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具有异型的全细胞筛选方法
由于其直接电子传输到电极的能力，稀土金属作为辅因子的利用及其周质定位，吡咯烷二酚奎诺酮依赖性的醇dehydroge- nases（pqqq-adhs）代表了一类有趣的生物催化剂，用于各种生物技术应用程序。对于大多数生物催化剂而言，蛋白质稳定性是库的，要么在给定的过程条件下提高蛋白质的性能，要么最大程度地提高蛋白质对突变操纵的鲁棒性，通常需要增强或引入感兴趣的功能。在这项研究中，我们描述了一个全细胞筛选测定法，适用于探测Escherichia Coli BL21（DE3）细胞中的PQQ-ADH活动，并使用此测定法筛选智能突变库，以提高PQQ-ADH PEDE的热稳定性（PP_2674）（PP_2674）（ppseudomonas putida putida ktida KT22440）。在连续三轮筛选时，我们确定了三个不同的氨基酸位置，这显着改善了酶的稳定性。The subsequent combination of the bene fi cial mutations fi nally results in the triple mutant R91D/ E408P/N410K, which not only exhibits a 7 ° C increase in thermal stability but also a twofold increase in residual activity upon incubation with up to 50% dimethyl sulfoxide (DMSO), while showing no signi fi - cant difference in enzymatic ef fi ciency ( k cat / k m）。
勒莫里亚时间战争 - 异族实践
下文记述了威廉·S·巴勒斯参与神秘时间战争的情况，大大超出了大多数公认的社会和历史可能性概念。它基于一位我们称为威廉·凯耶的情报人员传递给埃克鲁的“敏感信息”。1 为了保护此人的身份，叙述部分虚构。凯耶本人承认，他的经历使他容易出现“偏执狂-时间狂幻症”，而埃克鲁仍然认为他的故事中的大部分内容极其不可信。2 尽管如此，尽管我们怀疑他的消息已被可疑的推论、噪音和虚假信息严重破坏，但我们越来越相信他确实是某种“内部人士”，即使他渗透的组织本身就是一个精心策划的骗局或集体妄想。凯耶将这个组织称为“秩序”，或——按照巴勒斯的说法——“委员会”。
定量顺序染色质免疫沉淀，一种分析体内基因组区域蛋白共占蛋白的共占者的方法
顺序染色质免疫沉淀（SEQCHIP）是一种程序，其中甲醛交联，来自活细胞的蛋白质– DNA复合物受到了两个具有不同特异性抗体的顺序免疫侵蚀。seqchip已被定性地解决，是否可以同时在体内同时同时同时同时占领DNA。在这里，我们扩展了早期的工作，并描述了以定量方式执行和解释Seqchip实验的理论和实际考虑因素。我们提供了一个详细的实验程序，用于设计和执行SEQCHIP实验以及这三个可能结果的实验示例：完全共同占领，没有共占领和部分共同占领。在某些部分共同占领的情况下，Seqchip中免疫沉淀的顺序会强烈影响结果。我们在实验上确认了一个定量参数，该参数提供了在给定DNA区域上两种蛋白的同居量的度量，并提供了有关如何解释Seqchip实验结果的信息。我们对Seqchip数据的定量处理大大扩展了该技术在体内阐明分子机械的实用性。