最常见的,全球接受的工具,用于衡量产品水平的全球变暖潜力以及其他环境影响是环境生命周期评估(LCAS)。LCA提供一组全面的影响类别。本指南涉及“气候变化”生命周期影响类别。它指定了从最常见的镍产品的生产过程中量化和传达GHG排放的原理,需求和方法,以及其产品和前体的摇篮到岩层的碳足迹(例如,来自矿石中的镍矿物,镍浓缩物中的镍浓缩物中的镍型矿物质中的矿物质矿物质,镍含量,镍的矿物质中的镍含量,镍含量,镍制成,尼克矿物质,尼克矿物质,尼克型矿石矿物质,这些矿物质是尼克式的尼克矿物质,这些尼克矿物质是尼克的尼克和尼克矿物质,这些尼克矿物质是尼克的尼克矿物质,这些矿石是尼克的矿物质,这些矿物质是在尼克的矿石中的矿石矿床。以及硅铁矿和镍生铁的生产)。
范围元素中的评估范围在附录A中列出,并指示已确定的NRM*子元素,并将包括在建筑物的上层建筑LCA的范围中。纳入范围内的子元素。
使用脉冲电沉积法制造纯镍和纳米复合镍-SI 3 N 4涂层。制造过程的初始条件是当电流密度为4 a.dm -2,占空比为50%,脉冲频率为10 Hz。原子力显微镜(AFM)用于执行评估每个涂层表面的任务。该实验的目标是通过增加每个参数,然后将结果与被认为是基线的条件进行比较,从而更好地了解情况。由于已经进行了观察结果,似乎平均正方形和根平均平均平均平均粗糙度高于其纯镍构成的纳米复合镍涂层的平均粗糙度。平均间距和波浪数量数据表明,在表面上存在偏爱的成核位点的任何位置都增加了。无论位置如何,情况就是这种情况。这些发现得到了以下事实的支持:两个指标都表现出向上的趋势。
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是由最近提出的镍3 ni 2 o 7交替交替的单层三层堆叠结构的动机,我们使用从头开始和随机相近似技术全面研究了该系统。我们的分析揭示了这种新颖的LA 3 Ni 2 O 7结构与其他Ruddlesden-Popper镍超导体(例如类似的电荷转移差距值和E G轨道的轨道选择性行为)之间的相似性。压力主要增加了ni g波段的带宽,这表明这些E G状态的巡回特性提高了。通过将细胞体积比0从0.9更改为1.10,我们发现La 3 Ni 2 O 7中的双层结构总是比单层三层堆叠LA 3 Ni 2 O 7具有低的能量。此外,我们观察到从三层到单层sublattices的“自我兴奋剂”效应(与整个结构的每个位置的平均每个位置的1.5电子相比,相比之下),通过总体电子掺杂,这种效果将增强。此外,我们发现了一个限制在单层的d x 2 -y 2波配对状态。由于单层之间的有效耦合非常弱,因此由于中间的非耐受性三层,这表明该结构中的超导过渡温度t c应远低于双层结构中。
由穆哈马德·尤纳斯(Muhammad Yunus)领导的一个凯塔克(Caretaker)政府的组成标志着孟加拉国历史上的关键时刻。在这个关键时刻,对新政府的期望是巨大的。目睹了数十年的政治动荡和民主价值观的侵蚀,该国人民渴望恢复真正的民主党。人们普遍渴望看到民主摆脱困扰多年的权力的腐败和滥用。这不仅是对变革的渴望,而且是对政府透明,负责和真正代表人民意志的更美好未来的深厚希望。过去,该国的民主通常比现实要多。民主治理的承诺经常被那些利用自己的立场来促进自己的利益而不是国家的人削弱。结果,民主已经扭曲,武力和胁迫被伪装成民主话语。这导致了人民之间的广泛幻灭,他们看到自己的希望一次又一次地被未能兑现承诺兑现的领导人破灭。谢赫·哈纳娜(Sheikh Ha-Sina)的辞职和随后的政治动荡只增加了民众的不确定性和焦虑。没有
抽象的简介和目标。UV-C带中的紫外线被称为杀菌辐射,广泛用于灭菌设备和无菌环境的创造。该研究的目的是评估在UV-C辐射消毒设备上沉积在具有各种纹理上的微生物中失活的有效性。材料和方法。在金属,塑料和玻璃表面上沉积的五种微生物(3种细菌,病毒和真菌),并通过低压汞灯和紫外线发射二极管(LED)(LED)发射的UV-C光照射,从0.5 m,1 m,1 m,1 m,1 m,1 m,1 m,1 m,1 m,1 m,1 m,1 m,可在20米的敞口上均可使用20米。结果和结论。两个测试的UV-C源均在微生物的失活中有效。但是,LED发射极在这方面比汞灯更有效。微生物的存活率取决于UV-C剂量,其条件是与UV-C源的距离为0.5 m最高,最低为1.5 m。对于测试的微生物,在玻璃和塑料表面上通常可见UV-C照射后的最高存活率。应在所有材料类型(从中制造技术设备的要素并可能被特定活动污染的材料类型)中考虑此观察结果对于保持适当水平的卫生水平并避免微生物污染的不必要和不受控制的传播至关重要。
摘要 Prime editor 在疾病建模和再生医学方面具有巨大潜力,包括针对肌肉萎缩症杜氏肌营养不良症 (DMD) 的研究。然而,Prime 编辑系统的庞大规模和多组分性质带来了巨大的生产和交付问题。本文,我们报告将优化的全长 Prime 编辑构建体包装在腺病毒载体颗粒 (AdVP) 中,可以在人类成肌细胞(即成肌细胞和间充质干细胞)中安装精确的 DMD 编辑(分别高达 80% 和 64%)。AdVP 转导确定了优化的 Prime 编辑试剂,这些试剂能够恢复约 14% 患者基因型的 DMD 阅读框架,并恢复未选择的 DMD 肌细胞群中的肌营养不良蛋白合成和肌营养不良蛋白-β-肌营养不良聚糖连接。 AdVP 同样适用于纠正 DMD iPSC 衍生的心肌细胞,并通过靶向外显子 51 缺失提供针对 DMD 修复的双引物编辑器。此外,通过利用不依赖细胞周期的 AdVP 转导过程,我们报告 2 组分和 3 组分引物编辑模式在细胞周期中最活跃,而不是在有丝分裂后细胞中。最后,我们确定将 AdVP 转导与无缝引物编辑相结合可以通过连续的递送轮次堆叠染色体编辑。总之,AdVP 允许对高级引物编辑系统进行多种研究,而不管其大小和组分数量如何,这应该有助于它们的筛选和应用。引言由序列定制的向导 RNA (gRNA) 和 Cas9 内切酶组成的可编程核酸酶是基因组编辑的有力工具。然而,双链 DNA 断裂 (DSB) 的普遍修复是通过容易出错的末端连接过程进行的,这赋予了基于核酸酶的基因组编辑内在的高诱变特性。相比之下,prime 编辑允许在特定基因组序列上安装任何单个碱基对变化和精确的小插入或删除 (indel),而不会形成 DSB (1)。通常,prime 编辑复合物包含与切口 Cas9 变体 (prime editor) 融合的工程逆转录酶 (RT) 和 3' 端延伸的 gRNA,称为 prime 编辑向导 RNA (pegRNA)。pegRNA 分别通过其间隔物和 RT 模板部分指示靶位点选择和感兴趣的编辑。在靶位点切口后,释放的单链 DNA 与 pegRNA 的引物结合位点 (PBS) 退火,引发 RT 介导的 RNA 模板复制为互补 DNA,在基因组位点杂交、瓣切除和 DNA 修复或复制后,导致靶向染色体编辑 (1)。prime 编辑有两种主要模式,即 PE2 和 PE3 (1)。前者的 2 组分系统仅依赖于一个引物编辑蛋白(例如 PE2)和一个 pegRNA,而后者的 3 组分系统则需要一个补充的常规 gRNA。在 PE3 中,gRNA 引导的未编辑 DNA 链切口促使其被编辑链取代,这通常会导致同源双链 DNA 编辑频率更高,尽管同时增加了插入/缺失副产物 (1)。最近,基于将 prime editor 与双 pegRNA 一起递送的多重 prime 编辑正在进一步扩大 DSB 独立的基因组编辑程序的范围。事实上,在这种情况下,一对 prime 编辑复合物协同作用以安装基因组插入、删除和/或替换,其大小远远大于通过 PE2 和 PE3 策略实现的插入、删除和/或替换 (2-7)。由于其巨大的潜力和多功能性,prime 编辑系统正在快速发展,包括改进的 prime 编辑蛋白和 pegRNA,例如 PEmax (8) 和工程 pegRNA (epegRNA) 架构 (9,10)。PEmax 构建体在其 Cas9 切口酶和 RT 部分分别整合了特定突变和密码子优化,有助于增强 prime 编辑活性 (8)。 epegRNA 具有以结构化 RNA 假结形式延伸的 3' 端(例如 tevopreQ1),可保护它们免受核酸外切降解(9,10)。尽管取得了这些重要进展,但 Prime 编辑组件的庞大尺寸造成了严重的生产和交付瓶颈,阻碍了它们最有效的测试和应用。旨在改善交付瓶颈的方法包括将 Prime 编辑器构建体拆分为亚基,这些亚基在进入细胞后原位组装束缚或未束缚的 Cas9 切口酶和 RT 部分(11-20)。此外,其他辅助方法允许通过以下方式富集 Prime 编辑的细胞级分; (i) 使用替代报告基因或药物系统分离在靶基因和可选择标记基因上共同编辑的细胞 (21-23),或 (ii) 通过共同递送细胞 DNA 错配修复途径的显性负因子来干扰编辑的 DNA 链去除 (8,10)。尽管适用于特定环境,但这些主要编辑系统的多组分特性使其设计复杂,并且其更广泛的应用具有挑战性。PEmax 构建体分别在其 Cas9 切口酶和 RT 部分中整合了特定突变和密码子优化,这有助于增强 prime editing 活性 (8)。epegRNA 具有以结构化 RNA 假结 (例如 tevopreQ1) 形式延伸的 3' 端,可保护它们免受核酸外切降解 (9,10)。尽管取得了这些重要进展,但是 prime editing 组件的尺寸较大,造成了严重的生产和交付瓶颈,阻碍了其最有效的测试和应用。旨在改善交付瓶颈的方法包括将 prime editor 构建体拆分为亚基,当进入细胞时,亚基就地组装束缚或不受束缚的 Cas9 切口酶和 RT 部分 (11-20)。此外,其他辅助方法允许通过以下方式富集 prime 编辑的细胞级分; (i) 使用替代报告基因或药物系统分离在靶基因和可选择标记基因上共同编辑的细胞 (21-23),或 (ii) 通过共同递送细胞 DNA 错配修复途径的显性负因子来干扰编辑的 DNA 链去除 (8,10)。尽管适用于特定环境,但这些主要编辑系统的多组分特性使其设计复杂,并且其更广泛的应用具有挑战性。PEmax 构建体分别在其 Cas9 切口酶和 RT 部分中整合了特定突变和密码子优化,这有助于增强 prime editing 活性 (8)。epegRNA 具有以结构化 RNA 假结 (例如 tevopreQ1) 形式延伸的 3' 端,可保护它们免受核酸外切降解 (9,10)。尽管取得了这些重要进展,但是 prime editing 组件的尺寸较大,造成了严重的生产和交付瓶颈,阻碍了其最有效的测试和应用。旨在改善交付瓶颈的方法包括将 prime editor 构建体拆分为亚基,当进入细胞时,亚基就地组装束缚或不受束缚的 Cas9 切口酶和 RT 部分 (11-20)。此外,其他辅助方法允许通过以下方式富集 prime 编辑的细胞级分; (i) 使用替代报告基因或药物系统分离在靶基因和可选择标记基因上共同编辑的细胞 (21-23),或 (ii) 通过共同递送细胞 DNA 错配修复途径的显性负因子来干扰编辑的 DNA 链去除 (8,10)。尽管适用于特定环境,但这些主要编辑系统的多组分特性使其设计复杂,并且其更广泛的应用具有挑战性。
摘要 Prime editing 是一种近期出现的精确基因组编辑方式,其多功能性为包括靶向基因疗法开发在内的广泛应用提供了前景。然而,其优化和使用的一个突出瓶颈是难以将大型 prime 编辑复合物递送到细胞中。在这里,我们证明将 prime 编辑构建体包装在腺病毒衣壳中可以克服这一限制,从而在转化和非转化的人类细胞中实现强大的基因组编辑,效率高达 90%。使用这种不依赖细胞周期的递送平台,我们发现 prime 编辑活动与细胞复制之间存在直接相关性,并揭示了准确的 prime 编辑事件与不需要的副产物之间的比例可能受靶细胞环境的影响。因此,腺病毒载体颗粒允许在人类细胞中有效地递送和测试 prime 编辑试剂,而与它们的转化和复制状态无关。本文整合的基因传递和基因编辑技术有望帮助研究在众多实验环境中以及最终在体外或体内治疗环境中进行主要编辑的潜力和局限性。简介基于序列可定制的向导 RNA (gRNA) 和 CRISPR 相关 (Cas) 核酸酶的可编程核酸酶是强大的基因组编辑工具 (1,2)。然而,除了脱靶诱变 (3-9) 之外,可编程核酸酶通常会因非法重组过程修复双链断裂 (DSB) 而产生复杂的靶等位基因破坏和大规模基因组重排 (10,11)。因此,最近的基因组编辑发展包括从 DNA 切割发展到基于切口 Cas 蛋白本身 (12–14) 的 DNA 非切割技术,或基于这些与 DNA 修饰部分融合的 RNA 可编程切口酶,例如碱基编辑器和最近的 prime editors (15,16)。Prime 编辑允许安装任何单个碱基对替换以及明确定义的小插入或删除,同时不需要 DSB 或供体 DNA 底物 (15)。Prime editors 由扩展的 gRNA 和 Cas9 H840A 切口酶组成,它们与工程逆转录酶 (RT) 融合,分别命名为 pegRNA 和 PE2 (补充图 S1A)。pegRNA 由 3' 端共价连接到编码目标编辑的 RT 模板和 RT 引物结合位点 (PBS) 的 gRNA 形成。位点特异性基因组 DNA 切口产生 3' 端 DNA 瓣,经 PBS 退火后,在 RNA 模板上引发 RT 介导的 DNA 合成。PE2 和 PE3。DNA 拷贝杂交至互补靶 DNA 后,编辑最终通过连续链解析反应整合到基因组中(补充图 S1B)。Prime 编辑有两种主要方式,即前者系统需要传递 PE2:pegRNA 复合物;后者依赖于这些复合物与传统 gRNA 一起转移。在 PE3 系统中,gRNA 指导的未编辑 DNA 链切口促进了使用编辑链作为修复模板(补充图 S1B)。尽管 Prime 编辑原理具有巨大的潜力和多功能性,但仍存在一些需要识别、仔细评估和解决的特定缺陷。大型的 Prime 编辑核糖核蛋白复合物由 ∼ 125 个核苷酸长的 pegRNA 和由 6.3 kb ORF 编码的 238 kDa 融合蛋白组成,这带来了巨大的生产和交付问题。事实上,生产足够数量的 >100 kDa 蛋白质尤其具有挑战性。此外,尽管病毒载体是最有效的基因组编辑工具递送系统之一 (17),但最常用的平台基于 ∼ 15 nm 腺相关病毒 (AAV) 颗粒,由于其包装容量有限(∼ 4.7 kb)(17),不适合转移全长 Prime 编辑序列。完全病毒基因删除的腺病毒载体(也称为高容量腺病毒载体),以下称为腺载体颗粒 (AdVP),聚集了一组有价值的特征,即; (i) 大包装容量(即高达 36 kb),(ii) 严格的游离性,(iii) 高遗传稳定性;(iv) 容易的细胞趋向性改变和 (v) 高效转导分裂和静止细胞 (17–21)。在这里,我们研究了定制这些 ∼ 90 nm 生物纳米粒子用于全长主要编辑组件的一次性转移的可行性和实用性,并且由于潜在或影响主要编辑结果的细胞过程基本上是未知的,利用后一个特性来研究细胞周期对这种位点特异性 DNA 修饰原理的作用。材料和方法 细胞
我们报告了一个由无限层镍元的启发的决定性量子蒙特卡洛研究,重点是层间杂交在3 d x 2-2-y 2轨道之间的影响,该杂交源自ni(或ni和o)在一个层中源自ni(或ni和o),在一个层和稀有(r)5 d orbitals in ni层中,ni and ni and and and and the ni and the and and and and and and and and and and libit。对于平均两层之间共有一个电子的填充,层间杂交会导致Ni层中的“自掺杂”孔,并且缺乏抗磁磁体排序,而是旋转密度和电荷密度条纹状状态的外观。随着层间杂交的增加,Ni和R层都会产生抗铁磁相关性,即使两个单独的层都远离半填充。用于中间范围内的杂交,大致可与内部的邻居跳跃跳跃t ni相提并论,该模型会形成近核样物理的特征。