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双膦酸盐类脂质材料的合理设计，用于将 mRNA 递送至骨微环境
摘要：开发针对骨微环境的脂质纳米颗粒 (LNP) 配方对核酸治疗应用（包括骨再生、癌症和造血干细胞治疗）具有巨大潜力。然而，由于存在多种生物屏障，例如骨骼血流量低、血液-骨髓屏障以及药物与骨矿物质之间的亲和力低，导致骨微环境中的治疗剂量不利，因此向骨骼输送治疗药物仍然是一项重大挑战。在这里，我们构建了一系列对骨矿物质具有高亲和力的双膦酸盐 (BP) 脂质类材料，作为克服生物屏障的一种手段，将 mRNA 治疗药物有效地递送到体内骨微环境中。在体外筛选了配制成 LNP 的 BP 类脂质材料后，我们确定了一种领先的 BP-LNP 制剂 490BP-C14，与不含 BP 的 490-C14 LNP 相比，它在小鼠体内骨微环境中的 mRNA 表达和定位增强。此外，静脉注射后，BP-LNP 增强了 mRNA 的递送和治疗性骨形态发生蛋白 2 从骨微环境中的分泌。这些结果证明了 BP-LNP 递送到骨微环境的潜力，可能用于一系列 mRNA 治疗应用，包括再生医学、蛋白质替代和基因编辑疗法。
利用基于白蛋白结合域衍生亲和蛋白的强效药物偶联物靶向 HER2 表达肿瘤
摘要：白蛋白结合域衍生的亲和蛋白 (ADAPT) 是一类小型折叠工程支架蛋白，在靶向癌症肿瘤方面具有巨大前景。在这里，我们通过与白蛋白结合域 (ABD) 融合延长了 ADAPT 的体内半衰期，该蛋白靶向人表皮生长因子受体 2 (HER2)，并用高细胞毒性有效载荷 mertansine (DM1) 武装它，以研究其体外和体内特性。所得药物偶联物 ADAPT6-ABD-mcDM1 保留了与其预期靶标（即 HER2 和血清白蛋白）的结合。此外，它能够特异性地结合具有高 HER2 表达的细胞，被内化，并显示出强毒性，IC 50 值范围为 5 至 80 nM。相反，对于具有低 HER2 表达的细胞没有发现毒性作用。体内实验中，用 99m Tc 放射性标记的 ADAPT6-ABD-mcDM1 在大多数正常器官中的摄取率较低，主要排泄途径为肾脏。24 小时后肿瘤的摄取率为 5.5% ID/g，高于除肾脏外所有正常器官在此时间点的摄取率。通过预先注射过量的单克隆抗体曲妥珠单抗（在 HER2 受体上具有重叠表位）可阻断肿瘤的摄取。总之，基于亲和蛋白 ADAPT 平台的半衰期延长药物偶联物有望进一步发展为靶向癌症治疗。
Au@Pt 核壳纳米粒子生物共轭物用于治疗 HER2+ 乳腺癌和肝细胞癌。193mPt 和 195mPt 放射性核素在俄歇电子疗法中的适用性模型研究
摘要：193m Pt 和 195m Pt 放射性核素是具有治疗吸引力的俄歇电子发射体，每次衰变的俄歇电子产量非常高。本文总结了核壳 (Au@Pt) 纳米粒子用于 HER2+ (人表皮生长因子受体 2) 乳腺癌和肝细胞癌的电子俄歇治疗应用的第一步研究。合成了覆盖铂壳的金纳米粒子 (30 nm)，效率高 (>80%)，并进一步进行了体外研究，例如结合亲和力、内化和细胞毒性。为了找到导致铂在 HepG2 细胞中产生细胞毒性的机制，使用 ICP-MS (电感耦合等离子体质谱) 测定了分离的细胞核和细胞质中的铂浓度。细胞核中缺乏铂表明细胞毒性作用与活性氧 (ROS) 和活性氮 (RNS) 的产生有关。使用合成的靶向生物缀合物 (Au@Pt-PEG-曲妥珠单抗) 对 SKOV-3 细胞系进行的研究表明，该制剂对 HER2+ 细胞具有高亲和力、其内化、其位于核周区域和部分核内位置。对 HER2 阴性细胞 MDA-MB-231 的特异性结合可以忽略不计，Au@Pt-PEG-曲妥珠单抗没有进入这些细胞。获得的结果很有希望，值得未来研究使用 193m Pt 和 195m Pt 放射性药物的俄歇电子疗法。
折叠家庭调查的贝叶斯优化针对有向蛋白的进化
定向进化（DE）是一种蛋白质工程技术，涉及诱变和筛选以搜索优化给定特性的序列（例如将有效绑定到指定目标）。不幸的是，潜在的优化问题不确定，因此引入的突变以提高指定特性可能是以未定的，但重要的属性为代价的（例如，亚细胞定位）。我们试图通过将折叠的正则化因子纳入优化问题来解决这个问题。正则化因子偏向于类似于蛋白质所属折叠族的序列的设计的搜索。我们将方法应用于具有与IgG-FC的官能测量值的大型蛋白质GB1突变体库。我们的结果表明，正则化优化问题会产生更多类似天然的GB1序列，而结合效率仅略有下降。特别是，在GB1折叠族的生成模型下，我们的设计的对数比没有正则化的生成模型高41-45％，而结合效果仅下降了7％。因此，我们的方法能够在竞争性状之间进行交易。此外，我们证明了我们的主动学习驱动方法可将湿lab负担降低，以识别最佳的GB1设计，相对于Arnold Lab在同一数据上的最新结果。
类风湿关节炎治疗的预测生物标志物
关节炎的阴影 - 患者和提供者的观点，4月25日，6-7：15：ET在本网络研讨会中，医疗保健提供者和患者聚集在一起，以应对非裔美国人和西班牙裔社会中生活与关节炎的个人所面临的独特挑战。社区的支持和资源将得到强调，这表明了与针对黑人/非裔美国人和西班牙裔社区量身定制的组织互动的重要性。将探讨关节炎管理的整体方法，包括生活方式的改变和思维体联系，鼓励参与者采用全面的健康方法。注册参加网络研讨会。
临床膝盖研究员：骨科绘制...
与GMC良好医疗实践中规定的患者和同事（2013年）所述。附录骄傲的价值观这些都是谢菲尔德教学医院NHS基金会信托基金会的所有员工都将在他们所做的一切中证明。p首先 - 确保我们所服务的人是我们所做的事情的核心 - 要善良，尊重，公平和价值多样性 - 庆祝我们的成功，持续学习，确保我们改善我们 - 与他人合作 - 与他人合作 - 对我们的行为有效，有效，对我们的行为有效，
工程小金属结合蛋白标签可提高大肠杆菌周质中重组人类生长激素的产量
融合蛋白在大肠杆菌重组蛋白的生产中起着重要作用。它们主要用于细胞质表达，因为它们可以设计为增加目标蛋白的溶解度，然后可以通过亲和层析轻松纯化。相反，融合蛋白通常不包含在用于周质生产的构建体设计中。相反，插入信号序列以将蛋白质转运到周质中，并添加 C 端 his-tag 以进行后续纯化。我们的研究小组提出从欧洲亚硝化单胞菌周质中分离的小金属结合蛋白 (SmbP) 作为一种新的融合蛋白，用于在大肠杆菌的细胞质或周质中表达重组蛋白。SmbP 还允许通过使用 Ni(II) 离子的固定化金属亲和层析进行纯化。最近，我们通过将 SmbP 标记蛋白的天然信号肽与取自果胶酸裂解酶 B (PelB) 的信号肽进行交换，优化了 SmbP 标记蛋白的周质生产，从而大幅增加了蛋白产量。在这项工作中，我们表达并纯化了 PelB-SmbP 标记的可溶性生物活性人类生长激素 (hGH)，并获得了迄今为止报道的该蛋白的最高周质产量。在 Nb2-11 细胞上测试的其活性相当于 50 ng mL 1 的商业生长激素。因此，我们强烈建议使用 PelB-SmbP 作为蛋白标签，用于大肠杆菌周质中 hGH 或其他可能的目标蛋白的表达和纯化。
通过无洗涤剂膜蛋白提取与表面等离子体共振生物传感器相结合筛选潜在的 P-糖蛋白抑制剂
摘要 P-糖蛋白(P-gp)在癌细胞中高表达可导致多药耐药(MDR)，抗癌药物与P-gp抑制剂联用是逆转癌症MDR治疗的一种有前途的策略。本研究建立了一种无标记、无洗涤剂的系统，结合表面等离子体共振(SPR)生物传感器和苯乙烯马来酸(SMA)聚合物膜蛋白(MPs)稳定技术来筛选潜在的P-gp抑制剂。首先，利用SMA聚合物从MCF-7/ADR细胞中提取P-gp，形成SMA脂质体(SMALPs)。随后，将SMALPs固定在SPR生物传感器芯片上，建立P-gp抑制剂筛选系统，并测定P-gp与小分子配体的亲和力。方法学考察证明该筛选系统具有良好的特异性和稳定性。从50个天然产物中筛选出9个P-gp配体，并测定了它们与P-gp的亲和常数。体外细胞验证实验表明，粉防己碱、防己诺林碱、前花素B、新黄芩素和淫羊藿苷可以显著增加MCF-7 / ADR细胞对阿霉素（Adr）的敏感性。此外，粉防己碱、前花素B和新黄芩素可以通过抑制P-gp的功能来逆转MCF-7 / ADR细胞的MDR。这是首次将基于SMALPs的稳定化策略应用于SPR分析体系。SMA聚合物可以将P-gp保留在天然脂质双层环境中，从而保持P-gp的正确构象和生理功能。所开发的系统可以快速
开发OGA的宠物示踪剂，具有改进的活力动力学
o -glcnacylation被认为在阿尔茨海默氏病中的tau病理发展中起作用，因为它可以调节Tau的聚集倾向。o -Glcnacylation由2种酶调节：O -GlCNAC转移酶和O- Glcnacase（OGA）。开发宠物示踪剂将是开发OGA治疗性小分子抑制剂的必要工具，从而实现靶向参与和剂量选择的临床测试。方法：筛选小分子化合物的集合，以抑制活性和与OGA的高度结合，以及有利的宠物示踪剂（多药耐药蛋白1 ef toplip of，中枢神经系统宠物系统宠物系统宠物多组合表的优化）等）。选择了两种具有较高属性的铅化合物，并且选择了OGA的选择性，以进一步实现，包括使用放射性访问结合测定法与组织匀浆的OGA结合。使用大鼠未标记化合物的微剂量方法建立了体内药代动力学。在带有11个标记化合物的啮齿动物和非人类培养物（NHP）中进行了体内成像研究。结果：两个选定的候选者Bio-735和Bio-578在体外显示出有希望的属性。用Tritium进行放射性标记后，[3 H] Bio-735和[3 H] Bio-578在啮齿动物脑匀浆中结合的结合分别表现出0.6和2.3nm的解离结合体。的结合被同源化合物和硫代thiamet G抑制了浓度，这是一种良好的特征和结构上多样的OGA抑制剂。成像研究表明，在非二型活性化合物存在下，这两种示踪剂在大脑中都具有很高的吸收，并且抑制了与OGA的结合。然而，只有BIO-578在具有11 c标记分子的PET研究的时间范围内显示出可逆的结合动力学，以使用动力学建模来实现定量。示踪剂摄取的植物与10 mg/kg的阻塞剂量结合在一起。铅化合物BIO-578在啮齿动物和人类后脑组织中对OGA的高度和选择性表现出很高的选择性，从而在NHP中进行了进一步的测试。NHP PET成像研究表明，示踪剂具有出色的脑动力学，并完全抑制了硫胺素G的特定结合。这些结果表明，示踪剂[11 C] Bio-578非常适合在人类中进一步表征。
68Ga 和 177Lu 标记整合素 αvβ6 靶向放射诊疗肽的临床前评估
整合素 avb 6 是一种上皮特异性细胞表面受体，在许多恶性肿瘤中过度表达，包括致死率极高的胰腺导管腺癌。在此，我们开发并测试了一种新型 avb 6 靶向肽 DOTA-5G ( 1 )，用 68 Ga 放射性标记，用于 PET/CT 成像，用 177 Lu 放射性标记用于治疗。为了开发一种放射治疗诊断剂，我们对其进行了进一步修改，以增加循环时间、肾脏循环和肿瘤摄取，得到 DOTA-白蛋白结合部分-5G ( 2 )。方法：在固相上合成肽 1 和 2，并通过酶联免疫吸附测定评估它们对 avb 6 的亲和力。这些肽用 68 Ga 和 177 Lu 放射性标记。在 avb 6 阳性 BxPC-3 人胰腺癌细胞中评估了 68 Ga- 1 和 177 Lu- 2 的体外细胞结合、内化和效应。对患有皮下 BxPC-3 肿瘤的雌性 nu/nu 小鼠进行了 68 Ga- 1 和 68 Ga- 2 的 PET/CT 成像。对 68 Ga- 1（注射后 1 和 2 小时）、68 Ga- 2（注射后 2 和 4 小时）以及 177 Lu- 1 和 177 Lu- 2（注射后 1、24、48 和 72 小时）进行了生物分布。使用 OLINDA/EXM 1.1 将 177 Lu- 2 生物分布数据外推用于人体剂量数据估计。在患有 BxPC-3 肿瘤的小鼠中评估了 177 Lu- 2 的治疗效果。结果：酶联免疫吸附试验显示肽 1 和 2 对 avb 6 具有高亲和力（，55 nM）。合成了高放射化学纯度的 68 Ga- 1、68 Ga- 2、177 Lu- 1 和 177 Lu- 2。在 BxPC-3 细胞中观察到 68 Ga- 1 和 177 Lu- 2 的快速体外结合和内化。PET/CT 成像和生物分布研究表明 BxPC-3 肿瘤中有摄取。177 Lu- 2 中引入白蛋白结合部分导致肿瘤摄取和保留随时间增加 5 倍。根据扩展剂量数据，177 Lu- 2 的剂量限制器官是肾脏。与对照组相比，177 Lu- 2 治疗使中位生存期延长了 1.5 至 2 倍。结论：68 Ga- 1 和 177 Lu- 2 在体内和体外均表现出对整合素 avb 6 的高亲和力，可迅速内化到 BxPC-3 细胞中，并且在小鼠和人血清中稳定。两种放射性示踪剂在临床前研究中均表现出良好的药代动力学，主要通过肾脏排泄，且肿瘤与正常组织的比例良好。良好的人体剂量数据表明 177 Lu- 2 具有治疗胰腺导管腺癌的潜力。