仅用于研究使用。不适用于诊断程序。该产品包含来自GM24385的纯化基因组DNA和肿瘤变体的DNA质粒。此文件列出了材料编号0710-0094、0710-0095和0710-0097中包含的DNA序列的基因组坐标。
• 体外转基因细胞、非病毒载体(如质粒)、复制缺陷型病毒载体(如腺病毒、腺相关病毒、慢病毒)、复制能力强的病毒载体(如麻疹、腺病毒、牛痘)、微生物载体(如李斯特菌、沙门氏菌)
请参阅相关出版物和图 2 了解模板设计示例。我们建议使用在插入/替换序列(模板的编辑部分)两端至少有 200bp 同源臂的 dsDNA 模板。我们建议将模板克隆到简单的质粒中
Northx Biologics提供了一项全面的PDNA服务,从R&D等级到由EMA批准的顶级现代设施生产的GMP质粒。为了确保在阶段之间平稳地传递过程和测试,尽管灵活,但在质量等级之间保持一致。
AAVpro 包装质粒 (AAV2,#6234;AAV5,#6664;AA6,#6665,Takara Bio) 和 AAVpro 293T 细胞系 (#632273,Takara Bio)。所有 AAV 载体质粒均通过将对应于目标基因座和敲入序列的 PCR 片段克隆到 EcoRV 和 BglII 限制位点之间的 pAAV-CMV 载体中,去除 CMV 启动子、b-珠蛋白内含子和 hGH polyA 来构建。按照制造商的说明,使用 Xfect 转染试剂 (#631318,Clontech) 将 AAV 质粒和包装质粒转染 293T 细胞。使用 AAVpro 纯化试剂盒 (所有血清型) (#6666,Takara Bio) 提取和浓缩 AAV。使用 AAVpro 滴定试剂盒(#6233,Takara Bio)和热循环仪 Dice 实时系统 III(TP950,Takara Bio)估算病毒基因组拷贝数。
结果:PCR和整个基因组分析证实了MCR-1基因在10个大肠杆菌分离株中的存在。colistin的最小抑制浓度范围为4 ug/ml至32 ug/ml。分解分析表明,存在多种耐药性决定因素,赋予β-内酰胺,氨基糖苷,甲氧苄胺,磺胺酰胺,四环素,四环素,喹诺酮类,氟烯甲苯甲酸和大乙二醇化的多种耐药性决定因素。杂交基因组组装表明MCR-1在INCI2质粒上携带。质粒复制子键入表明INCI2型质粒(n = 10)是这些菌株中最普遍的质粒,其次是Incfib(n = 8),Incfic(n = 7),Incfia(n = 6),INCFII(incfii(incfii(incfii)(4),INCQ1(n = 3),INCQ1(n = 3),INCI1(N = 1),IN = 1),IN = 1(n = 1),IN = 1(n = 1),IN = 1(n = 1),(n = 1),(n = 1),(n = 1),(n = 1),(n = 1)(n = 1),(n = 1)(n = 1),(n = 1)。Achtman MLST打字方案在MCR -1阳性大肠杆菌中揭示了STS的大量多样性。毒力芬德分析表明,存在范围为4到19的许多毒力因子。
– 离体转基因细胞 – 非病毒载体(例如质粒) – 复制缺陷型病毒载体(例如腺病毒、腺相关病毒、慢病毒) – 复制能力强的病毒载体(例如麻疹、腺病毒、牛痘) – 微生物载体(例如李斯特菌、沙门氏菌) 干细胞/干细胞衍生
我们报告了一系列适用于检测和克隆翻译控制信号和外源基因 5' 编码序列的质粒载体的构建和使用。在这些质粒中,乳糖操纵子 β-半乳糖苷酶基因 lacZ 的氨基末端的前八个密码子被去除,并在 lacZ 的第八个密码子附近插入独特的 BamHI、EcoRI 和 SmaI (XmaI) 内切酶切割位点。将含有适当调节信号和 5' 编码序列的脱氧核糖核酸片段引入此类 lac 融合质粒导致产生由 β-半乳糖苷酶残基的羧基末端片段和含有外源脱氧核糖核酸序列编码的氨基末端氨基酸的肽片段组成的混合蛋白。这些杂合肽保留了 1,8-半乳糖苷酶的酶活性,并产生了 Lac' 表型。此类杂合蛋白可用于纯化由外源脱氧核糖核酸片段编码的肽序列,以及用于研究特定肽片段的结构和功能。
提取核酸是任何分子生物学研究的起点,因此被认为是一个关键过程。质粒被认为是原核生物进化的主要驱动力,因为它们可以在人群之间迁移,使其成为侧向DNA转移和微生物战争的有效药物。质粒的重要性超出了微生物的进化,因为它们被广泛用作基础研究(例如随机诱变)的遗传工程载体,以及在生物技术学(例如胰岛素生产),合成生物学,农业,农业,农业工程(例如,Bioss的遗传工程)和医学(E. g.g.,g。由于质质剂DNA(pDNA)的有效生产方法的需求已响应于基因治疗和疫苗的快速进步,因为与病毒载体相关的有利安全问题,因此pDNA在基因治疗和疫苗中的快速进步。Himedia的Hipura®用于质粒DNA纯化的预填充墨盒(MIDIPREP)提供了高产量的质粒DNA和无麻烦的自动化溶液,以提取。
质粒抗生素抗性基因(ARGS)的共轭转移是ARG传播的重要途径。 据报道,越来越多的抗生素和非抗生素化合物有助于ARG的传播,强调了控制这种水平转移的潜在挑战。 开发阻断或延迟含有ARG质粒转移的共轭抑制剂是控制抗生素耐药性传播的有前途的策略。 尽管这种抑制剂很少见,但它们通常表现出相对较高的毒性和体内效力低,并且它们的作用机制却不足以理解。 在这里,我们研究了一种用于治疗疟疾的青蒿素衍生物(一种用于治疗疟疾)对结合的影响。 dha抑制了埃斯耐里希亚大肠杆菌中超过160倍的体外体外,在小鼠模型中,含有超过160倍的(INCX4质粒)在大肠杆菌中超过160倍(MCR-1)的结合,在体外的体外超过160倍(INCI2质粒)。 它还抑制了带有碳青霉烯电阻基因BLA NDM-5的Incx3质粒的转移,体外超过两倍。 检测细胞内三磷酸(ATP)和质子动力(PMF)以及转录组和代谢组分析的结合表明,DHA损害了电子传输链(ETC)的功能,通过抑制三碳酸(TCA)循环范围,并破坏分裂的PMF,并破坏pmf的临时性。 转移。 我们的发现为提供了新的见解质粒抗生素抗性基因(ARGS)的共轭转移是ARG传播的重要途径。据报道,越来越多的抗生素和非抗生素化合物有助于ARG的传播,强调了控制这种水平转移的潜在挑战。开发阻断或延迟含有ARG质粒转移的共轭抑制剂是控制抗生素耐药性传播的有前途的策略。尽管这种抑制剂很少见,但它们通常表现出相对较高的毒性和体内效力低,并且它们的作用机制却不足以理解。在这里,我们研究了一种用于治疗疟疾的青蒿素衍生物(一种用于治疗疟疾)对结合的影响。dha抑制了埃斯耐里希亚大肠杆菌中超过160倍的体外体外,在小鼠模型中,含有超过160倍的(INCX4质粒)在大肠杆菌中超过160倍(MCR-1)的结合,在体外的体外超过160倍(INCI2质粒)。它还抑制了带有碳青霉烯电阻基因BLA NDM-5的Incx3质粒的转移,体外超过两倍。检测细胞内三磷酸(ATP)和质子动力(PMF)以及转录组和代谢组分析的结合表明,DHA损害了电子传输链(ETC)的功能,通过抑制三碳酸(TCA)循环范围,并破坏分裂的PMF,并破坏pmf的临时性。 转移。我们的发现为此外,在DHA暴露期间,与结合和菌毛产生相关的基因的表达水平显着下调,这表明可以抑制结合的转移设备。