒体 DNA (mtDNA):与大多数其他细胞器不同,线粒体有自己的 DNA,称为 mtDNA。
巨噬细胞中线粒体生物能的受损可能会驱动高炎性细胞因子反应1-6,但是是否也可能是由遗传的mtDNA突变引起的。在这里,我们使用一种多摩变方法来解决这个问题,该方法将超分辨率成像和代谢分析整合到来自丙氨酸7的线粒体trNA中异质质突变(M.5019a> g)的线粒体疾病的小鼠模型中的巨噬细胞。这些M.5019a> G巨噬细胞在呼吸链复合物中表现出缺陷,并且由于中骨内部翻译减少而导致氧化磷酸化(OXPHOS)。以适应这种代谢应激,线粒体融合,还原性谷氨酰胺代谢和有氧糖酵解均增加。在炎症激活后,I型干扰素(IFN-I)释放得到增强,而在M.5019a> G巨噬细胞中限制了促炎性细胞因子和黄磷脂的产生。最后,使用M.5019a> G小鼠的体内内毒素性模型显示IFN-I水平和疾病行为升高。总而言之,我们的研究确定了响应致病性mtDNA突变的先天免疫信号传导的意外失衡,对MTDNA疾病患者的病理发展具有重要意义。8。
与细胞核中的DNA相反,线粒体DNA没有广泛的DNA修复机制。由于缺乏DNA修复机制,线粒体DNA非常容易受到氧化应激诱导的DNA损伤的影响。线粒体将尝试通过调整线粒体DNA的副本数量来弥补这种损害,这反映在mtDNA含量的变化中。线粒体功能可以通过定量mtDNA含量来确定,并且已经与衰老和疾病机制的各种生物学过程有关。
掺假或伪造食品引起了公众对清真问题的担忧。许多与食品有关的问题,例如肉丸,香肠和咸牛肉,都使用猪肉来伪造。这项研究旨在确定一种直接的聚合酶链反应(DPCR)技术,用于在肉丸,香肠和咸牛肉等加工肉类产品中检测到猪肉DNA检测,并在短时间内使用特定的引物,ND4和D-loop以低成本,以低成本。该研究使用了一种直接的PCR技术,其在样品上的裂解过程的孵育时间和温度方面有变化。从裂解结果获得的DNA浓度,新鲜肉类和加工肉类产品的孵育时间和温度的变化为66.17-469.23 ng/µl,新鲜和加工肉类产品中DNA的纯度为1.70-25.25。ND4底漆对使用Direct PCR在处理后的肉类产品中对DNA扩增更敏感。使用牛肉写在包装上的肉丸,香肠和咸牛肉产品未发现任何混合或添加猪肉。直接PCR可以在加工肉类产品(例如肉丸,香肠和咸牛肉)中检测猪肉DNA。
背景:线粒体DNA(mtDNA)是一种促炎性损伤相关的分子模式分子,可能是MS炎症和疾病活性的早期指标。自体造血干细胞移植(AHSCT)是MS的有效治疗方法,但其对脑脊液(CSF)的MTDNA水平的影响仍未开发。目标:验证MS患者中CSF MTDNA浓度升高并评估AHSCT对mtDNA浓度的影响。方法:多重液滴数字PCR(DDPCR)用于定量182 CSF样品中的mtDNA和核DNA。这些样品是从48名MS患者(在AHSCT前后的48例)中收集的,在年度随访中以及32个健康对照中收集。结果:MS患者的CSF CCF-MTDNA水平较高,与多个临床和分析因子相关,并在干预AHSCT后进行了归一化。在AHSCT前一年,观察到AHSCT之前的AHSCT之前的差异。结论:我们的发现表明,MS患者的CSF MTDNA水平升高,这与疾病活性相关并在AHSCT之后正常化。这些结果将mtDNA定位为监测炎症活性和对MS治疗的反应的潜在生物标志物。
1 沙特阿拉伯王国阿卜杜拉国王科技大学 (KAUST) 生物科学项目、生物与环境科学与工程部,Thuwal 23955-6900,2 沙特阿拉伯王国阿卜杜拉国王科技大学 (KAUST) 生物工程项目、生物与环境科学与工程部,Thuwal 23955-6900,3 广州医科大学第三附属医院妇产科,广东省产科重大疾病重点实验室,510150 广州,中国,4 北京基因组学高级创新中心 (ICG),生物医学前沿创新中心 (BIOPIC),生命科学学院、化学学院、工程学院,北京大学清华生命科学中心,中国,5 Altos Labs,加利福尼亚州圣地亚哥 92121,美国,6 生殖医学中心,产科北京大学第三医院妇产科,北京 100191,7 深圳湾实验室细胞分析研究所,深圳,8 北京大学第三医院干细胞研究中心,北京 100191
摘要 长期以来,人们一直认为线粒体基因组 (mtDNA) 中体细胞突变的积累是衰老过程中线粒体和组织功能障碍的可能机制。由于检测低频突变的能力有限,因此无法彻底表征与年龄相关的 mtDNA 体细胞突变。在这里,我们对一群老年小鼠的 8 种组织进行了双重测序,检测到了 >89,000 个独立的体细胞 mtDNA 突变,并显示在衰老过程中,所有受检组织的组织特异性突变均显著增加,这与线粒体含量和组织功能无关。G → A/C → T 替换是所有组织中的主要突变类型,表明复制错误和/或胞苷脱氨,并且随着年龄的增长而增加,而 G → T/C → A 替换是第二常见的突变类型,表明氧化损伤,但无论组织如何,都不会随着年龄的增长而增加。我们还表明,线粒体DNA突变的克隆扩增随年龄增长而变化,这种变化与组织和突变类型有关。出乎意料的是,与氧化损伤相关的突变很少在任何组织中形成克隆,并且在用埃拉米普利肽或烟酰胺单核苷酸治疗的老年小鼠的心脏和肾脏中显著减少。因此,氧化损伤相关突变随年龄增长而缺乏积累表明氧化病变或含有氧化损伤的线粒体DNA基因组的终生动态清除。
Sciencell的绝对大鼠线粒体DNA拷贝数定量QPCR测定试剂盒(ARMQ)旨在直接比较样品的平均mtDNA拷贝数。大鼠mtDNA底漆集识别并放大了大鼠mtDNA上最保守的区域之一,并且不会放大核基因组DNA上的任何脱靶序列。单复制参考(SCR)引物集识别并放大了大鼠染色体17的100 bp长区域,并用作数据归一化的参考。具有已知mtDNA拷贝数的参考基因组DNA样品是计算目标样品的mtDNA拷贝数的参考。精心设计的底漆可确保:(i)值得信赖的量化效率高; (ii)没有非特异性扩增。通过QPCR验证了每个底漆集,并通过熔融曲线分析和凝胶电泳进行了扩增特异性,并通过模板系列稀释来验证。2倍Goldnstart Taqgreen QPCR Master Mix(CAT#MB6018A-1)是SYBR®基于绿色染料的QPCR主混合物,具有“热启动”属性。它包含单个管中的SYBR®绿色,DNTP,TAQ DNA聚合酶和惰性金色载荷指示器。通过Sciencell独特的化学化学TAQ DNA聚合酶实现的“热启动”特性提供了对引物二聚体形成的最大抑制作用。高级缓冲仪公式提供了较高的特异性和效率,并具有较宽的线性动态范围。惰性金色加载指示器允许在QPCR板或试管中更好地可视化和跟踪样品加载。
ScienCell 绝对大鼠线粒体 DNA 拷贝数定量 qPCR 检测试剂盒 (ARMQ) 旨在直接比较样本的平均 mtDNA 拷贝数。大鼠 mtDNA 引物组可识别并扩增大鼠 mtDNA 上最保守的区域之一,并且不会扩增核基因组 DNA 上的任何脱靶序列。单拷贝参考 (SCR) 引物组可识别并扩增大鼠 17 号染色体上 100 bp 长的区域,并作为数据标准化的参考。已知 mtDNA 拷贝数的参考基因组 DNA 样本可作为计算目标样本 mtDNA 拷贝数的参考。精心设计的引物确保:(i) 高效,实现可靠的定量;(ii) 无非特异性扩增。每个引物组都已通过 qPCR 验证,包括熔解曲线分析和凝胶电泳,以确保扩增特异性,并通过模板连续稀释来验证扩增效率。 2X GoldNStart TaqGreen qPCR Master Mix(目录号:MB6018a-1)是一种基于 SYBR ® Green 染料的 qPCR Master Mix,具有“热启动”特性。它在单个试管中包含 SYBR ® Green、dNTP、Taq DNA 聚合酶和惰性金色上样指示剂。通过 ScienCell 独特的化学修饰 Taq DNA 聚合酶实现的“热启动”特性可最大程度地抑制引物二聚体的形成。先进的缓冲液配方具有出色的特异性和效率,线性动态范围宽。惰性金色上样指示剂可更好地可视化和跟踪 qPCR 板或试管中的样品上样情况。
ScienCell 绝对大鼠线粒体 DNA 拷贝数定量 qPCR 检测试剂盒 (ARMQ) 旨在直接比较样本的平均 mtDNA 拷贝数。大鼠 mtDNA 引物组可识别并扩增大鼠 mtDNA 上最保守的区域之一,并且不会扩增核基因组 DNA 上的任何脱靶序列。单拷贝参考 (SCR) 引物组可识别并扩增大鼠 17 号染色体上 100 bp 长的区域,并作为数据标准化的参考。已知 mtDNA 拷贝数的参考基因组 DNA 样本可作为计算目标样本 mtDNA 拷贝数的参考。精心设计的引物确保:(i) 高效,实现可靠的定量;(ii) 无非特异性扩增。每个引物组都已通过 qPCR 验证,包括熔解曲线分析和凝胶电泳,以确保扩增特异性,并通过模板连续稀释来验证扩增效率。 2X GoldNStart TaqGreen qPCR Master Mix(目录号:MB6018a-1)是一种基于 SYBR ® Green 染料的 qPCR Master Mix,具有“热启动”特性。它在单个试管中包含 SYBR ® Green、dNTP、Taq DNA 聚合酶和惰性金色上样指示剂。通过 ScienCell 独特的化学修饰 Taq DNA 聚合酶实现的“热启动”特性可最大程度地抑制引物二聚体的形成。先进的缓冲液配方具有出色的特异性和效率,线性动态范围宽。惰性金色上样指示剂可更好地可视化和跟踪 qPCR 板或试管中的样品上样情况。