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将打靶特定人源基因的 Cas9 和 sgRNA 转染到 HEK293 细胞。转染所用的质粒 DNA 上含有 表达带双端核定位序列 （ NLS ）的 Cas9 及 sgRNA 的表达框，通过 TransIT-X2 (Mirus) 转染 试剂进行转染。转染所用的 Cas9 mRNA 进行了假尿苷和 5- 甲基胞嘧啶修饰且带有双端 核定位序列，使用 transIT-mRNA 转染试剂将 sgRNA 和 mRNA 共转染。 Cas9 RNPs 使用脂质 体 RNAiMAX ( Life Technologies ) 进行反向转染， RNP 的终浓度为 10 nmol 。 Cas9 蛋白上不含 核定位序列。 EnGen Cas9 含有双端核定位序列。编辑效率通过 T7E1 实验进行分析，结果 以修饰百分比进行统计。
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将打靶特定人源基因的 Cas9 和 sgRNA 转染到 HEK293 细胞。转染所用的质粒 DNA 上含有 表达带双端核定位序列 （ NLS ）的 Cas9 及 sgRNA 的表达框，通过 TransIT-X2 (Mirus) 转染 试剂进行转染。转染所用的 Cas9 mRNA 进行了假尿苷和 5- 甲基胞嘧啶修饰且带有双端 核定位序列，使用 transIT-mRNA 转染试剂将 sgRNA 和 mRNA 共转染。 Cas9 RNPs 使用脂质 体 RNAiMAX ( Life Technologies ) 进行反向转染， RNP 的终浓度为 10 nmol 。 Cas9 蛋白上不含 核定位序列。 EnGen Cas9 含有双端核定位序列。编辑效率通过 T7E1 实验进行分析，结果 以修饰百分比进行统计。
紫锥菊葡萄氏植物提取物针对兔子中的pasterullosis的保护作用：
偷旋紫杉醇（E. purpurea）已被用于预防和控制呼吸系统的感染疾病。在这项研究中，我们研究了甲乙发展曲霉氧霉素对锯齿状甲甲烷多核型甲甲虫对A型A型甲甲基甲甲型型甲状腺型感染的影响压力标记。forthymale白色新西兰兔子被划分为相等的群体；将第1组作为对照，第2组WA在室内感染了P.MultoctiDatepe a（4x107 cfu/ml/兔子）在实验开始（FBE）的第14天（FBE）的第14天，第3组被口服管理。 4WA在第14天FBE经胸膜的鼻内感染，然后用ENR霉菌素治疗（10 mg / kg b.w. < / div>在饮用水中）从第18至20天出现临床体征后。结果表明，兔子中的肿瘤性感染产生了大细胞多色染色性贫血（RBC = 5.26 x106/µl）（MCV = 76.06 fl，mcv = 76.06 fl，mCHC = 24.99％），leuk a/a/a/abiocy a。在吞噬百分比（51.60％）和吞噬指数（0.26）中。我们观察到总蛋白质，白蛋白和球蛋白的血清水平降低。此外，还记录了血清丙氨酸氨基转移酶（Alt，34.4 u/L）和碱性磷酸酶（ALP，27.80 u/L）的显着增加。还包括血清胆红素，总胆红素= 1.03mg/dl，直接bilirirubin = 0.61 mg/dliririririririricect = 0.61 mg/dliriririricect mg/dl）水平显着升高。血清尿素（47.32mg/dL）和肌酐水平（2.10 mg/dl）显着增加。此外，兔子中的多杆菌感染引起的氧化应激，在血清过酶（CAT，3.13 nmol/L）的显着降低中观察到，脂质过氧化（MDA，3.46 nmol/L）的升高。总而言之，与多洛昔氏菌的兔子相比，兔子型型兔子型在兔子感染前后的eChinecealtment能够改善所有研究参数的改变。关键词：兔子，紫锥花，Enroroxanin，basteurellamultocida，氧化应激。
T4 DNA聚合酶
大肠杆菌DNA污染单元已测试了N/A N/A 30 30 30 30规范> 99％5,555 U/mg功能功能性功能性NO转化率<10拷贝<10份蛋白质：从表达重组T4 DNA聚合酶基因的大肠杆菌菌株中纯化。单位定义：1个单位定义为将在37°C下30分钟内将10 nmol的DNTP纳入酸性材料的酶量（1）。分子量：103,609 Daltons质量控制分析：使用2倍连续稀释方法测量单位活动。在1倍反应缓冲液中制成酶的稀释液，并将其添加到含有小腿胸腺DNA，1x蓝色缓冲液，3 H-DTTP和100 µM DNTP的50 µL反应中。在37°C下孵育10分钟，浸入冰上，并使用Sambrook和Russell的方法进行分析（Molecular Cloning，V3，2001，pp。A8.25-A8.26）。蛋白浓度（OD 280）由OD 280吸光度确定。
小胶质刺激激活减轻了雄性但雌性小鼠的神经损伤诱导的神经性疼痛
小胶质细胞是中枢神经系统中的驻留免疫细胞，在神经炎症和神经性疼痛的发展中起作用。我们发现干扰素基因（STING）的刺激剂主要在脊柱小胶质细胞中表达，并在周围神经损伤后上调。然而，机械性异常性症是周围神经损伤后神经性疼痛的标记，不需要小胶质细胞刺痛表达。相比之下，特定激动剂（ADU-S100，35 nmol）的激活显着缓解了雄性小鼠的神经性疼痛，但没有显着缓解雌性小鼠。雌性小鼠的刺激激活导致促炎细胞因子的增加，这可能抵消ADU-S100的镇痛作用。 小胶质细胞刺激表达和I型干扰素ß（IFN-ß）信号传导是雄性小鼠刺激性激动剂的镇痛作用所必需的。 机械上，储罐结合激酶1（TBK1）的下游激活和IFN-ß的产生可能部分解释了观察到的镇痛作用。 这些发现表明，脊柱小胶质细胞中的刺激激活可能是神经性疼痛的潜在治疗干预措施，尤其是在男性中。雌性小鼠的刺激激活导致促炎细胞因子的增加，这可能抵消ADU-S100的镇痛作用。小胶质细胞刺激表达和I型干扰素ß（IFN-ß）信号传导是雄性小鼠刺激性激动剂的镇痛作用所必需的。机械上，储罐结合激酶1（TBK1）的下游激活和IFN-ß的产生可能部分解释了观察到的镇痛作用。这些发现表明，脊柱小胶质细胞中的刺激激活可能是神经性疼痛的潜在治疗干预措施，尤其是在男性中。
ajtr0140811.pdf
摘要：目的：提出一种基于β-CD-CuNCs和多壁碳纳米管（MWCNTs）协同作用的新型信号增强策略，用于检测DNA氧化损伤生物标志物8-羟基-2'-脱氧鸟苷（8-OHdG）。方法：以β-CD-CuNCs-MWCNTs-nafion膜为载体构建传感器，成功用于抗坏血酸（AA）和尿酸（UA）等生物分子存在下8-OHdG的定量检测。为研究修饰电极的表面形貌，对裸电极和修饰电极进行了透射电子显微镜（TEM）、循环伏安法（CV）和电化学阻抗谱（EIS）测试。结果：差分脉冲伏安法（DPV）检测结果表明，8-OHdG的峰电流与浓度呈线性关系，浓度范围为1.0×10 -7～1.0×10 -6 mol/L（R 2 =0.9926）和1.0×10 -6～2.0×10 -5 mol/L（R 2 =0.9933），检测限（S/N=3）为33 nmol/L。结论：该传感器已成功用于人尿液中8-OHdG的测定，回收率较高。
活性维生素 D 治疗对 2 型糖尿病发展的影响：日本人群的 DPVD 随机对照试验
低于 20 ng/mL (50 nmol/L)。在中位随访期 2.9 年内，艾地骨化醇组 630 名参与者中有 79 名 (12.5%) 患上 2 型糖尿病，安慰剂组 626 名参与者中有 89 名 (14.2%) 患上 2 型糖尿病（风险比 0.87，95% 置信区间 0.67 至 1.17；P=0.39）。艾地骨化醇组 630 名参与者中有 145 名 (23.0%) 恢复至正常血糖，安慰剂组 626 名参与者中有 126 名 (20.1%) 恢复至正常血糖（风险比 1.15，0.93 至 1.41；P=0.21）。经多变量分数多项式 Cox 回归分析调整混杂因素后，艾地骨化醇显著降低了患糖尿病的风险（风险比 0.69，0.51 至 0.95；P=0.020）。此外，艾地骨化醇对基础胰岛素分泌水平较低的参与者显示出有益作用（风险比 0.41，0.23 至 0.71；P=0.001）。在随访期间，与安慰剂相比，艾地骨化醇显著提高了腰椎和股骨颈的骨矿物质密度以及血清骨钙素浓度（所有 P<0.001）。严重不良事件无显著差异。
89Zr-DFO-Azepin 的光诱导放射合成
在 PET 或放射免疫治疗的诊断和放射治疗药物的开发中，快速获取放射性标记抗体的方法至关重要。人类肝细胞生长因子受体 (c-MET) 信号通路在包括胃癌在内的几种恶性肿瘤中失调，是药物发现中的重要生物标志物。在这里，我们使用光放射化学方法直接从完全配制的药物 (MetMAb) 开始生产 89 Zr 放射性标记的 onartuzumab（一种单价抗人 c-MET 抗体）。方法：在含有 89 Zr-草酸盐、光活性螯合物去铁胺 B (DFO) - 芳基叠氮化物 (DFO-ArN 3 ) 和 MetMAb 的一锅反应中同时进行 89 Zr 放射性标记和蛋白质结合，得到 89 Zr-DFO-azepin-onartuzumab。作为对照，使用预纯化的 onartuzumab 和 DFO-Bn-NCS，通过常规两步工艺制备 89 Zr-DFO-苄基 Bn-异硫氰酸酯 Bn-NCS-onartuzumab。使用尺寸排阻法纯化放射性示踪剂，并通过放射色谱法进行评估。研究了人血清中的放射化学稳定性，并使用 MKN-45 胃癌细胞通过细胞结合试验确定了免疫反应性。对带有皮下 MKN-45 异种移植瘤的雌性无胸腺裸鼠进行多个时间点（0 – 72 小时）的 PET 成像。在获得最终图像后进行生物分布实验。通过竞争性抑制（阻断）研究在体内评估了 89 Zr-DFO-azepin-onartuzumab 的肿瘤特异性。结果：初始光放射合成实验在不到 15 分钟的时间内产生了 89 Zr-DFO-azepin-onartuzumab，分离的衰变校正放射化学产率 (RCY) 为 24.8%，放射化学纯度约为 90%，摩尔活度约为 1.5 MBq nmol − 1。反应优化将 89 Zr-DFO-azepin-onartuzumab 的放射化学转化率提高到 56.9% ± 4.1% (n=3)，分离的 RCY 为 41.2% ± 10.6% (n=3)，放射化学纯度超过 90%。采用常规方法生产 89 Zr-DFO-Bn-NCS-onartuzumab，分离 RCY 超过 97%，放射化学纯度超过 97%，摩尔活性约为 14.0 MBq nmol − 1 。两种放射性示踪剂均具有免疫反应性，在人血清中稳定。PET 成像和生物分布研究表明，两种放射性示踪剂均具有较高的肿瘤摄取率。到 72 小时时，89 Zr-DFO-azepin-onartuzumab ( n = 4) 的肿瘤和肝脏摄取量（注射剂量百分比 [%ID]）分别达到 15.37 ± 5.21 %ID g − 1 和 6.56 ± 4.03 % ID g − 1，而 89 Zr-DFO-Bn-NCS-onartuzumab ( n = 4) 的肿瘤和肝脏摄取量分别达到 21.38 ± 11.57 %ID g − 1 和 18.84 ± 6.03 %ID g − 1。阻断实验显示肿瘤摄取量显著降低
纳米技术干细胞工程的前沿 -
摘要在这项研究中，已使用Callicarpa Maingayi叶提取物合成了新的还原氧化石墨烯（RGO）。制备了基于Fe 3 O 4纳米颗粒的氧化石墨烯和碳纳米管（（Fe 3 O 4 - （RGO＆CNT）））的新型磁性催化剂。将平均尺寸为25至40 nm的Fe 3 O 4纳米颗粒放在碳纳米管上，并减少氧化石墨烯片，而在还原的石墨烯氧化物片之间插入的碳纳米管有效地阻止了其聚集。（Fe 3 O 4-（RGO＆CNT）复合材料具有较大的表面积和良好的电催化特性，适用于通过伏安法的检测和测定伊马替尼（IM）抗癌药。在优化的条件下，在0.1至40μmolL -1的浓度范围内实现了良好的线性性，检测和灵敏度的极限分别为57 nmol L -1和3.365μaμm-1。此外，制造的传感器在所有电化学测试中表现出可接受的可重复的行为和准确性以及高水平的稳定性。此外，提出的方法用于在生物样品中检测IM，回收率为94.0％至98.5％，相对标准偏差为2.1至4.4％。
接种 BNT162b2 mRNA COVID-19 疫苗后出现中枢性尿崩症：病例报告
血液分析：肌酐 0.7 mg/dL、葡萄糖 95mg/dL、Na+ 141mEq/L、K+ 3.9 mEq/L、TSH 3.8 mcUI/L（0.38-5.33）、FT4 0.9 ng/dL（0.6-1.1）、皮质醇 215.4 nmol/L（185-624）、ACTH 21.9 pg/mL（6- 48）、FSH 4.76 UI/L、LH5.62 UI/L、雌二醇 323 pmol/L、IGF1 74.8 ng/mL（88-209）、PRL 24.7mcg/L（3.3-26.7）渗透压 298.2 mOs/Kg（250- 325）；尿液分析：量 10200 mL/24h，渗透压 75 mOs/Kg（300-900），密度 1.002。限水试验：0' - 血清渗透压 308.8mOsm/Kg vs. 尿渗透压 61.0 mOsm/Kg；60' - 尿渗透压 102 mOsm/Kg；去氨加压素 1 小时后尿渗透压为 511mOsm/kg。MRI 未发现与垂体炎一致的异常体征，除了 T1 加权成像上垂体后叶亮点消失。诊断为 CDI，并开始用去氨加压素治疗。潜在不良反应报告已提交给国家卫生当局。